鐘佳靜吳菲遠董 華

1.廣東省湛江久和醫(yī)院，廣東湛江524000；2.廣東省湛江市中心人民醫(yī)院婦產科，廣東湛江524000

TSLC1和CD105在宮頸癌中的表達及其意義

鐘佳靜1吳菲遠2董 華1

1.廣東省湛江久和醫(yī)院，廣東湛江524000；2.廣東省湛江市中心人民醫(yī)院婦產科，廣東湛江524000

目的探討TSLC1和CD105標記微血管密度計數（MVD）在宮頸癌中的表達及兩者與臨床病理特征的關系。方法收集18例正常宮頸、18例宮頸上皮內瘤樣變、45例宮頸癌組織標本，應用免疫組織化學法檢測TSLC1和CD105標記MVD表達情況。結果在正常宮頸、宮頸上皮內瘤樣變、宮頸癌組織中，TSLC1的陽性表達率呈逐漸下降趨勢（P＜0.01），TSLC1在宮頸癌組織中的表達與宮頸癌組織學分化程度、FIGO分期、淋巴結轉移有關（P＜0.05）。在正常宮頸、宮頸上皮內瘤樣病變、宮頸癌組織中，CD105標記MVD表達強度呈逐漸上升趨勢（P＜0.01），CD105標記MVD在宮頸癌組織中的表達強度與宮頸癌FIGO分期、淋巴結轉移有關（P＜0.05）。結論宮頸癌組織中TSLC1呈低表達、而CD105呈高表達，提示TSLC1和CD105在宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展中有重要意義，TSLC1和CD105表達水平的檢測可用于輔助宮頸癌的診斷和病情評估。

TSLC1；CD105；正常宮頸；宮頸上皮內瘤樣病變；宮頸癌；免疫組織化學法

宮頸癌居全球女性惡性腫瘤的第二位，全球宮頸癌患者數量逐年增加，呈年輕化趨勢，宮頸癌的發(fā)生是多步驟、多階段、多基因相互作用的結果，涉及多種抑癌基因的失活與腫瘤新生血管的生成[1-3]；肺癌腫瘤抑制物1（tumor suppressor in lung cancer 1，TSLC1）是一種新的抑癌基因，研究表明，TSLC1失活與多種惡性腫瘤的發(fā)生、浸潤轉移及預后有重要的關系[4-6]；CD105又命名為Endoglin，研究表明，CD105由腫瘤組織及其轉移灶中新生血管內皮細胞產生，與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關[7-9]；本研究采用免疫組化法檢測TSLC1和CD105標記的微血管密度計數（MVD）在宮頸癌中的表達情況，探討TSLC1和CD105與宮頸癌發(fā)生、發(fā)展的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集湛江市中心人民醫(yī)院2010年1月～2014年5月門診活檢或住院手術病理標本81例，其中正常宮頸組織18例，宮頸上皮內瘤樣變（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）組織18例和宮頸癌組織45例，宮頸癌按FIGO分期標準進行分期，其中Ⅰ期7例，Ⅱ期15例，Ⅲ期18例，Ⅳ期5例；低分化15例、中分化17例，高分化13例；所有宮頸癌病例術前均未行化療或放療，各組間年齡比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；兔抗人TSLC1多克隆抗體和鼠抗人CD105單克隆抗體購自美國Chemicon有限公司，即用型免疫組織化學試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司。

1.2 免疫組織化學檢測

石蠟包埋組織以4 μm厚連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟至水，切片浸于50 mmol/L（pH8.0）乙二胺四乙酸溶液中，微波抗原修復10 min，冷卻至室溫，充分水洗，PBS浸洗，滴加正常山羊血清封閉液，室溫20 min；甩去多余液體，不洗，加入TSLC1多抗或CD105單抗4℃過夜；PBS洗；滴加SP 9000通用型生物素標記二抗，37℃，40 min；二氨基聯苯氨顯色30 s，蘇木素復染，乙醇脫水、透明、中性樹膠封固。二氨基聯苯氨顯色液配制：取DAB 5 mg溶于100 ml 0.05 mol/L Tris-鹽酸（pH7.6）中，加入30%過氧化氫10 μl，攪拌混勻后過濾（用前新配制）；采用該公司提供的陽性切片為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 陽性結果判定

TSLC1以胞核和胞質中出現棕色或棕黃色顆粒為陽性細胞。按半定量積分法判斷兩者表達情況，根據染色強度及陽性細胞所占比例分別記為0～3分。染色強度：未著色為0分，著色淺為1分，中度著色為2分，著色深為3分。陽性細胞百分率：高倍鏡（×400）下隨機選取10個視野，每個視野計數100個細胞。計算其平均陽性百分率，平均陽性細胞百分率≥5%表示為陽性。

CD105標記的MVD計數：先在低倍鏡下全面觀察切片以確定腫瘤內血管密度最高處，即熱點處；再在高倍鏡（0.189 mm2/視野）下，以與周圍腫瘤細胞和結締組織成分明顯區(qū)別的任何一個棕色染色的內皮細胞或細胞叢維一個血管，只要結構不相連，其分支結構也作為一個血管計數；記錄3個視野內的微血管數，取其平均數作為該患者的MVD值，雙盲分析結果。

1.4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件對數據進行分析和處理，計量資料以表示，采用t檢驗或方差分析，計數資料采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 TSLC1在不同病變宮頸組織中的表達情況

宮頸癌組織中TSLC1的表達陽性率低于正常宮頸、CIN組織，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=23.1245，P＜0.01）（表1）。

表1 TSLC1在不同病變宮頸組織中的表達情況（n）

2.2 TSLC1表達與宮頸癌臨床病理特征的關系

TSLC1表達與宮頸癌組織學分化程度、FIGO分期、淋巴結轉移有關（P＜0.05）（表2）。

表2 TSLC1表達與宮頸癌臨床病理特征的關系

2.3 CD105標記MVD在不同病變宮頸組織中的表達強度

正常宮頸、CIN、宮頸癌組織中CD105標記MVD的表達強度分別為（3.1217±0.6070）、（6.2411±1.0256）、（13.5956±1.2460），宮頸癌組織中CD105標記MVD的表達強度高于正常宮頸、CIN組織，差異有統(tǒng)計學意義（F=11.6267，P＜0.01）。

2.4 CD105標記MVD表達強度與宮頸癌臨床病理特征的關系

CD105標記MVD表達強度與宮頸癌FIGO分期、淋巴結轉移有關（P＜0.05）（表3）。

表3 CD105標記MVD表達強度與宮頸癌臨床病理特征的關系

3 討論

TSLC1屬于細胞黏附分子中免疫球蛋白超家族成員，與神經細胞黏附分子NCAM1（neural cell adhesion molecule）和NCAM2具有很高的同源性，TSLC1定位于人染色體11q23.2，全長＞300 kb，含有10個外顯子，編碼一段4.4或1.6 kb的mRNA序列，最終翻譯成一種442個氨基酸的跨膜糖蛋白，研究表明，TSLC1與細胞黏附、細胞間信號傳導、抑制細胞生長周期、免疫調節(jié)和誘導細胞凋亡有關，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起負性作用[10-11]。Yang等[12]通過研究TSLC1在卵巢癌中的表達發(fā)現，TSLC1在卵巢癌、卵巢交界性腫瘤、卵巢囊腺瘤中表達缺失率分別為：59%、45%、7%，但在正常卵巢中未見減少（0%），在卵巢囊腺瘤→卵巢交界性腫瘤→卵巢癌3個不同階段TSLC1基因的表達呈明顯下降趨勢，其表達減少或缺失與淋巴結轉移呈正相關，與患者的存活率呈顯著相關性，是一個重要的獨立預后因素和預測患者存活率的指標，以上研究表明，TSLC1失活促進卵巢癌的浸潤和轉移，抑制癌細胞的凋亡，在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展中起負相關作用。本研究結果表明，TSLC1在正常宮頸、CIN和宮頸癌組織中的表達強度依次降低，差別有統(tǒng)計學意義，隨FIGO分期增高，TSLC1陽性表達率亦降低；低分化者TSLC1陽性表達率明顯低于高、中分化者；有淋巴結轉移者TSLC1陽性表達率明顯低于無淋巴結轉移者，提示TSLC1在宮頸癌組織中的表達與宮頸癌組織學分化程度、FIGO分期、淋巴結轉移有關，TSLC1作為腫瘤抑制基因，在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中起一定的作用。

CD105位于人染色體9q34，是一種同型二聚體的膜結合性糖蛋白，分子量為180 kD，CD105在多種腫瘤組織的內皮細胞中特異性高表達，與細胞增殖指標Ki67、CyclinA的表達明顯相關，是內皮細胞增殖的相關標志物，能定量區(qū)別腫瘤新生血管和已存在血管，多因素分析顯示，用CD105測定的MVD是一個惡性腫瘤獨立的預后指標[13-14]。梁啟廉等[15]通過動物模型的研究發(fā)現，抗Endoglin單克隆抗體可顯著抑制人類胰腺癌PC-3細胞株的生長，最高抑瘤率可達67.13%，抗Endoglin單克隆抗體有望作為胰腺癌的生物基因工程治療方法之一。本研究結果表明，隨著正常宮頸組織→CIN→宮頸癌的轉化，CD105標記MVD表達強度依次增加，隨FIGO分期增高，CD105標記MVD表達強度亦隨之增加，有淋巴結轉移者明顯高于無淋巴結轉移者，提示CD105標記MVD與宮頸癌FIGO分期、淋巴結轉移有關，上述結果表明宮頸癌組織中TSLC1呈低表達、而CD105呈高表達，提示TSLC1和CD105在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中有重要意義，TSLC1和CD105表達水平的檢測可用于輔助宮頸癌的診斷和病情評估。

[1]Mega Tiber P，Baloglu L，Ozden S，et al.The association of apoptotic protein expressions sensitive to apoptosis gene，p73 and p53 with the prognosis of cervical carcinoma[J]. Onco Targets Ther，2014，26（7）：2161-2168.

[2]Liu QL，Liang QL，Li ZY，et al.Function and expression of prolyl hydroxylase 3 in cancers[J].Arch Med Sci，2013，9（4）：589-593.

[3]Yang SH，Kong SK，Lee SH，et al.Human papillomavirus 18 as a poor prognostic factor in stageⅠ-ⅡA cervical cancer following primary surgical treatment[J].Obstet Gynecol Sci，2014，57（6）：492-500.

[4]Liang QL，Chen GQ，Liu QL，et al.Tumor suppressor TSLC1 inhibits growth，proliferation，invasiveness and angiogenesis in nude mice xenografted tumor of Eca109 cells[J].Int J Clin Exp Med，2014，7（6）：1507-1515.

[5]You Y，Zhang J，Li Y，et al.CADM1/TSLC1 inhibits melanoma cell line A375 invasion through the suppression of matrix metalloproteinases[J].Mol Med Rep，2014，10（5）：2621-2626.

[6]Liang QL，Wang BR，Li ZY，et al.Effect of TSLC1 gene on growth and apoptosis in human esophageal carcinoma Eca109 cells[J].Arch Med Sci，2012，8（6）：987-992.

[7]梁啟廉，李志東，吳斌華，等.抗CD105單克隆抗體對大腸癌生長的抑制作用[J].中華實驗外科雜志，2009，26（2）：165-166.

[8]Dubinski W，Gabril M，Iakovlev VV，et al.Assessment of the prognostic significance of endoglin（CD105）in clear cell renal cell carcinoma using automated image analysis[J]. Hum Pathol，2012，43（7）：1037-1043.

[9]梁啟廉，陳小東，李建文，等.胃癌及癌前病變組織中Endoglin標記的微血管密度表達意義[J].腫瘤研究與臨床，2006，18（2）：85-86.

[10]Liang QL，Wang BR，Li ZY，et al.Construction of eukaryotic expression vector of TSLC1 gene[J].Arch Med Sci，2011，7（4）：579-585.

[11]Liang QL，Chen GQ，Li ZY，et al.Function and histopathology of a cell adhesion molecule TSLC1 in cancer[J].Cancer Invest，2011，29（2）：107-112.

[12]Yang G，He W，Cai M，et al.Loss/Down-regulation of tumor suppressor in lung cancer 1 expression is associated with tumor progression and is a biomarker of poor prognosis in ovarian carcinoma[J].Int J Gynecol Cancer，2011，21（3）：486-493.

[13]Zhuo H，Lyu Z，Su J，et al.Effect of lung squamous cell carcinoma tumor microenvironment on the CD105（+）endothelial cell proteome[J].J Proteome Res，2014，13（11）：4717-4729.

[14]Zhang Y，Hong H，Engle JW，et al.Positron emission tomography and optical imaging of tumor CD105 expression with a dual-labeled monoclonal antibody[J].Mol Pharm，2012，9（3）：645-653.

[15]梁啟廉，李志東，吳斌華，等.抗Endoglin單克隆抗體對裸鼠胰腺癌移植瘤生長的影響[J].第四軍醫(yī)大學學報，2009，30（6）：520-522.

Expression and significance of TSLC1 and CD105 in cervical carcinoma

ZHONG Jia-jing1WU Fei-yuan2DONG Hua1
1.Zhanjiang Jiuhe Hospital in Guangdong Province,Zhanjiang524000,China;2.Department of Obstetrics and Gynecology,Central People′s Hospital of Zhanjiang City in Guangdong Province,Zhanjiang524000,China

ObjectiveTo analyze the expression of tumor suppressor in lung cancer 1(TSLC1)and microvessel density (MVD)marked with CD105 and their relation to clinicopathological feature in cervical carcinoma.MethodsImmunohistochemical method was used to assess the expression of TSLC1 and CD105 in 18 cases of normal cervix,18 cases of cervical intraepithelial neoplasia(CIN)and 45 cases of cervical carcinoma.ResultsThe positive expression of TSLC1 was decreased from normal cervical to CIN to cervical carcinomas(P＜0.01).The expression of TSLC1 was related to histological grade,FIGO stage and lymph node metastasis(P＜0.05).The expression of MVD marked with CD105 was increased from normal cervical to CIN to cervical carcinomas(P＜0.05).The expression of MVD marked with CD105 was related to FIGO stage and lymph node metastasis(P＜0.05).ConclusionThere are low expression of TSLC1 but high expression of CD105 in cervical carcinoma,TSLC1 and CD105 may play closely reflect growth and regulation in cervical carcinomas,this study suggests that examine by using immunohistochemical method of TSLC1 and CD105 may be of value in indicating an important role in the occurrence and development of cervical carcinoma.

TSLC1;CD105;Normal cervix;Cervical intraepithelial neoplasia;Cervical carcinoma;Immunohistochemical method

R737.33

A

1674-4721（2015）02（a）-0049-04

2014-12-02本文編輯：李亞聰）