一測多評法測定牡丹皮中多種指標成分的含量

張晨，邱實，貢濟宇*

(長春中醫(yī)藥大學藥學院，長春 130117)

摘要：目的建立一測多評法同步測定丹參中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B、隱丹參酮、丹參酮Ⅰ及丹參酮ⅡA的含量，為控制丹參藥材的質量提供依據(jù)。方法用超高效液相色譜法對丹參藥材進行分析，計算其中1個脂溶性成分“丹參酮IIA”，通過建立該成分與其他成分的校正因子，同時計算3個脂溶性與3個水溶性成分的含量。結果建立的對丹參藥材的含量測定方法快速有效，且使用一測多評方法僅需要1個成分的標準品，即可進行定量分析。結論本研究建立了牡丹皮藥材的UHPLC含量測定方法，從含量測定方面控制牡丹皮藥材的質量。本研究建立的牡丹皮含量測定方法簡單、快速、穩(wěn)定且成本低廉。

關鍵詞：一測多評法；超高效液相色譜；牡丹皮；含量測定

DOI:10.13463/j.cnki.cczyy.2015.06.015

中圖分類號：R284.2文獻標志碼：A

文章編號：2095-6258(2015)06-1137-02

基金項目：吉林省科技廳

作者簡介：張晨(1987-)，女，碩士，主要從事中藥學研究。

收稿日期:(本欄責任編輯：張海洋2015-10-21)

*通信作者：貢濟宇，女，教授，碩士研究生導師，電話-(0431)81672207，電子信箱-67461608@qq.com

Multiple index Components ofCortexMoutanRadicisby SSDMC Method

ZHANG Chen,QIU Shi, GONG Jiyu*

(School of Pharmacy,Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130117,China)

Abstract：ObjectiveUsing SSDMC methods to simultaneous determination of five major components inCortexMoutanRadicis, providing method to control the quality of medicinal materials ofCortexMoutanRadicis. MethodsThe use of UHPLC technique to establish the method for multiple contents determination ofCortexMoutanRadicis, obtained UHPLC chromatogram and the related data. Using SSDMC Methods to quantitative analysis of five index components ofCortexMoutanRadicis.ResultEstablished the method for determination ofCortexMoutanRadiciscould be simultaneous quantitative analysis five index components in 13 minutes. The SSDMC method only needs one standard reference to quantitative analysis. Methodological study demonstrated that SSDMC method was met with the traditional Chinese medicine quality standards. ConclusionThis study established the UHPLC content determination method to control the quality ofCortexMoutanRadicis, which is simple, rapid, stable and low cost.

Keywords：SSDMC；UHPLC；CortexMoutanRadicis；content determination

牡丹皮為毛茛科植物牡丹PaeoniasuffruticosaAndr.的干燥根皮。具有清熱涼血，活血化瘀的作用[1-2]。近年來，對于牡丹皮的質量控制方法多為測定不同產(chǎn)地、不同批次、不同廠家的丹皮酚含量[3]及對于牡丹皮藥材HPLC指紋圖譜構建[4-5]，牡丹皮藥材HPLC特征圖譜研究[6]等，可以看出對于牡丹皮藥材進行全面、深入的質量控制研究較少。本研究運用超高效液相色譜(UHPLC)，結合一測多評方法，建立牡丹皮藥材多組分同時測定的含量測定方法，為牡丹皮藥材的質量控制標準提供更簡便有效的方法。

1材料

超高效液相色譜系統(tǒng)：Agilent 1290 美國安捷倫科技公司；BRANSON B3500S-DTH 超聲波清洗儀，購自荷蘭必能信有限公司；牡丹皮藥材：產(chǎn)地為安徽；丹皮酚對照品 (批號：110708-200506)，購自中國藥品生物制品檢定所；芍藥苷對照品、苯甲酰芍藥苷對照品、1,2,3,4,6-五沒食子酰葡萄糖苷對照品、苯甲酸對照品均購自上海友思生物技術公司；水：Mili-Q 超純水儀制備。

2方法

2.1色譜條件Agilent Zorbax SB-C18(2. 1 mm×100 mm，1.8 μm)。流動相為乙腈-水(含0.1%磷酸),流速0.8 mL/min,柱溫25 ℃ ,檢測波長230 nm。2.2檢測波長的選擇牡丹皮中5種目標成分芍藥苷、苯甲酸、1,2,3,4,6-五沒食子酰葡萄糖苷、丹皮酚和苯甲酰芍藥苷的全波長紫外吸收，其中芍藥苷、苯甲酸、苯甲酰芍藥苷的最大吸收均為230 nm，且一測指標成分丹皮酚在230 nm下有著第二強的紫外吸收，故選擇230 nm作為本研究的吸收波長。2.3對照品溶液的制備2.3.1對照品貯備液A取芍藥苷、苯甲酸、1,2,3,4,6-五沒食子酰葡萄糖苷、丹皮酚和苯甲酰芍藥苷對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1 mL 含0.821 8 mg芍藥苷，0.126 8 mg苯甲酸，1.072 8 mg 1,2,3,4,6-五沒食子酰葡萄糖苷，1.896 mg丹皮酚，0.282 6 mg苯甲酰芍藥苷的溶液，即得。于4 ℃保存?zhèn)溆谩?.3.2對照品溶液B精密量取對照品貯備液0.5 mL，置10 mL棕色量瓶中，加甲醇定容，制成每1 mL含芍藥苷0.041 09 mg，苯甲酸0.006 34 mg，1,2,3,4,6-五沒食子酰葡萄糖苷0.053 64 mg，丹皮酚0.094 8 mg ,苯甲酰芍藥苷0.014 13 mg的溶液，即得。2.4供試品溶液的制備取本品粉末(過四十目篩)約0.15 g，精密稱定，置50 mL具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇30 mL，稱定，準確至標準差0.01 g，密塞，超聲處理30 min(565 W，80 kHz)，放冷，再稱定重量，用相應溶劑補足減失的重量，過濾，50 mL容量瓶定容，搖勻，取1.5 mL離心，取上清，即得。2.5穩(wěn)定性實驗供試品溶液在室溫條件下放置 0、4、8、12、24 h后，芍藥苷、苯甲酸、1，2，3，4，6-五沒食子酰葡萄糖苷、丹皮酚和苯甲酰芍藥苷的峰面積RSD分別為0.761%、0.703%、0.874%、1.117%和0.498%。表明處理后的樣品在1 d內穩(wěn)定。2.6重復性實驗重復性采用3個不同濃度(高、中、低)，每個濃度各分別制備3 分供試品溶液測定。芍藥苷、苯甲酸、1,2,3,4,6-五沒食子酰葡萄糖苷、丹皮酚和苯甲酰芍藥苷的平均含量分別為1.265%、0.160%、1.287%、2.247%、0.353%，RSD分別為1.154%、0.437%、1.201%、0.593%、0.716%。2.7校正因子重現(xiàn)性考察采用獨立3次配制的7 個系列混合對照品溶液的峰面積和相應濃度計算一測多評法中的校正因子，以3次校正因子測定結果的平均值作為一測多評法的校正因子。以芍藥苷為內參物，校正因子為1，計算出,苯甲酸、1,2,3,4,6-五沒食子酰葡萄糖苷、丹皮酚和苯甲酰芍藥苷的相對校正因子依次為0.25、0.53、0.49、0.64。各校正因子的RSD為0.34%、0.16%、0.00%、0.34%。

3結論

分別稱取30批牡丹皮藥材粉末，按供試品溶液的制備方法制備的供試品溶液各8 μL注入超高效液相色譜儀進行測定。采用外標法和一測多評法測定芍藥苷、苯甲酸、1,2,3,4,6-五沒食子酰葡萄糖苷、丹皮酚和苯甲酰芍藥苷的含量，對2種含量測定方法進行對比,結果顯示2種方法測得含量的RSD范圍為0.20%~1.86%，表明一測多評方法穩(wěn)定，可靠。根據(jù)30批牡丹皮藥材含量情況，建議含量限度為：按干燥品計芍藥苷不少于0.5%，苯甲酸不少于0.06%，1,2,3,4,6-五沒食子酰葡萄糖苷不少于0.6%，丹皮酚不少于1.3%，苯甲酰芍藥苷不少于0.2%。

參考文獻：

[1]王智民，高慧敏，付雪濤,等.“一測多評”法中藥質量評價模式與方法學研究[J].中國中藥雜志,2006,2(23):1925.

[2]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典[M]. 北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010.

[3]張詠梅,劉曉燕,張月嬋,等. HPLC法測定不同廠家牡丹皮中丹皮酚的含量[J]. 黑龍江醫(yī)藥,2010,23(2):151.

[4]姜瀟,張君仁. 牡丹皮HPLC指紋圖譜的研究[J]. 齊魯藥事,2005,24(4):209.

[5]周剛,呂慶紅. 牡丹皮不同部位有效成分含量測定及指紋圖譜化學成分研究[J]. 中國中藥雜志,2008,33(18):2070.

[6]鄧祖磊,黃麗丹,程世云,等. 牡丹皮HPLC特征圖譜研究[J]. 安徽醫(yī)藥,2011,15(7):825.