張藝蓓，岳田利，喬海鷗，賈 如，蔣旭鵬，李 璐

(1 西北農(nóng)林科技大學 食品科學與工程學院，陜西 楊凌 712100； 2 陜西省疾病預防控制中心 理化檢驗室，陜西 西安 710054)

2013年陜西市售水產(chǎn)品中孔雀石綠和結晶紫的檢測

張藝蓓1，岳田利1，喬海鷗2，賈 如1，蔣旭鵬1，李 璐1

(1 西北農(nóng)林科技大學 食品科學與工程學院，陜西 楊凌 712100； 2 陜西省疾病預防控制中心 理化檢驗室，陜西 西安 710054)

【目的】 對2013年陜西省市售水產(chǎn)品中的4種獸藥殘留進行檢測研究，為保證當?shù)厥称钒踩峁﹨⒖肌！痉椒ā?隨機抽取16種購自陜西省10個地市批發(fā)市場的120份魚樣品，采集魚樣可食部分勻漿后用乙腈提取，經(jīng)中性氧化鋁凈化，采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對獸藥孔雀石綠、結晶紫及其代謝產(chǎn)物隱性孔雀石綠、隱性結晶紫的殘留情況進行檢測和定性、定量分析，統(tǒng)計4種獸藥殘留的總檢出率、16種樣品中獸藥殘留的檢出率、10個地市獸藥殘留的檢出率、4種獸藥殘留的平均水平及同一樣品中4種獸藥的混配使用情況?！窘Y果】 16種120份魚肉樣品中4種獸藥的總檢出率為4.6%，其中隱性結晶紫未檢出；120份魚肉樣品獸藥殘留的樣品檢出率為15.8%，其中梭邊魚、鮭魚、鯉魚、鯰魚和草魚獸藥殘留的檢出率分別為100.0%，100.0%，33.3%，15.4%和11.8%，高于2011年的全國平均水平(9.0%)，其余11種魚樣中未檢出獸藥殘留；除榆林外的9個地市市售魚樣中均檢出獸藥殘留，其中商洛、咸陽的檢出率最高，均為10.4%；來自商洛的鯰魚樣品同時檢出多種獸藥殘留，說明商洛存在多種獸藥混配使用現(xiàn)象?！窘Y論】 陜西省市售水產(chǎn)品中4種獸藥殘留的總檢出率并不高，但市場占有率較高的鯉魚、鯰魚、草魚樣品中均有獸藥殘留，且檢出率均較高；10個地市中有9個地市市售水產(chǎn)品中均有獸藥檢出，且存在多種獸藥混配使用情況，對人體健康具有潛在威脅，應當引起重視。

水產(chǎn)品；孔雀石綠；結晶紫；獸藥殘留檢測；陜西省

孔雀石綠(Malachite green,MG)和結晶紫(Crystal violet，CV)屬于三苯甲烷類物質(zhì)，是紡織工藝中使用的染料，曾因其具有消毒和殺菌作用而在水產(chǎn)養(yǎng)殖和運輸過程中作為驅(qū)蟲劑和殺菌劑使用，以防治魚類水霉病、爛腮病及寄生蟲病，延長魚類的存活時間[1]。MG是一種帶有金屬光澤的綠色結晶體，化學名稱為四甲基代二氨基三苯甲烷(Triphenylmethane)，化學式為C23H25ClN2，易溶于水、甲醇、乙醇和戊醇，水溶液呈藍綠色。CV是一種帶有金屬光澤的深綠色固體，化學式為C25H30ClN3，與孔雀石綠的結構相似。二者進入生物體內(nèi)后，可以通過生物轉化還原成毒性更大的隱性代謝產(chǎn)物如隱性孔雀石綠(Leuco malachite green,LMG)和隱性結晶紫(Leuco crystal violet,LCV)[2]。這兩種隱性代謝物具有較高的親脂性，在魚類脂肪組織中代謝速度極慢，易形成穩(wěn)定的殘留，有明顯的蓄積現(xiàn)象[3-6]。研究發(fā)現(xiàn)，MG、CV、LMG、LCV的化學官能團——三苯甲烷是一種致癌物質(zhì)，具有高毒、高殘留的特性，可通過食物鏈對哺乳動物和人類產(chǎn)生“三致”作用，對生物體組織、生殖、免疫系統(tǒng)均有影響[7]。目前，這類獸藥大范圍使用的原因主要有兩個：一是其價格低廉，抗菌效果好；二是在治療魚類水霉病方面藥物種類有限，尚未有理想的替代品[8]。

目前，美國、加拿大、日本和歐盟的許多國家都將MG和CV列為漁用禁用藥物[9]。2001年，中國在《無公害食品漁用藥物使用準則》(農(nóng)業(yè)行業(yè)標準NY 5071-2001)中將MG列為漁用禁用藥物；2002年，農(nóng)業(yè)部同時將MG和CV列入《食品動物禁用的獸藥及其化合物清單》。自2006年開始，我國湛江[10]、珠海[11]、寧波[12]、武漢[13]、福建[14]、湖北[15]和深圳[16]等地區(qū)陸續(xù)報道了水產(chǎn)品中MG的殘留情況，只有湛江出口水產(chǎn)品未檢出MG，其余幾個城市的檢出率為6.5%～23.2%。陜西省地處內(nèi)陸腹地，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)并不發(fā)達，但卻是水產(chǎn)消費大省，草魚、鰱魚、鯽魚、羅非魚為當?shù)刂饕酿B(yǎng)殖魚類。自2011年開始，我國將養(yǎng)殖魚中MG及其代謝物的監(jiān)測列入國家食品安全風險監(jiān)測計劃，陜西省也開展了養(yǎng)殖魚中MG和CV的檢測工作。

對于MG和CV的檢測，有許多不同的方法，如高效液相色譜法、共振瑞利散射法、同位素內(nèi)標測定法和薄層色譜法、液相色譜-線性離子阱質(zhì)譜法、液相色譜-熒光檢測器法或液相色譜-質(zhì)譜法等[17-21]。但這些方法的靈敏度、選擇性和分析通量還存在不足之處，高效液相色譜對樣品的凈化要求高，操作步驟繁瑣、耗時長，不利于準確定性和定量。而超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(Ultra-performance Liquid Chromatography-tandem Mass Spectrometry,UPLC-MS/MS)是近年來發(fā)展起來的一種新技術，采用三重串聯(lián)四極桿質(zhì)譜或離子阱作為檢測器，代替高效液相色譜的紫外檢測器，可發(fā)揮液相色譜較快的分析速度、高分離度與串聯(lián)質(zhì)譜的高選擇性、高靈敏度的優(yōu)勢，能較好地進行目標化合物的定性和定量分析。

本研究通過隨機抽樣和定點抽樣，采用高效的UPLC-MS/MS方法，對陜西省10個地市市售水產(chǎn)品中MG、CV及其代謝物的殘留進行檢測，并進行溯源分析，以了解陜西省市售水產(chǎn)品的安全狀況，并為化學污染物的暴露評估提供參考。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

UltiMateTM3000超高效液相色譜儀，美國Dionex公司；API-3200三重四極桿質(zhì)譜儀，美國Applied Biosystems公司。

孔雀石綠標準品(MG)、隱性孔雀石綠標準品(LMG)、結晶紫標準品(CV)、隱性結晶紫標準品(LCV)、孔雀石綠內(nèi)標標準品(d5-MG)、隱性孔雀石綠內(nèi)標標準品(d6-LMG)、結晶紫內(nèi)標標準品(d5-CV)、隱性結晶紫內(nèi)標標準品(d6-LCV)，純度99%,美國Sigma-Aldrich公司；甲酸、乙腈、乙酸銨，色譜純,德國Merck公司；中性氧化鋁萃取小柱，美國Supelco公司；Millipore A10純水系統(tǒng)，美國Millipore公司。

1.2 樣品來源與處理

1.2.1 采 樣 根據(jù)全國食品污染物監(jiān)測網(wǎng)中規(guī)定的監(jiān)測項目和監(jiān)測種類，結合陜西省經(jīng)濟發(fā)展水平、地域特征和人口分布情況，在西安、寶雞、安康、延安、咸陽、渭南、商洛、銅川、漢中和榆林共選取10個監(jiān)測點，采用隨機抽樣和定點抽樣相結合的方法，對每個監(jiān)測點隨機選擇2個農(nóng)貿(mào)市場進行隨機采樣。抽樣品種涵蓋草魚、鯉魚、鯽魚等當?shù)厥袌錾箱N售的市民大宗食用魚類共16個品種120份樣品。采樣后立即密封并及時運回實驗室冷藏。各地市采樣品種及數(shù)量見表1。

1.2.2 樣品提取和凈化 取魚樣可食部分勻漿，準確稱取5 g樣品于50 mL塑料離心管中，添加50 μL混合同位素內(nèi)標中間液，加入提取液乙腈25 mL，渦旋混合2 min，10 000 r/min離心10 min，收集上清液于100 mL玻璃離心管中，待凈化。

用5 mL乙腈活化中性氧化鋁萃取小柱，在氮吹儀上用氮氣吹干；取5 mL上清液，加載在中性氧化鋁小柱上，收集濾液，再用4 mL乙腈淋洗小柱，再收集濾液，將2次濾液合并；在氮吹儀上于50 ℃用氮氣吹至近干，用乙腈水溶液(V(乙腈)∶V(水)=50∶50)溶解殘渣，并定容至0.5 mL，0.22 μm膜過濾，液質(zhì)聯(lián)用儀上機檢測。

1.3 檢測條件

1.3.1 色譜條件 色譜柱：Dionex Acclaim?RRSLC C8(2.1 mm×100 mm，2.2 μm)；流動相A為乙腈，流動相B為含體積分數(shù)0.1%甲酸的5 mmol/L乙酸銨水溶液；流速0.3 mL/min；柱溫35 ℃；進樣體積10 μL。

1.3.2 質(zhì)譜條件 電噴霧ESI離子源(正離子)；掃描方式為多反應監(jiān)測(MRM)；電噴霧電壓5 500 V；氣簾氣壓力137.9 kPa；霧化氣壓力275.8 kPa；輔助氣壓力275.8 kPa；離子源溫度450 ℃；碰撞電壓(CE)、去簇電壓(DP)、入口電壓(EP)、碰撞室入口電壓(CEP)、碰撞室出口電壓(CXP)等參數(shù)見表2。

1.4 標準溶液的制備

(1)標準儲備液(1 mg/mL)。精確稱取MG、LMG、CV、LCV標準品10 mg分別置于4個10 mL棕色容量瓶中，用乙腈定容至刻度，-18 ℃保存。(2)混合標準工作液(100 ng/mL)。分別準確移取1 mg/mL的MG、LMG、CV、LCV標準儲備液0.1 mL，用乙腈稀釋成1 μg/mL的混合標準中間液，再取混合標準中間液用乙腈稀釋成100 ng/mL的混合標準工作液，4 ℃保存。(3)內(nèi)標儲備液(1 mg/mL)。分別精確稱取孔雀石綠、隱形孔雀石綠同位素內(nèi)標標準品d5-MG、d6-LMG、d5-CV、d6- LCV 10 mg(精確到0.01 mg)于4個10 mL棕色容量瓶中，分別用乙腈定容至刻度，-18 ℃保存。(4)混合內(nèi)標工作液(1 ng/mL)。分別準確移取1 mg/mL 的上述4種內(nèi)標儲備溶液0.1 mL，用乙腈稀釋成100 ng/mL的混合內(nèi)標中間液，再取混合內(nèi)標中間液用乙腈稀釋成1 ng/mL的混合內(nèi)標工作液，4 ℃保存。(5)標準系列溶液。分別取100 ng/mL 的混合標準工作液0.1，0.5，1，2，5，10 mL，置于10 mL容量瓶中，用乙腈水溶液(V(乙腈)∶V(水)=50∶50)定容至刻度，得到質(zhì)量濃度依次為1，5，10，20，50，100 ng/mL的標準系列溶液。

注：*為定量離子對。

Note:* means quantifier transition.

1.5 標準曲線及最低檢出限

采用內(nèi)標法進行定量，由標準儲備液配制質(zhì)量濃度為1，5，10，20，50，100 ng/mL的標準系列溶液，在空白魚肉樣品中添加MG、LMG、CV、LCV標準系列溶液，分別取10 μL上機測定，進行UPLC-MS/ MS分析，以分析物質(zhì)量濃度與內(nèi)標物質(zhì)量濃度的比值為橫坐標(X)，以分析物峰面積與內(nèi)標物峰面積的比值為縱坐標(Y)，繪制標準曲線。分別按信噪比大于3和信噪比大于10計算本方法的檢出限(LOD)和定量限(LOQ)。

1.6 加標回收率和精密度分析

以3組陰性樣品為測試樣品，將MG、LMG、CV、LCV的添加質(zhì)量濃度均設為50，100和200 ng/mL 3個水平，每個添加水平在相同的試驗條件下做6個平行樣，對照標準工作曲線計算每個樣品的質(zhì)量濃度，并計算加標回收率和相對標準偏差(RSD)。

1.7 樣品測定

在優(yōu)化的試驗條件下，對120份經(jīng)過前處理的實際樣品進行UPLC-MS/MS上機測定，對4種獸藥的檢測結果進行定量，上樣量為10 μL。

1.8 待測物含量的計算

樣品中待測物含量的計算公式為：

式中:W樣為樣品中待測物的含量，μg/kg；C為測定液中待測物的質(zhì)量濃度，ng/mL；m為樣品質(zhì)量，g；V0為樣品定容體積，mL；V1為提取液總體積，mL；V2為過柱總體積，mL。

1.9 檢測結果判定及分析

根據(jù)檢測的結果分別對所有水產(chǎn)品中4種獸藥殘留的總檢出率、16種樣品中獸藥殘留的檢出率、10個地市獸藥殘留的檢出率、4種獸藥殘留的平均水平及同一樣品中的獸藥混配使用情況進行統(tǒng)計與分析。

2 結果與分析

2.1 標準曲線及最低檢出限

MG、LMG、CV和LCV 4種待測獸藥UPLC-MS/MS分析結果的線性回歸方程、相關系數(shù)和線性區(qū)間如表3所示。表3顯示，MG、LMG在質(zhì)量濃度為1～50 ng/mL時呈現(xiàn)良好的線性關系，CV、LCV在質(zhì)量濃度為1～100 ng/mL時呈現(xiàn)良好的線性關系。4種物質(zhì)的檢出限為0.05 μg/kg，定量限為0.15 μg/kg，表明本分析方法具有良好的線性關系，線性范圍寬，靈敏度高。

2.2 加標回收率和精密度

以陰性樣品為測試樣品，在陰性樣品中分別加入50，100，200 ng/mL共3個水平的MG、LMG、CV、LCV，并進行上機測定，計算的加標回收率和相對標準偏差如表4所示。表4表明,加標回收率為87.8%～110.8%，相對標準偏差為1.98%～4.32%。

2.3 水產(chǎn)品中4種獸藥殘留的檢測

表5顯示，120份魚肉樣品中MG、LMG、CV、LCV 4種獸藥的總檢出率為4.6%，MG、LMG、CV的檢出率分別為1.7%，6.7%，10.0%，未檢出LCV，其中CV的檢出率最高。

2.4 16種水產(chǎn)品中獸藥殘留的分析

表6表明，16種水產(chǎn)樣品中，MG、LMG、CV、LCV 4種獸藥殘留的樣品檢出率為15.8%。其中梭邊魚、鮭魚、鯉魚、鯰魚、草魚等5種樣品中均有獸藥殘留檢出，其檢出率分別為100.0%，100.0%，33.3%，15.4%和11.8%。在13份鯰魚樣品中共檢出了3種獸藥，33份鯉魚樣品共檢出了2種獸藥，草魚、梭邊魚、鮭魚分別只檢出1種獸藥。其余11種魚種未檢出獸藥殘留。

2.5 10地市水產(chǎn)品中獸藥殘留的分析

由表7可以看出，10個采樣地市中，除了榆林以外，其他9個地市魚樣中均檢出MG、LMG、CV、LCV殘留，商洛、咸陽、銅川、安康、延安、渭南、寶雞、漢中、西安的檢出率分別為10.4%，10.4%，6.3%，6.3%，4.2%，2.1%，2.1%，2.1%和2.1%。其中商洛檢出了3種藥物，檢出率最高為10.4%；而咸陽的12份樣品只檢出了1種藥物，但檢出份數(shù)是5份，與商洛的檢出率相同，均高達10.4%；渭南、寶雞、漢中、西安均只有1份樣品檢出藥物，檢出率均為2.1%。

2.6 水產(chǎn)品中4種獸藥殘留的平均水平

由表8可知，在檢出藥物的梭邊魚、鮭魚、鯰魚、鯉魚、草魚5種樣品中，僅有的1份梭邊魚樣品檢出了CV殘留，CV的質(zhì)量濃度為1.89 μg/kg；僅有的1份鮭魚樣品檢出LMG殘留，且其質(zhì)量濃度較高，為2.93 μg/kg；13份鯰魚樣品中MG、LMG、CV均有檢出，平均質(zhì)量濃度分別為0.34，2.13，1.86 μg/kg；33份鯉魚樣品檢出了LMG、CV，平均質(zhì)量濃度分別為1.16，0.46 μg/kg；34份草魚樣品只檢出CV，平均質(zhì)量濃度為0.15 μg/kg。

2.7 同一樣品中獸藥混配的分析

表9顯示，在檢出獸藥的梭邊魚、鮭魚、鯰魚、鯉魚、草魚5種樣品中，并未在1份樣品中同時檢出4種藥物成分，在梭邊魚、鮭魚、鯉魚、草魚樣品中各檢出1種藥物，但在鯰魚樣品中同時檢出多種藥物，13份鯰魚樣品中，有1份同時檢出了MG、LMG、CV 3種藥物，另1份同時檢出了MG、LMG 2種藥物，這2份樣品均來自商洛市，說明商洛市在鯰魚養(yǎng)殖或運輸過程中存在獸藥混配使用現(xiàn)象。

3 討 論

3.1 MG、LMG、CV、LCV的檢測方法

目前，用于MG和CV的檢測方法主要有液相色譜法(HPLC)、液相色譜-質(zhì)譜法(LC-MS)和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)[22-27]。本研究參照GB/T 19857-2005《水產(chǎn)品中孔雀石綠和結晶紫殘留量的測定》、SC/T 3021-2004《水產(chǎn)品中孔雀石綠殘留量的測定:液相色譜法》對檢測方法進行了優(yōu)化[28-29]，采用高效的UPLC-MS/MS法成功完成了水產(chǎn)品中獸藥MG、CV及其代謝物殘留的檢測。

由于MG和CV在水產(chǎn)品中主要以隱性代謝物LMG和LCV的形式存在，具有很好的親脂性，而且水產(chǎn)品基質(zhì)化學成分復雜，脂肪含量較高，不利于目標分析物的提取和凈化。在樣品的前處理過程中，本研究利用中性氧化鋁固相萃取凈化，去除酸性雜質(zhì)，消除了油脂和基質(zhì)的影響，有效保護了色譜柱和質(zhì)譜儀，提高了檢測方法的靈敏度。同時，本研究采用內(nèi)標定量法配制系列標準溶液，制作標準曲線，且曲線具有良好的線性關系，在信噪比>3時的檢測限達到0.05 μg/kg，優(yōu)于歐盟2004年(2004/25/EC)提出的檢測限要求(2 ng/g)；陰性樣品加標回收試驗表明，平均加標回收率為87.8%～110.8%，相對標準偏差均小于4.32%，達到了較好的準確度及精密度，可以實現(xiàn)良好的質(zhì)量控制。

在傳統(tǒng)的檢測方法中，為了能同時檢測顯色母體和隱性代謝物，通常在液相色譜分離后，利用氧化鉛進行柱后衍生，將隱性代謝物LMG、LCV轉化為在可見光波長下有強吸收性的顯色母體MG和CV[17,30]。但是衍生柱填料的配比容易受到流動相和樣品基質(zhì)的影響，衍生柱的壽命也會影響檢測效果，進而影響檢測結果的準確性。本研究未使用氧化鉛柱，避免了衍生柱質(zhì)量不穩(wěn)定對檢測結果的影響。

3.2 陜西省水產(chǎn)品獸藥殘留現(xiàn)狀評估

本次抽檢結果顯示，來自陜西省10個地市的16個品種120份魚樣中，4種獸藥的總檢出率為 4.6%，MG、LMG、CV的檢出率分別為1.7%，6.7%和10.0%，LCV未檢出。120份魚肉樣品中有19份樣品檢出了獸藥殘留，樣品檢出率為15.8%，高于2011年農(nóng)業(yè)部有關全國水產(chǎn)品質(zhì)量安全的例行監(jiān)測結果(平均檢出率9.0%)[31]，16個品種魚樣中有5種(梭邊魚、鮭魚、鯉魚、鯰魚、草魚)魚樣檢出獸藥殘留。分析認為，導致檢出率較高的原因主要是梭邊魚和鮭魚樣品采樣量各1份，其中分別檢出了CV和LMG，檢出率均為100%，但并不能簡單地認為梭邊魚和鮭魚安全性低；相應地，鯉魚、鯰魚、草魚的采樣量較多，雖其檢出率較低，但也不可認為鯉魚、鯰魚、草魚的安全性較高。其余11種魚樣未檢出獸藥殘留，可能是由于部分魚種價格貴、數(shù)量少、銷量小，且多由外省運購，且采樣份數(shù)少，因此需要加大檢測頻率和樣本量。

本次檢測中，MG的檢出率為1.7%，LMG的檢出率為6.7%，均低于2007年王麗玲等[11]報道的珠海市餐廳池養(yǎng)水產(chǎn)品中MG殘留的調(diào)查結果(10.2%)，也低于2013年傅武勝等[31]報道的廣東、福建水產(chǎn)品中MG的檢測結果 (56.1%)。LMG的檢出率高于MG，說明多數(shù)MG在生物體內(nèi)轉化成了LMG，LMG在魚體內(nèi)的清除速率顯著慢于MG。有研究顯示，在鲇魚肌肉中，MG和LMG的半衰期分別是2.8和10 d，在虹鱒魚肌肉中MG的半衰期是1.5 d，LMG的半衰期在10～40 d；在虹鱒魚苗中，MG和LMG總的半衰期是13 d[32]。這可能是由于部分魚類體內(nèi)脂肪含量較高，與獸藥結合緊密，造成魚體內(nèi)獸藥殘留量高，從而導致檢出率較高。

本次研究還發(fā)現(xiàn)：4種獸藥中LCV未檢出，可能是由于檢測時未使用氧化鉛柱后衍生，導致LCV未氧化成在可見光區(qū)有特異吸收波長的CV，使其結果呈陰性；也可能是由于CV不是用在魚類養(yǎng)殖過程而是用在后期的運輸過程中，魚吸收CV后還未來得及轉化成LCV就被抽樣送檢。但4種獸藥殘留中以CV的檢出率最高，說明CV在當?shù)卮嬖谳^為普遍的非法使用現(xiàn)象。

本次研究發(fā)現(xiàn)，所采集的16種魚類中有5種魚類檢出獸藥殘留(31.3%,5/16)，其中檢出MG的有1種(6.3%,1/16)，檢出LMG的有3種(18.8%,3/16)，檢出CV的有4種(25.0%,4/16)，低于2011年華永有等[14]報道的福建市售淡水魚中檢出MG的魚種比例53.5%(15/28)，也低于2011年邵生文等[15]報道的湖北省淡水魚中檢出MG的魚種比例57.1%(8/14)。10個地市中有9個地市的市售魚樣中檢出獸藥殘留，說明陜西省市售水產(chǎn)品中非法使用4種獸藥的現(xiàn)象較為普遍，其中咸陽、商洛檢出率最高，而且商洛還存在4種獸藥混配使用的現(xiàn)象。

綜上所述，陜西省水產(chǎn)品中獸藥總檢出率總體并不高，但在鯉魚、鯰魚、草魚樣品中檢出率相對較高，且在多個地區(qū)樣品中均檢出獸藥，還有多種獸藥混配使用的情況，存在MG和CV殘留的安全隱患，應當引起食藥監(jiān)部門的相對重視。

[1] 盧邁新,黃漳翰,肖學錚,等.美洲鰻對幾種藥物的敏感性研究 [J].淡水漁業(yè),2000,30(5):28-29.

Lu M X,Huang Z H,Xiao X Z,et al.Sensitivity ofAnguillarostrataon several medicines [J].Freshwater Fisheries,2000,30(5):28-29.(in Chinese)

[2] 王明俊.獸醫(yī)生物制品學 [M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1997:344.

Wang M J.Veterinary biologicals [M].Beijing:China Agriculture Press,1997:344.(in Chinese)

[3] 彭景書,黃敏紅,佘忠明,等.孔雀石綠在青石斑魚肌肉組織中的殘留與消除規(guī)律 [J].廣東海洋大學學報,2011,31(1):84-88.

Peng J S,Huang M H,She Z M,et al.Accumulation and elimination of malachite green in muscle of epinephelus awoara [J].Journal of Guangdong Ocean University,2011,31(1):84-88.(in Chinese)

[4] 楊先樂,喻文娟,王民權,等.對孔雀石綠的禁用及其思考 [J].水產(chǎn)科技情報,2005,32(5):210-213.

Yang X L,Yu W J,Wang M Q,et al.Prohibition of using malachite green and its thought [J].Fisheries Science & Technology Information,2005,32(5):210-213.(in Chinese)

[5] 黃金田,呂 富,鄭 浩,等.孔雀石綠及其代謝物隱性孔雀石綠在中華絨螯蟹體中的消除規(guī)律 [J].江蘇農(nóng)業(yè)科學,2010(2):326-328.

Huang J T,Lü F,Zheng H,et al.Study on eliminating regularity of malachite green and its major metabolite leucomalachite green in the body ofEriocheirsinensis[J].Jiangsu Agricultural Sciences,2010(2):326-328.(in Chinese)

[6] 陳培基,李劉冬,楊金蘭,等.孔雀石綠在凡納濱對蝦體內(nèi)的殘留與消除規(guī)律 [J].南方水產(chǎn)科學,2013,9(5):80-85.

Chen P J,Li L D,Yang J L,et al.Accumulation and elimination of malachite green in tissues ofLitopenaeusvannamei[J].South China Fisheries Science,2013,9(5):80-85.(in Chinese)

[7] Fernandes C,Lalitha V S,Rao V K.Enhancing effects of malachite green on development of hepatic preneoplastic lesions induced by N-nitrosodiethylamine in rats [J].Carcinogenesis,1991,12(5):839-845.

[8] 何麗華,沈國順,鄒 偉,等.孔雀石綠及其危害 [J].吉林畜牧獸醫(yī),2006,27(5):45-46,48.

He L H,Shen G S,Zou W,et al.Malachite green and its hazards [J].Jilin Animal Husbandry and Veterinary Medicine,2006,27(5):45-46,48.(in Chinese)

[9] Culp S J,Blankenship L R,Kusewitt D F,et al.Toxicity and metabolism of malachite green and leuco malachite green during short-term feeding to F344 rats and B6C3F1 mice [J].Chem Biol Interact,1999,122(1):153-170.

[10] 歐 安,蔡 泓,莊廣儒,等.湛江地區(qū)養(yǎng)殖蝦類中孔雀石綠殘留調(diào)查初報 [J].檢驗檢疫科學,2006,16(S1):18-19.

Ou A,Cai H,Zhuang G R,et al.Investigation report of malachite green residues in breeding shrimpin Zhanjiang area [J].Inspect Quarant Sci,2006,16(S1):18-19.(in Chinese)

[11] 王麗玲,馮翠霞,胡爾萍,等.珠海市餐廳池養(yǎng)水產(chǎn)品及池水中孔雀石綠殘留量的調(diào)查 [J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2007,17(9):1687-1689.

Wang L L,Feng C X,Hu E P,et al.Survey of malachite green residues in aquatic foods and pool water from restaurant in Zhuhai [J].Chinese Journal of Health Laboratory Technology,2007,17(9):1687-1689.(in Chinese)

[12] 彭升友,張 壘.寧波市淡水魚及蟹類水產(chǎn)品孔雀石綠檢測分析 [J].海峽預防醫(yī)學雜志,2008,14(6):60-61.

Peng S Y,Zhang L.Monitoring and analysis of malachite green in freshwater fish and crabs aquatic products in Ningbo [J].Strait J Prev Med,2008,14(6):60-61.(in Chinese)

[13] 肖永華.武漢市2009年度水產(chǎn)品中孔雀石綠監(jiān)測分析 [J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2010,20(4):862-863.

Xiao Y H.Monitoring and analysis of malachite green in aquatic foods in Wuhan in 2009 [J].Chin J Health Lab Technol,2010,20(4):862-863.(in Chinese)

[14] 華永有,邱文倩,周 亮,等.市售淡水魚中孔雀石綠及其代謝物殘留量的調(diào)查研究 [J].中國食品衛(wèi)生雜志,2011,23(6):563-566.

Hua Y Y,Qiu W Q,Zhou L,et al.Monitoring malachite green and its metabolites leumalachite green in retailed freshwater fish [J].Chinese Journal of Food Hygiene,2011,23(6):563-566.(in Chinese)

[15] 邵生文,聞 勝,王 艷,等.湖北省淡水魚中孔雀石綠、結晶紫監(jiān)測結果分析 [J].公共衛(wèi)生與預防醫(yī)學,2011,22(2):49-50.

Shao S W,Wen S,Wang Y,et al.Alalysis of malachite green and crystal violet residues in freshwater fishes in Hubei Province [J].Journal of Public Health and Preventive Medicine,2011,22(2):49-50.(in Chinese)

[16] 胡 萍,趙 鵬,余少文,等.高效液相色譜法監(jiān)測市售水產(chǎn)品中孔雀石綠 [J].深圳大學學報：理工版,2012,29(1):61-65.

Hu P,Zhao P,Yu S W,et al.Determination of malachite green and crystal violet residues in aquatic products by high performance liquid chromatography [J].Journal of Shenzhen University: Science & Engineering Edition,2012,29(1):61-65.(in Chinese)

[17] 郭德華,葉長淋,李 波,等.高效液相色譜-質(zhì)譜法測定水產(chǎn)品中孔雀石綠及其代謝物 [J].分析測試學報,2004,23(S1):206-208.

Guo D H,Ye C L,Li B,et al.Determination of malachite green and its metabolites in aquatic products using HPLC-VIS and HPLC-TOF-MS [J].Journal of Instrumental Analysis,2004,23(S1):206-208.(in Chinese)

[18] 吳學立,吳永寧,趙云峰,等.液相色譜-線性離子阱質(zhì)譜法檢測草魚中孔雀石綠、結晶紫及其代謝產(chǎn)物 [J].中國食品衛(wèi)生雜志,2007,19(3):209-214.

Wu X L,Wu Y N,Zhao Y F,et al.Determination of malachite green,gentian violet and their euco-metabolites in grass carp by liquid chromatography-linear ion trap mass spectrometry [J].Chinese Journal of Food Hygiene,2007,19(3):209-214.(in Chinese)

[19] 陳其勇,葛宗坤,宓捷波,等.高效液相色譜法與酶免疫法快速測定鯽魚中殘留顯/隱色孔雀石綠的比較 [J].理化檢驗：化學分冊,2008,44(1):68-70.

Chen Q Y,Ge Z K,Mi J B,et al.Comparison of rapid determination of residual malachite green in crucian by HPLC and enzyme immunoassay [J].Physical Testing and Chemical Analysis Part B:Chemical Analysis,2008,44(1):68-70.(in Chinese)

[20] 葉四化,陸超華,謝海平,等.高效液相色譜雙波長法同時測定水產(chǎn)品中孔雀石綠和隱性孔雀石綠 [J].分析科學學報,2007,23(1):69-72.

Ye S H,Lu C H,Xie H P,et al.Determination of malachite green and leucomalachite green in fishery products by HPLC with dual wavelength detector [J].Journal of Analytical Science,2007,23(1):69-72.(in Chinese)

[21] 中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗疫總局，中國國家標準化管理委員會.GB/T 20361-2006 水產(chǎn)品中孔雀石綠和結晶紫殘留量的測定：高效液相色譜熒光檢測法 [S].北京:中國標準出版社,2006.

General Administration of Quality Supervision,Inspection and Quarantine of the People’s Republic of China,Standardization Administration of the Peoples Republic of China．GB/T 20361-2006 Determination of malachitegreen and gentian violet residues in fishery products：High performance liquid chromatography with fluorescence detector [S].Beijing: Standards Press of China,2006.(in Chinese)

[22] 張彤晴,楊洪生,林 海，等.高效液相色譜法測定養(yǎng)殖水體孔雀石綠和無色孔雀石綠 [J].水產(chǎn)學報,2007,31(5):699-703.

Zhang T Q,Yang H S,Lin H,et al.Determination of malachite green and leucomalachite green in aquatic water by high performance liquid chromatography [J].Journal of Fisheries of China,2007,31(5):699-703.(in Chinese)

[23] 李永夫,高華鵬,姚 芳，等.高效液相色譜法檢測鰻魚中孔雀石綠及其代謝物殘留 [J].安徽農(nóng)業(yè)科學,2009,37(1):31-33.

Li Y F,Gao H P,Yao F,et al.Detection on the residues of malachite green and its metabolite in eel by high performance liquid chromatography [J].Journal of Anhui Agricultural Sciences,2009,37(1):31-33.(in Chinese)

[24] 楊金蘭,陳培基,黎智廣,等.高效液相色譜法測定水產(chǎn)品孔雀石綠殘留量的優(yōu)化研究 [J].南方水產(chǎn),2010,6(4):43-48.

Yang J L,Chen P J,Li Z G,et al.Optimization of HPLC determination of malachite green residue in aquatic products [J].South China Fisheries Science,2010,6(4):43-48.(in Chinese)

[25] 張宗祥,陳 軍.高效液相色譜法測定魚肌肉中的孔雀石綠殘留 [J].地質(zhì)學刊,2010,34(2):206-208.

Zhang Z X,Chen J.Determination of residues of malachite green in fish tissues by high-performance liquid chromatography [J].Journal of Geology,2010,34(2):206-208.(in Chinese)

[26] 萬譯文,洪 波,曾春芳,等.高效液相色譜法檢測水產(chǎn)品中的孔雀石綠 [J].湖南農(nóng)業(yè)科學,2012(5):102-104.

Wang Y W,Hong B,Zeng C F,et al.Determination of malachite green in fishery products by HPLC [J].Hunan Agricultural Sciences,2012(5):102-104.(in Chinese)

[27] 孫言春,吳 松,牟振波,等.液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定鯉科魚受精卵、卵巢及精巢中孔雀石綠及隱色孔雀石綠殘留 [J].中國漁業(yè)質(zhì)量與標準,2012,2(1):80-86.

Sun Y C,Wu S,Mou Z B,et al.Determination of malachite green and lecuomalachite green in fertilized eggs,ovary and testis in cyprinid fishes using liquid chromatography-tandem mass spectrometry [J].Chinese Fishery Abstracts,2012,2(1):80-86.(in Chinese)

[28] 中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗疫總局，中國國家標準化管理委員會.GB/T 19857-2005 水產(chǎn)品中孔雀石綠和結晶紫殘留量的測定 [S].北京:中國標準出版社,2005.

General Administration of Quality Supervision,Inspection and Quarantine of the People’s Republic of China,Standardization Administration of the Peoples Republic of China．GB/T 19857-2005 Determination of malachite green and crystal violet residues in aquatic product [S].Beijing:Standards Press of China,2005.(in Chinese)

[29] 中華人民共和國農(nóng)業(yè)部.SC/T 3021-2004 水產(chǎn)品中孔雀石綠殘留量的測定：液相色譜法 [S].北京:中國標準出版社,2004.

Ministry of Agriculture of the People’s Republic of China.SC/T 3021-2004 Determination of malachite green residues in fishery products：High performance liquid chromatography [S].Beijing:Standards Press of China,2004.(in Chinese)

[30] 張志剛,施 冰,陳鷺平,等.液相色譜法同時測定水產(chǎn)品中孔雀石綠和結晶紫殘留 [J].分析化學,2006,34(5):663-667.

Zhang Z G,Shi B,Chen L P,et al.Simultaneous determination and confirmation of malachite green,crystal violet and their leuco metabolites residues in aquatic product by liquid chromatography-visible detection and tandem mass spectrometric detection [J].Chinese Journal of Analytical Chemistry,2006,34(5):663-667.(in Chinese)

[31] 傅武勝,鄭奎城,邱文倩,等.養(yǎng)殖魚孔雀石綠及其代謝物殘留量的調(diào)查與溯源 [J].食品安全質(zhì)量檢測學報,2013,4(1):176-181.

Fu W S,Zheng K C,Qiu W Q,et al.Investigation and traceability of residual malachite green and its metabolite in freshwater fish [J].Journal of Food Safety & Quality,2013,4(1):176-181.(in Chinese)

[32] 吳秀峰,薛 敏.魚粉及烏賊內(nèi)臟粉中硝基呋喃代謝物、孔雀石綠及其代謝物現(xiàn)狀調(diào)查 [J].海洋與漁業(yè)：水產(chǎn)前沿,2009(6):28-30.

Wu X F,Xue M.Investigation of nitrofuran metabolites,malachite green and its metabolite in fish and squid viscera powder [J].Fisheries Advance Magazine,2009(6):28-30.(in Chinese)

Determination of malachite green and crystal violet residues in aquatic products of Shaanxi in 2013

ZHANG Yi-bei1,YUE Tian-li1,QIAO Hai-ou2,JIA Ru1,JIANG Xu-peng1,LI Lu1

(1CollegeofFoodScienceandEngineering,NorthwestA&FUniversity,Yangling,Shaanxi712100,China;2ShaanxiProvinceCenterforDiseaseControlandPrevention,Xi’an,Shaanxi710054,China)

【Objective】 This study determined residual levels of 4 veterinary drugs in aquatic products in Shaanxi in 2013 to ensure food security.【Method】 A total of 120 fish samples for 16 types were collected from wholesale markets in 10 cities of Shaanxi Province.After homogenate was collected,the veterinary drugs were extracted by acetonitrile and cleaned up by neutral alumina.The concentrations of total malachite green and crystal violet and their metabolites residues were detected by ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC-MS/MS) and qualitatively and quantitatively analyzed.The total detection rates of 4 veterinary drugs,detection rates of 16 samples,detection rates of samples in 10 cities,mean levels of veterinary drugs residues and the detection rates of mixed veterinary drugs were counted.【Result】 The total detection rate of 4 veterinary drugs was 4.6% and leuco crystal violet was not detected.The detection rate in 16 kinds of samples was 15.8%,and those of spindle edge fish,trout,carp,catfish,and grass carp samples were 100.0%,100.0%,33.3%,15.4%,and 11.8%,respectively,higher than the mean level in China (9.0%).None of veterinary drugs was detected in other 11 kinds of samples.Veterinary drugs were detected in 9 areas except Yulin,with the highest detection rates of 10.4% in Shangluo and Xianyang.Various veterinary drugs were detected simultaneously in the samples from Shangluo,indicating abuse of mixed veterinary drugs.【Conclusion】 The detection rates of 4 veterinary drugs residue in aquatic products were not high in Shaanxi Province.However,the high presence of drugs in carp,catfish,and grass carp samples in 9 areas and mixed abuse of veterinary drugs poses potential threat to human health, which high attention should be paid to.

aquatic products;malachite green;crystal violet;veterinary drugs residues determination;Shaanxi province

2013-12-13

西北農(nóng)林科技大學“2013年度國家大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃”校級重點項目(1201310712174)

張藝蓓(1993-)，女，陜西西安人，本科在讀，主要從事食品安全研究。E-mail：zhangyibei0666@163.com

岳田利(1965-)，男，陜西寶雞人，教授，博士，博士生導師，主要從事食品與發(fā)酵工程及食品安全控制技術研究。 E-mail：yuetl@nwsuaf.edu.cn

時間:2015-04-13 12:59

10.13207/j.cnki.jnwafu.2015.05.012

TS207.3

A

1671-9387(2015)05-0192-09

網(wǎng)絡出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1390.S.20150413.1259.012.html