任 斌

（湖州中等衛(wèi)生專(zhuān)業(yè)學(xué)校，浙江長(zhǎng)興 313100）

金銀花腋芽快速繁殖體系探討

任 斌

（湖州中等衛(wèi)生專(zhuān)業(yè)學(xué)校，浙江長(zhǎng)興 313100）

以金銀花試管苗帶腋芽莖段為外植體，應(yīng)用L16（45）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，優(yōu)選出金銀花腋芽擴(kuò)繁的培養(yǎng)基。結(jié)果表明，金銀花經(jīng)腋芽擴(kuò)繁的最佳培養(yǎng)基是B5＋NAA 0.05 mg·L－1＋BA 2.0 mg·L－1＋GA31.0 mg· L－1，繁殖系數(shù)達(dá)4.1。

金銀花；腋芽；快速繁殖

文獻(xiàn)著錄格式：任斌.金銀花腋芽快速繁殖體系探討［J］.浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，56（1）：56－57.

DOI 10.16178／j.issn.0528?9017.20150117

金銀花（Lonicera japonica）為我國(guó)傳統(tǒng)中藥材，具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱之功效，被譽(yù)為中藥中的青霉素，近年來(lái)由于我國(guó)先后經(jīng)歷了非典型肺炎、禽流感等疫情，防疫形勢(shì)嚴(yán)峻，金銀花市場(chǎng)需求量越來(lái)越大，而傳統(tǒng)的無(wú)性繁殖方式已經(jīng)無(wú)法滿(mǎn)足金銀花需求量的快速增長(zhǎng)。對(duì)于金銀花快繁體系的研究，國(guó)內(nèi)外已有一些報(bào)道。Suk等［1］以金銀花的合子胚為外植體，利用合子胚衍生的胚性細(xì)胞建立了細(xì)胞懸浮培養(yǎng)體系，再經(jīng)體細(xì)胞發(fā)生途徑再生為植株；宋振巧等［2］對(duì)中花1號(hào)金銀花進(jìn)行組培研究，經(jīng)愈傷組織和叢生芽誘導(dǎo)，建立快繁體系；李景剛等［3］以金銀花的嫩枝梢為外植體，經(jīng)愈傷組織和叢生芽誘導(dǎo)建立快速繁殖體系；李軍等［4］以在平邑縣發(fā)現(xiàn)的金銀花自然變異優(yōu)良品種紅河金銀花為材料，建立了腋芽快繁體系。經(jīng)愈傷組織誘導(dǎo)途徑而再生的植株，由于細(xì)胞變異等原因，會(huì)產(chǎn)生變異植株，在遺傳穩(wěn)定性上不如經(jīng)腋芽再生的植株。已報(bào)道的金銀花快繁體系的繁殖系數(shù)也不是很高［5－6］。

正交設(shè)計(jì)與數(shù)據(jù)分析方法作為選擇最佳試驗(yàn)方案的有效工具，能同時(shí)考察多因素對(duì)試驗(yàn)的影響，常用于植物快繁體系的研究［7－8］，但在金銀花的快速繁殖研究中鮮見(jiàn)報(bào)道。本研究旨在建立一個(gè)更穩(wěn)定、高效的金銀花快速繁殖體系，應(yīng)用L16（45）正交試驗(yàn)，進(jìn)行金銀花腋芽快速繁殖體系的研究，為金銀花的快速繁育提供參考。現(xiàn)將有關(guān)金銀花快速繁育的試驗(yàn)結(jié)果總結(jié)和報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

以金銀花為外植體，在B5空白培養(yǎng)基上培養(yǎng)30 d，以所得試管苗作為試驗(yàn)材料。

1.2 處理設(shè)計(jì)

通過(guò)L16（45）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，研究6?BA，NAA，IAA，GA3不同外源激素對(duì)金銀花腋芽擴(kuò)繁的影響。1－4水平BA因素分別為0.50，1.00，2.00和4.00 mg·L－1；NAA因素分別為0.00，0.05，0.10和0.50 mg·L－1；IAA因素分別為0.00，0.50，1.00和2.00 mg·L－1；GA3因素分別為0.00，0.20，0.50和1.00 mg·L－1。

以金銀花帶腋芽莖段為外植體（去除葉片），每瓶接種5個(gè)，每處理接種5瓶。25℃下全光照培養(yǎng)40 d后，測(cè)定每瓶的腋芽數(shù)目，求平均值。

2 結(jié)果與分析

2.1 腋芽數(shù)

各處理組的每瓶平均腋芽數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果如表1所示。

根據(jù)直觀(guān)分析表明，腋芽增殖效果最好的是處理10，達(dá)20.6個(gè)，即培養(yǎng)40 d后，繁殖系數(shù)達(dá)4.1。極差分析表明，4個(gè)因素對(duì)腋芽擴(kuò)繁的影響大小依次為NAA＞BA＞GA3＞IAA，其中NAA對(duì)繁殖系數(shù)影響最大。

為了更好地反映各處理因子對(duì)腋芽繁殖的影響，以便尋求腋芽擴(kuò)繁的最佳培養(yǎng)基組，對(duì)表1試驗(yàn)結(jié)果作進(jìn)一步方差分析。結(jié)果表明，4個(gè)因素對(duì)腋芽擴(kuò)繁的影響大小依次為NAA（F＝7.185?）＞BA（F＝5.344）＞GA3（F＝0.898）＞IAA（F＝0.698），其中NAA對(duì)腋芽擴(kuò)繁有顯著影響。腋芽擴(kuò)繁的最佳培養(yǎng)基為B5＋NAA 0.05 mg·L－1＋BA 2.0 mg·L－1＋GA31.0 mg·L－1，繁殖系數(shù)達(dá)4.1。

2.2 試管苗

獲得的叢生腋芽再在生根培養(yǎng)基B5＋NAA 0.05 mg·L－1＋I(xiàn)BA 0.4 mg·L－1＋MET 0.5 mg· L－1培養(yǎng)30 d后，即可獲得形態(tài)正常的試管苗。

圖1中a是金銀花單個(gè)腋芽在擴(kuò)繁培養(yǎng)基培養(yǎng)40 d后的生長(zhǎng)情況；b是擴(kuò)繁苗在生根培養(yǎng)基培養(yǎng)40 d后生長(zhǎng)情況。由圖可知，試管苗形態(tài)正常，生長(zhǎng)旺盛，根系發(fā)達(dá)，有利于后期的移栽成活。

3 小結(jié)與討論

試驗(yàn)應(yīng)用L16（45）正交試驗(yàn)建立金銀花快繁體系，結(jié)果表明，腋芽擴(kuò)繁的最佳培養(yǎng)基為B5＋NAA 0.05 mg·L－1＋BA 2.0 mg·L－1＋GA31.0 mg· L－1，繁殖系數(shù)達(dá)4.1，獲得叢生腋芽在先前研究建立的生根培養(yǎng)基B5＋NAA 0.05 mg·L－1＋I(xiàn)BA 0.4 mg·L－1＋MET 0.5 mg·L－1培養(yǎng)30 d后，即可獲得形態(tài)正常的試管苗。以上研究為下一步金銀花多倍體育種和優(yōu)良品種的工廠(chǎng)化育苗打下了基礎(chǔ)。

［1］ Kim S W，Oh S C，In D S，et al.High frequency somatic embryogenesis and plant regeneration in zygotic embryo cultures of Japanese honeysuckle［J］.Plant Cell，Tissue and Organ Culture，2003，72：277－280.

［2］ 宋振巧，陳為序，王建華.金銀花開(kāi)花與繁育特性研究［J］.山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，44（1）：32－34，38.

［3］ 李景剛，孫滿(mǎn)芝.良種金銀花的組培快繁技術(shù)研究［J］.山東林業(yè)科技，2004（6）：36－37.

［4］ 李軍，喬元偉.紅河金銀花的組培快繁技術(shù)［J］.山東林業(yè)科技，2000（3）：41－42.

［5］ 劉偉，和兆榮，周厚高.金銀花組織培養(yǎng)初報(bào)［J］.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2006，22（8）：99－101.

［6］ 王文靜，王鵬，李偉強(qiáng).紅金銀花組培快繁技術(shù)研究［J］.北方園藝，2013（18）：100－102.

［7］ 魏翠華，秦建彬，謝宇，等.應(yīng)用正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選臺(tái)灣金線(xiàn)蓮快繁培養(yǎng)基［J］.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2013，29（4）：114－117.

［8］ 孫周平，褚麗敏，洪仁偉.正交設(shè)計(jì)在刺五加組織培養(yǎng)中的應(yīng)用［J］.中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2010，26（4）：85－88.

（責(zé)任編輯：張瑞麟）

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湖州市科技局項(xiàng)目（2013GY31）

任 斌（1981－），男，講師，碩士，從事中藥組織培養(yǎng)及優(yōu)良品種培育研究工作。E?mail：hzwxrb＠126.com。