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金黃垂直鏈霉菌HN6對(duì)香蕉的防病促生作用

2015-02-21 16:17王蘭英駱焱平
關(guān)鍵詞:懸浮液枯萎病霉菌

王蘭英,王 琴, 駱焱平

(1 海南大學(xué) 環(huán)境與植物保護(hù)學(xué)院,海南 ???570228;2 遼寧省林業(yè)科學(xué)研究院,遼寧 沈陽(yáng) 110032)

金黃垂直鏈霉菌HN6對(duì)香蕉的防病促生作用

王蘭英1,王 琴2, 駱焱平1

(1 海南大學(xué) 環(huán)境與植物保護(hù)學(xué)院,海南 海口 570228;2 遼寧省林業(yè)科學(xué)研究院,遼寧 沈陽(yáng) 110032)

【目的】 明確金黃垂直鏈霉菌HN6對(duì)香蕉的防病促生作用?!痉椒ā?采用盆栽法,研究金黃垂直鏈霉菌HN6對(duì)香蕉枯萎病的防治效果及香蕉苗葉片PAL與SOD活性的變化,同時(shí)研究施加金黃垂直鏈霉菌HN6孢子懸浮液后,香蕉苗植株形態(tài)和生理指標(biāo)的變化?!窘Y(jié)果】 HN6對(duì)香蕉枯萎病的防治效果可達(dá)72.02%,極顯著高于95%惡霉靈處理;與無(wú)菌水和95%惡霉靈相比,HN6能極顯著提高香蕉苗的PAL與SOD活性。HN6可以增加香蕉苗株高、莖粗、地上部分鮮質(zhì)量及地下部分鮮質(zhì)量,提高植株葉片葉綠素、可溶性糖及可溶性蛋白質(zhì)含量,有效增強(qiáng)植株根系活力,且與無(wú)菌水處理相比差異均達(dá)極顯著水平?!窘Y(jié)論】 109CFU/mL HN6孢子懸浮液灌根對(duì)香蕉具有很好的防病促生作用。

金黃垂直鏈霉菌HN6;香蕉枯萎?。环佬?;促生作用

香蕉枯萎病又名巴拿馬病,由尖孢鐮刀菌古巴專化型(Fusariumoxysporumf.sp.cubese,FOC)侵染引起,屬國(guó)際檢疫對(duì)象,該病的發(fā)生嚴(yán)重影響著香蕉種植業(yè)的發(fā)展。近年來(lái),由于化學(xué)農(nóng)藥引起的農(nóng)藥殘留、環(huán)境微生態(tài)被破壞等負(fù)面影響日益嚴(yán)重,使得利用有益微生物防治農(nóng)作物病害的研究逐漸受到重視[1]。作為重要生防微生物資源的放線菌一直以來(lái)都是科研工作者關(guān)注的熱點(diǎn),鏈霉菌(Streptomyces)是放線菌中對(duì)植物病害具有重要防治作用的一個(gè)屬,具有根際定殖能力強(qiáng)、次生代謝產(chǎn)物多樣、對(duì)自然環(huán)境安全、易于規(guī)模生產(chǎn)與管理等優(yōu)點(diǎn)[2]。Thandavelu等[3]發(fā)現(xiàn),紫黑鏈霉菌產(chǎn)生的抗真菌代謝物對(duì)香蕉枯萎病4號(hào)小種具有良好的拮抗效果;Getha等[4]研究表明,鏈霉菌g10的胞外代謝產(chǎn)物對(duì)香蕉枯萎病原菌有較強(qiáng)的抑制能力;邱煒等[5]從土樣中分離出DA07408,其對(duì)香蕉枯萎病菌具有較好的抑菌活性,初步鑒定為橄欖產(chǎn)色鏈霉菌;莫坤聯(lián)[6]研究了不吸水鏈霉菌BWL58及白刺鏈霉菌BWL15-4對(duì)香蕉枯萎病的防效,并對(duì)2個(gè)菌株制劑進(jìn)行了制備;秦涵淳[7]報(bào)道了1株拮抗鏈霉菌D4-4-L,其在田間小區(qū)試驗(yàn)中對(duì)香蕉枯萎病不僅有很好的防治作用,而且對(duì)香蕉也有一定的增產(chǎn)作用。綜合上述研究結(jié)果可見(jiàn),將鏈霉菌應(yīng)用于香蕉枯萎病的防治切實(shí)可行。

許多研究表明,植物在防御植物病害入侵時(shí),體內(nèi)苯丙氨酸解氨酶(PAL)、超氧化物歧化酶(SOD)等防御酶發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[8-9]。而有些生防微生物不僅可以誘導(dǎo)植株這些防御酶活性的提高,甚至可以對(duì)植物生長(zhǎng)產(chǎn)生一系列的促進(jìn)作用,從而提高植物的抗病性[10-12],因此開(kāi)展這方面的研究對(duì)于揭示生防菌防病機(jī)理具有重要指導(dǎo)意義。本試驗(yàn)采用盆栽法,研究了金黃垂直鏈霉菌HN6對(duì)香蕉枯萎病的防治效果,以及香蕉苗葉片PAL與SOD活性的變化,同時(shí)研究了施加金黃垂直鏈霉菌HN6孢子懸浮液后香蕉苗植株形態(tài)和生理指標(biāo)的變化,以期為該菌株的應(yīng)用及防病機(jī)理研究提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

靶標(biāo)菌株:尖孢鐮刀菌古巴專化型4號(hào)生理小種(Fusariumoxysporumf.sp.cubense,FOC4),由中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境與植物保護(hù)研究所提供。生防菌株:金黃垂直鏈霉菌HN6(Streptomycesaureoverticillatus,HN6),由海南大學(xué)環(huán)境與植物保護(hù)學(xué)院農(nóng)藥實(shí)驗(yàn)室提供。藥劑:95%惡霉靈粉劑,北京北農(nóng)綠享科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)。香蕉苗:四葉期粉蕉(MusaABB)組培苗,由海南大學(xué)農(nóng)學(xué)院提供。

1.2 方 法

1.2.1 孢子懸浮液的制備 將FOC4與HN6分別接種于PDA及高氏1號(hào)培養(yǎng)平板上,5 d后用無(wú)菌水洗脫孢子,同時(shí)用無(wú)菌水將FOC4和HN6孢子懸浮液分別稀釋至107和109CFU/mL,備用。

1.2.2 HN6防效的測(cè)定 從非病原寄主種植地采集土樣,過(guò)孔徑85 μm篩,160 ℃滅菌2 h,冷卻至常溫后分裝于滅菌育苗杯。用清水將香蕉苗根部沖洗干凈,定植于育苗杯內(nèi),15 d后采用灌根法接入109CFU/mL HN6孢子懸浮液,分別以施加無(wú)菌水、95%惡霉靈粉劑1 200倍液為對(duì)照,每處理10株,重復(fù)3次。施加HN6孢子懸浮液5 d后,以傷根法接入107CFU/mL FOC4孢子懸浮液,然后于接種病原菌后第14,22,30 天調(diào)查各處理的病情指數(shù),參照病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)最終防效[13]。病情指數(shù)=[∑(發(fā)病植株數(shù)×病級(jí)數(shù))/(總植株數(shù)×最高病級(jí)數(shù))]×100;防效=(無(wú)菌水處理病情指數(shù)-其他處理病情指數(shù))/無(wú)菌水處理病情指數(shù)×100%。

1.2.3 香蕉葉片PAL及SOD活性的測(cè)定 分別于施入FOC4孢子懸浮液后0(當(dāng)天),14,22和30 d,隨機(jī)稱取香蕉葉片1.0 g,加10 mL提取液(0.1 mol/L pH 8.8 硼酸緩沖液,1 mmol/L EDTA-Na2,1 g/L 聚乙烯吡咯烷酮)和0.1 g石英砂,在冰浴中研磨成勻漿,4 ℃、10 000 r/min 冷凍離心20 min,棄沉淀,取上清作為粗提液,置4 ℃冰箱中保存。PAL及SOD活性測(cè)定參照高俊鳳[14]的方法進(jìn)行。

1.2.4 HN6促生作用的測(cè)定 按照1.2.2節(jié)的方法種植香蕉苗。香蕉苗定植15 d后采用灌根法接入109CFU/mL HN6孢子懸浮液,以無(wú)菌水為對(duì)照。每處理10株,重復(fù)3次。于接種30 d時(shí)用直尺測(cè)定香蕉苗株高(地面到新葉根部的高度),用游標(biāo)卡尺測(cè)定香蕉苗莖粗(植株離地面土層3 cm的假莖莖粗);將香蕉苗地上部和地下部切斷,分別稱量地上部和地下部鮮質(zhì)量;按照李合生[15]的方法測(cè)定香蕉葉片葉綠素、可溶性蛋白質(zhì)、可溶性糖含量及根系活力。

2 結(jié)果與分析

2.1 HN6對(duì)香蕉枯萎病的防效

由表1可知,接種FOC4后14 d,惡霉靈處理及無(wú)菌水處理的香蕉苗均出現(xiàn)病癥,而HN6處理未發(fā)??;接種30 d時(shí),無(wú)菌水處理到達(dá)發(fā)病盛期,病情指數(shù)達(dá) 81.42,HN6處理的病情指數(shù)最低,為22.78。依據(jù)30 d的病情指數(shù)計(jì)算防效可知,HN6防治效果明顯,防效可達(dá)72.02%,與惡霉靈處理的差異達(dá)極顯著水平。由此可見(jiàn),HN6菌株對(duì)盆栽香蕉枯萎病有很好的防治作用。

注:同列數(shù)據(jù)后的小寫(xiě)字母表示α=0.05水平的差異顯著性,大寫(xiě)字母表示α=0.01水平的差異顯著性。下表同。

Note:Lowercase letter in each column shows significant difference atα=0.05,while capital letter shows extremely significant difference atα=0.01.The same for following tables.

2.2 HN6對(duì)香蕉葉片防御酶活性的影響

2.2.1 PAL活性 由圖1可知:接種FOC4前(0 d),HN6處理香蕉葉片的PAL活性極顯著高于其他2個(gè)處理;接種病原菌后0~22 d,所有處理香蕉葉片PAL活性均呈增加趨勢(shì),其中HN6處理0~14 d增勢(shì)平緩,14~22 d增勢(shì)急?。唤臃N22 d時(shí)HN6處理香蕉葉片的PAL活性是無(wú)菌水處理的 2.7 倍,是惡霉靈處理的1.9倍,3種處理之間有極顯著差異;接種病原菌后22~30 d,3種處理香蕉葉片的PAL活性均呈緩慢下降趨勢(shì),HN6處理及惡霉靈處理香蕉葉片的PAL活性均高于接種FOC4前(0 d),而無(wú)菌水處理的PAL活性卻低于接種FOC4前(0 d)??傮w來(lái)看,測(cè)定時(shí)間內(nèi)HN6處理香蕉葉片的PAL活性一直高于惡霉靈及無(wú)菌水處理,HN6對(duì)香蕉葉片PAL活性有明顯的誘導(dǎo)效應(yīng)。

2.2.2 SOD活性 由圖2可知:經(jīng)無(wú)菌水、HN6及惡霉靈處理后,香蕉葉片SOD的變化趨勢(shì)與PAL相似。接種FOC4前(0 d),HN6處理香蕉葉片的SOD活性極顯著高于其他處理;接種病原菌 0~22 d,3個(gè)處理組香蕉葉片的SOD活性均呈明顯增高趨勢(shì),其中以HN6處理的增幅最大,接種22 d時(shí)HN6處理香蕉葉片的SOD活性是無(wú)菌水處理的 1.6 倍,是惡霉靈處理的1.3倍,三者之間差異達(dá)極顯著水平;接種病原菌22~30 d,3種處理香蕉葉片的SOD活性均呈下降趨勢(shì),此時(shí)的SOD活性均高于接種FOC4前(0 d)??傮w來(lái)看,測(cè)定時(shí)間內(nèi)HN6處理香蕉葉片的SOD活性一直高于惡霉靈及無(wú)菌水處理,HN6對(duì)香蕉葉片的SOD活性也有明顯的誘導(dǎo)效應(yīng)。

2.3 HN6對(duì)香蕉的促生作用

2.3.1 HN6對(duì)香蕉植株形態(tài)及根系活力的影響 由表2可知,施加HN6孢子懸浮液后,盆栽香蕉苗株高、莖粗、地上部分鮮質(zhì)量、地下部分鮮質(zhì)量均顯著高于無(wú)菌水處理。相比較而言,HN6對(duì)植株株高影響最大,相對(duì)于無(wú)菌水處理增加了39.3%,總體來(lái)看,該菌株對(duì)香蕉植株形態(tài)指標(biāo)的影響大小依次表現(xiàn)為:株高>莖粗>地上部分鮮質(zhì)量>地下部分鮮質(zhì)量;HN6處理的根系活力是無(wú)菌水處理的1.9倍,可見(jiàn)HN6可以顯著增強(qiáng)香蕉植株根系對(duì)水分、養(yǎng)分的吸收能力。

2.3.2 HN6對(duì)香蕉葉綠素、可溶性糖及可溶性蛋白含量的影響 葉綠素是作物進(jìn)行光合作用的主要原料,葉綠素含量越高,潛在的光合能力就越強(qiáng)。由表3可知,HN6處理香蕉苗葉綠素a、葉綠素b以及類胡蘿卜素含量均高于無(wú)菌水處理,其中葉綠素a和類胡蘿卜素含量差異達(dá)極顯著水平;同時(shí),HN6處理能明顯提高葉綠素a/b值,可以有效提高植株光能轉(zhuǎn)化率及光能利用率。說(shuō)明HN6能極顯著提高香蕉葉綠素總含量,增強(qiáng)香蕉幼苗光合能力,加強(qiáng)植株體內(nèi)光合產(chǎn)物積累,促進(jìn)植株生長(zhǎng)。經(jīng)HN6處理后,香蕉葉片中的可溶性糖、可溶性蛋白質(zhì)含量較無(wú)菌水對(duì)照處理增加了38.5%和29.9%,說(shuō)明HN6也能顯著提高香蕉可溶性糖、可溶性蛋白質(zhì)含量。

3 結(jié)論與討論

許多研究表明,經(jīng)其他外源因素誘導(dǎo)或病原菌侵染后,植物體內(nèi)的防御酶活性會(huì)有所變化[8]。本研究表明,盆栽香蕉苗經(jīng)放線菌HN6孢子懸浮液處理后,在測(cè)定時(shí)間內(nèi)香蕉葉片中的PAL及SOD活性均有所提高,且一直高于其他處理;接種病原菌后,HN6處理可以使植株發(fā)病時(shí)間得到延遲。可見(jiàn)HN6可能作為一個(gè)誘導(dǎo)因子,誘導(dǎo)植物體內(nèi)PAL及SOD活性的變化,從而增強(qiáng)植株對(duì)病原菌的抵抗能力,延緩植株發(fā)病。這與周林[16]以及Saravanan等[17]報(bào)道的生防菌可以通過(guò)提高香蕉植株P(guān)AL及SOD等防御酶活性,增強(qiáng)植株抗病性的研究結(jié)果一致。同時(shí)本研究發(fā)現(xiàn),接種病原菌后,所有處理在初發(fā)病時(shí)PAL及SOD活性均表現(xiàn)出明顯增強(qiáng)的特點(diǎn),可見(jiàn)病原菌也可以對(duì)植株防御酶起到一定的誘導(dǎo)作用。但這種誘導(dǎo)作用并不能使植株防御酶活性一直增強(qiáng),在發(fā)病后期2種酶活性均呈下降趨勢(shì),相比較而言,HN6處理后酶活性的下降趨勢(shì)最為緩慢,且2種酶的最終活性均高于初始值。推測(cè)其原因可能是隨著寄主植物病情的擴(kuò)展,其體內(nèi)防御酶活性受到抑制,但受抑制程度不同,驗(yàn)證了齊希猛等[18]提出的病原菌對(duì)寄主防御酶活性先誘導(dǎo)后抑制的觀點(diǎn)。

植物的生理生化等指標(biāo)也與植物抗病性密切相關(guān)。葉綠素是植物進(jìn)行光合作用的重要色素,其含量的高低直接關(guān)系到植物的干物質(zhì)積累以及植物的抗病性[19-20]。可溶性糖是高等植物的主要光合產(chǎn)物,在植物代謝中占有重要位置。丁九敏等[21]、景嵐等[22]的研究認(rèn)為,可溶性糖作為新陳代謝的呼吸基質(zhì),其在葉片中的含量越高表明植株?duì)I養(yǎng)狀態(tài)越好,抗病性越強(qiáng);另外,生物體內(nèi)的重要生物大分子——可溶性蛋白,不僅是生物體構(gòu)建的重要組成成分,也是生物體內(nèi)各種酶的組成成分[23];同時(shí),植物根系活力的高低直接影響著地上部的生長(zhǎng)發(fā)育及其形態(tài)的建成,是根吸收、合成與生長(zhǎng)等生理活動(dòng)的綜合表現(xiàn)[24]。本研究發(fā)現(xiàn),供試菌株HN6的孢子懸浮液可以有效增加植株葉綠素含量,提高植株光能轉(zhuǎn)化率及光能利用率,并可使可溶性糖、可溶性蛋白質(zhì)含量分別較無(wú)菌水對(duì)照處理提高38.5%和29.9%,使香蕉植株根系活力較無(wú)菌水對(duì)照處理明顯增強(qiáng),可見(jiàn)菌株HN6對(duì)以上測(cè)定指標(biāo)均表現(xiàn)出很強(qiáng)的正效應(yīng),這些正效應(yīng)與植物抗病性密切相關(guān)。

綜合本研究結(jié)果表明,HN6對(duì)香蕉有明顯的防病促生作用,具有良好的開(kāi)發(fā)應(yīng)用前景。但本試驗(yàn)僅測(cè)定了該菌株對(duì)香蕉防病促生作用的部分指標(biāo),關(guān)于其防病的詳盡機(jī)理還有待于進(jìn)一步深入研究。

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Disease preventing and growth promoting effects ofStreptomycesaureoverticillatusstrain HN6 on banana

WANG Lan-ying1,WANG Qin2,LUO Yan-ping1

(1CollegeofEnvironmentandPlantProtection,HainanUniversity,Haikou,Hainan570228,China;2ForestryAcademyofLiaoningProvince,Shenyang,Liaoning110032,China)

【Objective】 This study investigated the disease preventing and growth promoting effects ofStreptomycesaureoverticillatusstrain HN6 on banana.【Method】 Control effect ofS.aureoverticillatusstrain against banana wilt was tested by potted method,and changes in PAL and SOD enzyme activities of banana leaves were detected.Furthermore,morphological and physiological indexes of banana seedlings were investigated after adding spore suspension of theS.aureoverticillatus.【Result】 The control effect ofS.aureoverticillatusagainstFusariumoxysporumwas up to 72.02%,extremely higher than that of 95% Hymexaxzol.S.aureoverticillatusextremely significantly increased PAL and SOD enzyme activities in banana leaves.S.aureoverticillatusalso increased banana seedling height,stem diameter,fresh weight,the contents of leaf chlorophyll,soluble sugar and soluble protein,and the vitality of root system extremely significantly compared to the control with sterile water.【Conclusion】 The disease preventing and growth promoting effects ofS.aureoverticillatuson banana seedlings were identified and the suggested concentration is 109CFU/mL.

Streptomycesaureoverticillatusstrain HN6;banana wilt;control effect;growth-promoting effect

2014-10-29

2014年度海南省應(yīng)用技術(shù)研發(fā)與示范推廣專項(xiàng)(ZDXM2014115);海南省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(314054)

王蘭英(1976-),女,山東鄆城人,副教授,在讀博士,主要從事生物防治研究。E-mail:daivemuwly@126.com

駱焱平(1973-),男,湖北鄂州人,教授,博士,主要從事生物農(nóng)藥研究。E-mail:yanpluo@126.com

時(shí)間:2015-04-13 12:59

10.13207/j.cnki.jnwafu.2015.05.008

S476.11

A

1671-9387(2015)05-0163-05

網(wǎng)絡(luò)出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1390.S.20150413.1259.008.html

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