不同產(chǎn)地不同采收時間楓香樹葉中異槲皮苷和山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量的比較*

★鐘瑞建1*吳安明2周國平1鄢慶偉1付輝政1*何陽虎2

(1.江西省藥品檢驗檢測研究院/江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術(shù)研究中心南昌 330029；2.江西天施康中藥股份有限公司江西 鷹潭 335000)

摘要：目的：比較不同產(chǎn)地、不同采收期楓香樹葉中異槲皮苷和山奈酚-3-O-蕓香糖苷的含量。方法：采收相同產(chǎn)地下不同采收期和相同采收期下不同產(chǎn)地的楓香樹葉，稱重、曬干，并用HPLC 法測定異槲皮苷和山奈酚-3-O-蕓香糖苷的含量。結(jié)果：24批楓香樹葉,同一采收期中江西余江、江西鷹潭、江西弋陽三個產(chǎn)地的楓香樹葉異槲皮苷和山奈酚-3-O-蕓香糖苷的總含量均較高；同一產(chǎn)地的8個采收期中,以5,6,7月份采收的楓香樹葉異槲皮苷和山奈酚-3-O-蕓香糖苷的總含量較高,12月份采收的異槲皮苷和山奈酚-3-O-蕓香糖苷的總含量最低。結(jié)論：不同產(chǎn)地、不同采收期楓香樹葉中異槲皮苷和山奈酚-3-O-蕓香糖苷的含量存在明顯差異,應(yīng)注意生長環(huán)境和采收季節(jié)對楓香樹葉藥材質(zhì)量的影響。

關(guān)鍵詞：楓香樹葉；異槲皮苷；山奈酚-3-O-蕓香糖苷；HPLC 法

楓香樹葉為金縷梅科楓香屬植物楓香LiquidambarformosanaHance的葉，性平，味辛苦，具有祛風(fēng)除濕、行氣止痛、解毒之功效。民間用于治療急性胃腸炎、痢疾、產(chǎn)后風(fēng)等疾病，其根、樹皮、樹脂、葉均可入藥[1-2]。 楓香樹葉的主要成分有黃酮和酚酸等類化合物以及微量元素等[3-6]。楓香樹葉原標(biāo)準(zhǔn)收載于1996 年版《江西省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》，該標(biāo)準(zhǔn)項下僅有性狀和顯微鑒別項[1]。作者以楓香樹葉主要成分異槲皮苷和山柰酚-3-O-蕓香糖苷為指標(biāo)成分對楓香樹葉進行了定性和定量研究[7]，提高后的標(biāo)準(zhǔn)已收入2014版《江西省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》[8]。在1996 年版《江西省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定楓香樹葉夏季采收，但目前市場需求巨大，難以滿足實際生產(chǎn)需求，且未見不同產(chǎn)地不同采收期楓香樹葉中成分含量差異的報道。本實驗選擇異槲皮苷和山奈酚-3-O-蕓香糖苷2個指標(biāo)成分，對江西余江、江西鷹潭、江西弋陽3個主要產(chǎn)地不同采收時間的楓香樹葉中的異槲皮苷及山奈酚-3-O-蕓香糖苷的含量進行了測定，以期明確其成分含量差異及變化，為擴大楓香樹葉藥源及合理采收提供理論依據(jù)。

1 材料、儀器與試劑

1.1 材料 楓香樹葉藥材共24批，為2014年5月至12月，采摘于江西余江、江西鷹潭、江西上饒三個產(chǎn)地，江西省藥品檢驗檢測研究院袁貴平主任中藥師鑒定為金縷梅科植物楓香樹LiquidambarformosanaHance 的葉。標(biāo)本存于江西省藥品檢驗檢測研究院。

1.2 儀器 202-OAB型電熱恒溫干燥箱(天津泰斯特儀器有限公司)、DHG-9101-39A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司)、HH-4 數(shù)顯恒溫水浴鍋(國華電器有限公司)、AB265-S 萬分之一分析天(Switzerland)、ZF-2型三用紫外儀(上海市安亭電子儀器廠)、電子顯微鏡、Agilent1100高效液相、Agilent1200高效液相(美國Agilent)、MHXS-4-10 型高溫電爐儀(上海南陽儀器有限公司)。

1.3 試劑 乙腈為色譜純，水為娃哈哈飲用純凈水，其他試劑均為分析純，對照品異槲皮苷(批號：131227)，山奈酚-3-O-蕓香糖苷(批號：140120)，均為從上海融禾醫(yī)藥科技有限公司購買。

2 方法與結(jié)果

2.1 異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷的含量測定

2.1.1色譜條件色譜柱：YMC-Pack ODS-A ( 150 mm × 4.6 mm，5 μm) ；流動相：乙腈-0.2%磷酸水溶液(13∶87)；檢測波長：351 nm；柱溫：25℃；流速：1.0 mL /min；進樣量：10 μL。

2.1.2對照品溶液的制備精密稱取異槲皮苷和山柰酚-3-O-蕓香糖苷的對照品適量，置50 mL 量瓶中，加甲醇溶解并定容，搖勻，得含異槲皮苷0.011mg/mL和山柰酚-3-O-蕓香糖苷0.020 mg/mL 的混合對照品溶液。

2.1.3供試品溶液的制備取楓香樹葉粉末( 過4 號篩)約1. 0 g，精密稱定，置100 mL錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，搖勻，稱定重量，回流提取1.5 h，取出放冷，稱重，用甲醇補足減失重量，搖勻，過濾，精密量取續(xù)濾液25 mL 于蒸發(fā)皿中，蒸干，殘渣用20 mL水使溶解，先用石油醚提取3次，每次20 mL，棄去石油醚液，再用乙酸乙酯提取3次，每次20 mL，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，殘渣用甲醇溶解置10mL 量瓶中，定容至刻度，搖勻，即得。

2.2 異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密吸取“2.1.2”項下混合對照品溶液，按上述色譜條件進樣分析，以對照品溶液濃度X( μg/mL) 為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明：異槲皮苷和山柰酚-3-O-蕓香糖苷濃度分別在5.485 ～ 54.452 μg/mL和4.561～45.613 μg/mL范圍內(nèi)，與峰面積呈良好線性關(guān)系，回歸方程分別為：Y= 19.751X- 14.152 ，r= 0. 9999；Y= 19.831X- 3.877 ,r= 0.9999。

2.3 樣品測定 取不同產(chǎn)地、不同采收期的楓香樹葉，按“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件測定，根據(jù)峰面積計算樣品中異槲皮苷和山柰酚-3-O-蕓香糖苷的含量。結(jié)果見表1-3。

從表 1可知，2014年5-11月，江西余江楓香樹的樹上葉子(01)中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量，隨著時間的推移，基本平穩(wěn)，表明夏、秋季江西余江楓香樹的樹上葉子(01)中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量基本穩(wěn)定。2014 年 12 月，江西余江楓香樹的落葉(02)中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷的含量較低，也比樹上葉子(01)含量低很多，結(jié)合該批次藥材采收前的天氣情況，應(yīng)是淋了雨所致。表明楓香樹葉中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量可能與淋雨水有較大關(guān)系。

表1　江西余江不同采收期楓香樹葉異槲皮苷

注：YJ14120802批次藥材在2014年11月 20日觀察時，葉子正由黃變紅，已經(jīng)開始集中掉落，2014年12月 8日采收時觀察，葉子已經(jīng)全部掉落。17天期間，江西余江2014年12月3日天氣為小雨-陣雨，下了陣雨。

表2　江西鷹潭不同采收期楓香樹葉異槲皮苷

注：YT14120702批次藥材在2014年11月10日觀察時，葉子正由黃變紅，已經(jīng)開始掉落，2014年12月7日采收時觀察，葉子已經(jīng)部分掉落。27天期間，江西鷹潭2014年12月3日天氣為陰-雨，下了小雨。

從表2可知，2014年5一11月，江西鷹潭楓香樹的樹上葉子(01)中異槲皮苷含量基本平穩(wěn)，但山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量隨著時間的推移，略有下降趨勢，表明夏、秋季江西鷹潭楓香樹的樹上葉子(01)中異槲皮苷含量基本穩(wěn)定，而山奈酚-3-O-蕓香糖苷在葉子較嫩時含量較高，隨后基本平穩(wěn)。2014年12月，江西鷹潭楓香樹的落葉(02)中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷的含量較低，也比樹上葉子(01)含量低很多，結(jié)合該批次藥材采收前的天氣情況，應(yīng)是淋了雨所致。表明楓香樹葉中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量可能與淋雨水有較大關(guān)系。

表3　江西上饒不同采收期楓香樹葉異槲皮苷

注：YY14120502批次藥材在2014年11月18日觀察時，葉子正由黃變紅，已經(jīng)開始掉落，2014年12月5日采收時觀察，葉子已經(jīng)部分掉落。17天期間，江西鷹潭2014年12月3日天氣為陰-雨，下了小雨。

從表3可知，2014年5一11月，江西弋陽楓香樹的樹上葉子(01)中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量基本平穩(wěn)，表明夏、秋季江西弋陽楓香樹的樹上葉子(01)中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量基本穩(wěn)定。2014 年 12 月，江西弋陽楓香樹的落葉(02)中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷的含量較低，也比樹上葉子(01)含量低很多，結(jié)合該批次藥材采收前的天氣情況，應(yīng)是淋了雨所致。表明楓香樹葉中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量可能與淋雨水有較大關(guān)系。

3 結(jié)論和討論

2014 年 5一11 月，江西余江、江西鷹潭、江西弋陽三個產(chǎn)地的楓香樹的樹上葉子中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量總和均較高，高于2014版《江西省中藥材標(biāo)準(zhǔn)》中楓香樹葉含量測定項下的規(guī)定。表明江西余江、江西鷹潭、江西弋陽地區(qū)楓香樹的樹上葉子藥材質(zhì)量較好，異槲皮苷、山柰酚-3-O-蕓香糖苷含量均能滿足楓香樹葉含量測定項下的規(guī)定。

2014 年 5一11 月，江西余江、江西鷹潭、江西弋陽楓香樹的樹上葉子中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量隨時間推移，含量基本穩(wěn)定，表明江西余江、江西鷹潭、江西弋陽的楓香樹的樹上葉子中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量隨著時間的推移，較穩(wěn)定，這為增加楓香樹葉秋季采收來源提供了數(shù)據(jù)支持。

2014 年 12 月，江西余江、江西鷹潭、江西弋陽三個產(chǎn)地的楓香樹的落葉中異槲皮苷、山奈酚-3-O-蕓香糖苷含量均較低，表明鷹江西余江、江西鷹潭、江西弋陽三個產(chǎn)地的地上落葉需要及時采收，以免被雨淋，導(dǎo)致含量不合格。

參考文獻

[1]江西省衛(wèi)生廳. 江西省中藥材標(biāo)準(zhǔn)[S]. 南昌：江西科學(xué)技術(shù)出版社，1996: 130.

[2] 江蘇新醫(yī)學(xué)院編. 中藥大辭典(上冊)[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1985:1 261.

[3] 劉亞敏，劉玉民，馬明，等. 楓香樹葉總 酮提取工藝優(yōu)化及含量動態(tài)變化[J]. 食品科學(xué)，2010，31(4):35.

[4] 謝躍生，鄭小軍， 鄭麗蓉，等. 楓香樹葉中某些水溶性微量元素的分析[J].廣西師院學(xué)報 ，2000，17(3) : 5.

[5] 劉志林，倪士峰， 劉惠，等. 楓香成分及其生物學(xué)活性研究進展[J].西北藥學(xué)雜志，2009，24(6):513.

[6]容若. 楓香樹屬植物化學(xué)成分及其藥理活性研究進展[N]. 中國中醫(yī)藥報，2003-04-09.

[7]袁惠，鐘瑞建，付輝政，等. RP-HPLC 法同時測定楓香樹葉藥材中 3 個主要黃酮苷成分的含量[J]. 藥物分析雜志，2014，34(6)：1 021-1 024.

[8] 江西省衛(wèi)生廳. 江西省中藥材標(biāo)準(zhǔn)[S]. 南昌：江西科學(xué)技術(shù)出版社，2014: 213.

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收稿日期：(2015-05-07)編輯：曾文雪

中圖分類號：R284.2

文獻標(biāo)識碼：A

通信作者:付輝政，博士，助理研究員。研究方向：中藥活性成分及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。Tel:0791-86217386，E-mail:fhzfhz620@sohu.com。

基金項目:第一作者: 鐘瑞建(1963—)，主任藥師。研究方向：中藥活性成分及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。Tel:0791-88158786，E-mail: zhongrj@jxfda.gov.cn。