馬 麗，譚 華，周艷玲

（1．河北省承德市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，河北 承德 067000； 2．承德新愛民制藥有限公司，河北 承德 067000）

氣相色譜法測定胃痛寧片中小茴香油含量

馬 麗1，譚 華2，周艷玲2

（1．河北省承德市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，河北 承德 067000； 2．承德新愛民制藥有限公司，河北 承德 067000）

目的建立定量測定胃痛寧片中小茴香油含量的氣相色譜內(nèi)標(biāo)法。方法 DB-FFAP毛細(xì)管柱（30 m×0．32 mm，0．25 m），柱溫為145℃，進(jìn)樣口溫度為180℃，F(xiàn)ID檢測器溫度為230℃，載氣為高純氮，體積流量為0．8 mL／min，空氣體積流量為400 mL／min，氫氣體積流量為35 mL／min。結(jié)果小茴香油中主要成分反式茴香腦質(zhì)量濃度在0．002 189～0．035 03 g／L范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，平均加樣回收率為 100．12%，RSD為0．47%；對 14批次樣本測定了小茴香油的含量，含量差異極大，測定結(jié)果為每片含 0～0．147 4 mg。結(jié)論該法可有效監(jiān)控胃痛寧片中小茴香油的含量，將進(jìn)一步完善胃痛寧片質(zhì)量控制。

氣相色譜法；胃痛寧片；小茴香油；反式茴香腦；水楊酸甲酯；含量測定

胃痛寧片由蒲公英提取物、氫氧化鋁、甘草干浸膏、天仙子浸膏、龍膽粉、小茴香油(取小茴香，用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，即得)組方，具有清熱燥濕、理氣和胃、制酸止痛的功效，用于濕熱互結(jié)所致胃、十二指腸潰瘍，胃炎，癥見胃痙痛，胃酸過多等[1-2]。標(biāo)準(zhǔn)己有對甘草干浸膏和龍膽粉的薄層鑒別，蒲公英浸膏和氫氧化鋁的含量測定，但目前未見有對該制劑小茴香油測定的報(bào)道。為更好地控制該制劑質(zhì)量，參考文獻(xiàn)[3-6]，本試驗(yàn)中采用氣相色譜內(nèi)標(biāo)法測定胃痛寧片小茴香油中主要成分反式茴香腦的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 7890A型氣相色譜儀（美國 Agilent公司），包括 FID檢測器，CTC自動進(jìn)樣器，7890A型色譜工作站；C9860A型超聲波清洗儀（天津科貝爾光電技術(shù)有限公司，500 W，40 kHz）；XS105DU型分析天平（梅特勒-托利多有限公司）；UMV-2型多管漩渦混合器(北京優(yōu)晟聯(lián)合科技有限公司)。反式茴香腦對照品（批號為 11835-201102，含量以 99．7%計(jì)），水楊酸甲酯對照品（批號為 110707-201112，含量以 99．4計(jì)）均由中國藥品生物制品檢定所提供；乙酸乙酯（天津光復(fù)科技有限公司，批號為 20141110）；胃痛寧片來源于廠家及市場購買（A廠，批號分別為140701，140702，140703，140704，140705，141001，141002，141003，141004，140901，130602；B廠，批號為20140601；C廠，批號分別為140201，140202）。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱：DB-FFAP毛細(xì)管柱（30 m×0．32 mm，0．25 μm）；檢測器：火焰離子化檢測器(FID)；載氣：高純氮?dú)?；進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣；分流比：10∶1；進(jìn)樣量：1 μL；柱溫：145℃；進(jìn)樣口溫度180℃；檢測器溫度：230℃；體積流量：0．8 mL／min，空氣體積流量：400 mL／min，氫氣體積流量：35 mL／min。

2．2 溶液制備

精密稱取反式茴腦對照品12．28 mg，置50 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。精密稱取水楊酸甲酯對照品62．48 mg，置200 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解稀釋至刻度，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)溶液。取本品20片，除去包衣，研細(xì)，混勻，稱取約1．0 g，精密稱定，置25 mL容量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，加乙酸乙酯約20 mL，密塞，渦漩30 s，超聲處理30 min，放至室溫，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，0．45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按胃痛寧片生產(chǎn)方法制備不含小茴香油的空白樣品，同供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。2．3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：分別吸取2．2項(xiàng)下3種溶液及樣品制備用溶劑（乙酸乙酯）各1 μL注入氣相色譜儀測定。結(jié)果在與反式茴香腦相應(yīng)色譜峰保留時(shí)間處，陰性對照品溶液無色譜峰出現(xiàn)，對測定無干擾(見圖1)。

圖1 氣相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密量取反式茴香腦對照品溶液 0．25，0．50，1．00，2．00，4．00 mL，分別置25 mL容量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1．0 mL，加乙酸乙酯稀釋至刻度。按擬訂色譜條件測定，記錄色譜圖。以對照品的質(zhì)量濃度（X，g／L）為橫坐標(biāo)、對照品與內(nèi)標(biāo)物峰面積比（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y= 0．008 134 9 X+0．000 115 97，r=0．999 94(n=5)。結(jié)果表明，反式茴香腦質(zhì)量濃度在0．002 189～0．035 03 g／L范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn)：取同一對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣測定6次，以反式茴香腦與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值計(jì)算 RSD。結(jié)果的 RSD為0．8%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，分別于制備后 0，2，4，8，12，16，20，24 h時(shí)測定，以反式茴香腦與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值計(jì)算RSD。結(jié)果的 RSD為0．5%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取同一樣品6份，按供試品制備方法制備，進(jìn)樣測定。結(jié)果反式茴香腦含量的平均值為每片含0．068 5 mg，RSD為1．0%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密稱取己知含量的同一樣品9份，每份約1 g，分為低、中、高 3組，每組 3份，分別精密加入對照品溶液0．8，1．0，1．2 mL，按2．2項(xiàng)下制備供試品溶液，測定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

2．4 樣品含量測定

取14批胃痛寧片樣品，按2．2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按擬訂方法進(jìn)樣測定，根據(jù)色譜圖峰面積，以內(nèi)標(biāo)校正因子計(jì)算樣品含量。結(jié)果見表2。

表1 反式回香腦加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9)

表2 樣品含量測定結(jié)果（mg／片）

3 討論

校正因子測定：精密量取對照品貯備液1 mL，置25 mL容量瓶中；精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣，計(jì)算校正因子。

提取方法選擇：考察了不同超聲處理時(shí)間對提取效果的影響，結(jié)果表明，短于30 min時(shí)，隨超聲時(shí)間延長反式茴香腦含量增加，但超聲超過30 min后含量不再有明顯增加，最后確定采用渦漩30 s，超聲處理（500 W，40 kHz）30 min。

色譜條件選擇：選用了DB-FFAP，HP-INNOWax，Dimension PEG-20M 3根色譜柱進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果各組分出峰順序一致，分離度均達(dá)到要求；DB-FFAP保留時(shí)間相比更適宜，分離度良好。比較了不同分流比的出峰情況，分流比過小，溶劑峰過大，影響內(nèi)標(biāo)峰形，分流比過大，因反式茴香腦含量較低，靈敏度下降，故認(rèn)為10∶1的分流比更理想。

內(nèi)標(biāo)選擇：對比了外標(biāo)法測定小茴香油的含量，結(jié)果的 RSD較大；故本試驗(yàn)摸索了用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行測定，結(jié)果精密度明顯提高。本試驗(yàn)中選取了水楊酸甲酯和3-環(huán)己丙酸作為內(nèi)標(biāo)，依法測試，結(jié)果3-環(huán)己丙酸保留時(shí)間較長，而水楊酸甲酯與反式茴香腦能達(dá)到較好的分離度，且保留時(shí)間理想。本試驗(yàn)在前處理步驟即加入內(nèi)標(biāo)，亦可以校正前處理過程導(dǎo)致的誤差。

含量測定結(jié)果分析：14批小茴香油含量測定結(jié)果為每片0～0．147 2 mg，差異明顯。小茴香藥材采收后隨貯存時(shí)間延長，其揮發(fā)油含量降低，如企業(yè)使用陳舊藥材投料可能會影響其含量；小茴香中揮發(fā)油含量容易受環(huán)境影響，如貯存溫度高，揮發(fā)油亦有流失。上述因素都可能造成主要成分很低甚至為0，因此難以保證藥品質(zhì)量，對胃痛寧片中小茴香油進(jìn)行定量指標(biāo)的確定非常必要。同時(shí)，也應(yīng)督促生產(chǎn)廠家購買藥材或投料前提前對小茴香中揮發(fā)油含量進(jìn)行測定，掌握小茴香藥材質(zhì)量。本試驗(yàn)中用內(nèi)標(biāo)定量測定小茴香油的含量，前處理簡便，方法專屬，重現(xiàn)性好，具有較強(qiáng)實(shí)用性，對該品種質(zhì)量控制有一定的借鑒作用。

[1]WS3-B-3287-98，中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第十七冊)[S]．

[2]YBZ00612005，國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）[S]．

[3]吳玫涵，聶凌云．氣相色譜-質(zhì)譜法分析不同產(chǎn)地小茴香藥材揮發(fā)油成分[J]．藥物分析雜志，2001，21(6):415-418．

[4]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典（一部）[M]．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010：51．

[5]樓之岑，秦 波．常用中藥材品種整理和質(zhì)量研究（第6冊）[M]．北京：北京大學(xué)醫(yī)學(xué)出版社，2003：549-569．

[6]帕提古麗·馬合木提，高 莉．時(shí)間對小茴香揮發(fā)油成分的影響[J]．食品科學(xué)，2005，26（11）：190-191．

Determination of Fennel Oil in Weitongning Tablets by GC

Ma Li1,Tan Hua2,Zhou Yanling2
（1．Chengde Institute for Food and Drug Control,Chengde,Hebei,China 067000; 2．Chengde Xinaimin Pharmaceuticai Co,Hebei Normal University, Chengde,Hebei,China 067000)

Objective To establish a GC internal reference method for the determination of fennel oil in Weitongning Tablets．M ethods DB-FFAP Capillary column(30 mm×0．32 mm,0．25 μm)at 145℃;the injection entrance temperature was 180℃ and FID detector temperature was 230℃;high purity nitrogen was used as carrier gas at 0．8 mL／min flow．The air flow was 400 mL／min and the hydrogen was 35 mL／min．Results The trans-anethole,which was the main component of fennel oil,indicated a great linear range of between 0．002 189-0．035 03 g／L and the recovery rate was 100．12%，RSD was 0．47%．The contents of fennel oil were 0-0．147 4 mg per pill in 14 batches of Weitongning Tablets．Conclusion The method is efficient to control the content of fennel oil and could improve the quality control of Weitongning Tablets．

GC;Weitongning Tablets;fennel oil;trans-anethole;methyl salicylate;content determination

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)21-0127-03

馬麗，女，副主任藥師，主要從事藥品檢驗(yàn)工作，（電話）0314-2251948（電子信箱）cdyjml＠sina．com。

2015-05-27)