楊 光，金春子*（吉林省延邊大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 延邊 133000）

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NOS在側(cè)支血管生長(zhǎng)中對(duì)血管VE-cadherin表達(dá)及通透性的影響

楊 光，金春子*
（吉林省延邊大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 延邊 133000）

【摘要】目的 探究氧化氮合酶（NOS）在側(cè)支血管生長(zhǎng)中對(duì)血管VE-cadherin表達(dá)及通透性的影響。方法 選取40只成年SD（Sprague-Dawley）大鼠作為研究對(duì)象，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為正常組及研究組（股動(dòng)脈結(jié)扎并腹腔注射N(xiāo)OS）各20只。采用蘇木素-伊紅染色法、伊文思藍(lán)通透性實(shí)驗(yàn)觀察兩組大鼠側(cè)支血管生長(zhǎng)中血管VE-cadherin表達(dá)及通透性變化情況。結(jié)果 研究組大鼠實(shí)施股動(dòng)脈結(jié)扎誘導(dǎo)側(cè)支血管生長(zhǎng)并腹腔注射N(xiāo)OS存活1周后，其血管VE-cadherin表達(dá)（190.2±22.8），與正常組（169.5±15.5）相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；VE-cadherin通透性指標(biāo)上，研究組伊文思藍(lán)滲出量（37.5±5.8）ng/mg，與正常組（80.5±11.0）ng/mg相比較，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 NOS能夠顯著提高血管VE-cadherin表達(dá)，從而降低血管通透性以及阻斷側(cè)支血管炎癥的形成與發(fā)展，對(duì)血管疾病的治療具有重要應(yīng)用價(jià)值，值得在臨床中推廣使用。

【關(guān)鍵詞】側(cè)支血管；血管內(nèi)皮鈣粘蛋白；伊文思藍(lán)；通透性

如何降低血管通透性以及阻斷側(cè)支血管炎癥的形成與發(fā)展成為當(dāng)前國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)界關(guān)注的焦點(diǎn)問(wèn)題。為此，本次研究針對(duì)NOS在側(cè)支血管生長(zhǎng)中對(duì)血管VE-cadherin表達(dá)及通透性的影響展開(kāi)深入分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1 一般資料

選取40只成年SD（Sprague-Dawley）大鼠作為研究對(duì)象，其中雄性22只，雌性18只，體重220～250 g，平均體重（235±10）g，均為某醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)部自行培育繁殖的健康SD鼠。

1.2 方法

臨床研究人員采用隨機(jī)數(shù)字表法分為正常組及研究組（股動(dòng)脈結(jié)扎并腹腔注射N(xiāo)OS），各20只。研究組股動(dòng)脈結(jié)扎并腹腔注射N(xiāo)OS步驟如下。研究用大鼠經(jīng)過(guò)適應(yīng)性觀察后采用15%水合氯酸溶液實(shí)施腹腔麻醉，其使用劑量標(biāo)準(zhǔn)為300 mg/kg。取仰臥位并將其四肢充分固定之后暴露腹部皮膚并絡(luò)合碘消毒，在其腹腔部位與腿部交匯之處腹股溝韌帶下方部位逐層分離皮膚組織，分離出股動(dòng)脈后切斷其余小分支并使用醫(yī)用棉線實(shí)施雙結(jié)扎，并向其結(jié)扎后的股動(dòng)脈注入NOS抑制劑。之后使用生理鹽水進(jìn)行細(xì)致消毒后逐層關(guān)閉創(chuàng)口。將所有實(shí)驗(yàn)用大鼠放置在25℃環(huán)境中培養(yǎng)1周后選取培養(yǎng)部位生理切片放入4%多聚甲醛溶液固定15 min，隨后放入0.5%伊紅染液予以染色90 s后平放于室溫條件下自然風(fēng)干，之后采用高倍光學(xué)顯微鏡觀察組織形態(tài)變化情況并做相應(yīng)記錄。隨后進(jìn)行伊文思藍(lán)（Evanceblue，EB）通透性實(shí)驗(yàn)，首先配置伊文思藍(lán)溶液，將2%伊文思藍(lán)（美國(guó)Sigma-Aldrich公司生產(chǎn)）50 mg溶解于10 mL生理鹽水并經(jīng)超聲波振蕩溶解。其次，打開(kāi)實(shí)驗(yàn)用大鼠胸腔，從其左心室-升主動(dòng)脈將50 mL生理鹽水注入，當(dāng)無(wú)殘余血液流出后依次切開(kāi)皮膚組織并取出側(cè)支血管及其附近組織放入樣本管。第三，定量檢測(cè)。使用甲酰胺將對(duì)2%伊文思藍(lán)進(jìn)行稀釋，濃度以20 ng/μL為宜。隨后制作伊文思藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將經(jīng)過(guò)稀釋的伊文思藍(lán)溶液對(duì)半稀釋成為10 ng/μ、5 ng/μ、2.5 ng/μ、1.25 ng/μ等幾個(gè)標(biāo)準(zhǔn)值。將制備好的樣本在60℃孵育箱中培養(yǎng)24 h，以10000 r/min離心30 min后去除上清液后詳細(xì)記錄分光光度計(jì)620 nm處的吸光值并根據(jù)已經(jīng)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算其通透性[1]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本次研究當(dāng)中的所有數(shù)據(jù)均采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料以“x ±s”表示，采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié) 果

2.1 NOS在側(cè)支血管生長(zhǎng)中對(duì)血管VE-cadherin表達(dá)的影響

研究組大鼠實(shí)施股動(dòng)脈結(jié)扎誘導(dǎo)側(cè)支血管生長(zhǎng)并腹腔注射N(xiāo)OS存活1周后，其血管VE-cadherin表達(dá)（190.2±22.8），與正常組（169.5±15.5）相比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=8.581，P＜0.05）。

2.2 NOS在側(cè)支血管生長(zhǎng)中對(duì)血管VE-cadherin通透性的影響

VE-cadherin通透性指標(biāo)上，研究組伊文思藍(lán)滲出量（37.5±5.8）ng/mg，與正常組（80.5±11.0）ng/mg相比較，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=9.589，P＜0.05）。

3　討 論

根據(jù)當(dāng)前臨床研究證實(shí)，血管內(nèi)皮細(xì)胞之間存在三種連接形式。分別是粘附連接、緊密連接、縫隙連接[3]。在上述三種連接相互作用配合之下，維持了機(jī)體內(nèi)部血管的完整性。而在此其中VE-cadherin利用自身的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域與分布在周?chē)钠渌鸙E-cadherin緊密連接，從而形成同型型粘附關(guān)系，之后連接至β-catenin，或者有目的性的與plakoglobin（斑珠蛋白）、α-catenin等相連接，構(gòu)成了血管壁所具有的屏障功能[3]。目前臨床中常見(jiàn)的血管疾病通常是由于主動(dòng)脈血管腔徑變窄或者在局部區(qū)域形成阻塞，繼而導(dǎo)致血管破裂，從而引發(fā)的一系列疾病。通過(guò)進(jìn)一步深入研究發(fā)現(xiàn)，患有血管疾病的患者自身主動(dòng)脈發(fā)生阻塞之后常常會(huì)發(fā)生側(cè)支血管瘋狂生長(zhǎng)現(xiàn)象，盡管該現(xiàn)象在一定程度上能夠提高血氧的輸送量，但是，側(cè)支血管通透性的大幅提升，同時(shí)也會(huì)導(dǎo)致血管炎癥隨之轉(zhuǎn)移，并朝著深處進(jìn)一步發(fā)展。此外，由于此種情形可以降低VE-cadherin表達(dá)，繼而嚴(yán)重破壞血管壁組織結(jié)構(gòu)，造成不可逆性通透性增加，加重病情[4]。所以，針對(duì)側(cè)支血管生長(zhǎng)實(shí)施干預(yù)成為當(dāng)前控制血管疾病進(jìn)展的關(guān)鍵。

本次研究中研究組大鼠實(shí)施股動(dòng)脈結(jié)扎誘導(dǎo)側(cè)支血管生長(zhǎng)并腹腔注射N(xiāo)OS存活1周后，其血管VE-cadherin表達(dá)（190.2±22.8）明顯高于正常組（169.5±15.5），并且在VE-cadherin通透性指標(biāo)上，研究組伊文思藍(lán)滲出量（37.5±5.8）ng/mg顯著低于正常組的（80.5±11.0）ng/mg，結(jié)果表明NOS能夠顯著提高血管VE-cadherin表達(dá)，從而降低血管通透性以及阻斷側(cè)支血管炎癥的形成與發(fā)展，對(duì)血管疾病的治療具有重要應(yīng)用價(jià)值，值得在臨床中推廣使用。

參考文獻(xiàn)

[1]余 濤,劉曼曼,李 丹,等.去甲斑蝥素對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞遷移、黏附、管腔形成能力及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體、內(nèi)皮細(xì)胞鈣黏著蛋白表達(dá)的影響[J].中國(guó)癌癥雜志,2012,03:232-235.

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［基金項(xiàng)目］國(guó)家自然科學(xué)基金（81460039）；吉林省科技廳青年科研基金（20140520024JH）；吉林省衛(wèi)生廳青年科研基金（2014Q043）

［通訊作者］金春子,(1984-)女，吉林延吉人，醫(yī)學(xué)博士，主治醫(yī)師，研究方向:高血壓

【文章編號(hào)】ISSN.2095-6681.2015.04.185.02

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B

【中圖分類號(hào)】R543