李雅 葉淑芳 汪劍波 施驊 周新木 涂朝勇

Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ在胃印戒細(xì)胞癌中的表達(dá)特點及臨床意義

李雅 葉淑芳 汪劍波 施驊 周新木 涂朝勇

目的 探討P-糖蛋白（Pgp）、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶π（GST-π）、拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ（TOPO-Ⅱ）在胃印戒細(xì)胞癌中的表達(dá)特點及其臨床意義。方法 以免疫組化檢測64例胃印戒細(xì)胞癌組織中Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ的表達(dá)，并分析其特點及與患者臨床病理特征間的關(guān)系。結(jié)果 Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ在胃印戒細(xì)胞癌中的陽性表達(dá)率分別為25.0%（16/64）、35.9%（23/64）、40.6%（26/64），在胃高-中分化腺癌中陽性表達(dá)率分別為10.9%（7/64）、37.5%（24/64）、60.9%（39/64）。Pgp在胃印戒細(xì)胞癌中陽性表達(dá)率高于高-中分化腺癌，TOPO-Ⅱ的陽性表達(dá)率則低于高-中分化腺癌，均有統(tǒng)計學(xué)差異（均P＜0.05），而GST-π陽性表達(dá)率與胃高-中分化腺癌比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。胃印戒細(xì)胞癌的Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ陽性表達(dá)率在不同臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者間比較均有統(tǒng)計學(xué)差異（均P＜0.05），在不同年齡、性別患者間比較均無統(tǒng)計學(xué)差異（均P＞0.05）。結(jié)論 Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ的表達(dá)對治療及預(yù)后判斷具有一定的參考意義。

胃 印戒細(xì)胞癌 Pgp GST-π TOPO-Ⅱ 免疫組化

【 Abstract】 Objective To investigate the expression and clinicopathological significance of P-glycolprotein(Pgp), glutathione transferase(GST-π),type II DNA topoisomerase(TOPO-Ⅱ)in the gastric signet ring cell carcinoma. Methods The expression of Pgp,GST-π,TOPO-Ⅱwas detected with immunohistochemistry in 64 cases of gastric signet ring cell carcinoma and 64 cases of well or moderately differentiated gastric adenocarcinoma.The relationship between Pgp,GST-π, TOPO-Ⅱexpression and clinicopathologcal features was analyzed. Results The expression rates of Pgp,GST-π,TOPO-Ⅱin the gastric signet ring cell carcinoma were 25.0%(16/64),35.9%(23/64)and 40.6%(26/64),respectively,while the expression rates in the well and moderately differentiated gastric adenocarcinoma were 10.9%(7/64),37.5%(24/64)and 60.9% (39/64).The expression of Pgp in the gastric signet ring cell carcinoma was higher than that in well and moderately differentiation gastric carcinoma.There was no significant difference in the expression of GST-π between two types of gastric carcinoma.The expression of TOPO-Ⅱin the gastric signet ring cell carcinoma was lower than that of well and moderately differentiation gastric carcinoma.There were significant differences in Pgp,GST-π,TOPO-Ⅱ expression between gastric signet ring cell carcinomas with different clinical stages and lymph node metastasis status(P＜0.05),but no significant difference among patients with different age and gender(P＞0.05). Conclusion The expression of Pgp,GST-π and TOPO-Ⅱ is associated with clinicopathological features of gastric signet ring cell carcinoma and has certain reference value for treatment and prognosis.

近年來研究結(jié)果顯示，胃癌的總體發(fā)病率已明顯降低[1]，但彌漫型胃癌尤其是胃印戒細(xì)胞癌的發(fā)病率顯著升高。胃印戒細(xì)胞癌是胃癌的一種特殊類型，發(fā)病率占原發(fā)性胃癌的3.4%～39.0%[2]。研究發(fā)現(xiàn)胃印戒細(xì)胞癌在發(fā)病年齡、性別、胃鏡檢查表現(xiàn)、臨床病理特征、相關(guān)分子病理學(xué)機制以及預(yù)后等方面均有其特殊性[3]。本研究檢測了64例胃印戒細(xì)胞癌組織中P-糖蛋白（Pgp）、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶π（GST-π）、拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ（TOPO-Ⅱ）的表達(dá)，分析探討其與患者臨床病理特征之間的關(guān)系及臨床意義。

1 對象和方法

1．1 對象 以2006年1月至2013年12月間手術(shù)切除后經(jīng)病理確診、且資料較完整的64例胃印戒細(xì)胞癌患者標(biāo)本作為研究對象，均按WHO《消化系統(tǒng)腫瘤病理學(xué)和遺傳學(xué)（2003版）》[4]的診斷標(biāo)準(zhǔn)確診，經(jīng)2位以上資深病理醫(yī)師復(fù)診，其中男31例，女33例，年齡31～75歲，中位年齡50歲。另隨機選取同期64例胃高-中分化腺癌標(biāo)本，其中男34例，女30例；年齡32～76歲，中位年齡51歲。同時隨機選取同期正常胃黏膜組織標(biāo)本30例作為對照，其中男17例，女13例，年齡33～78歲，中位年齡52歲。

1.2 方法 采用免疫組化En Vision二步法。Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ抗體試劑均購自北京中杉生物試劑有限公司。標(biāo)本經(jīng)10%中性甲醇固定，石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片，常規(guī)脫蠟水化后，采用高壓鍋進行抗原修復(fù)。用3%過氧化氫室溫孵育10min，洗滌3次后分別滴加抗體Pgp（1∶50稀釋）、GST-π（1∶50稀釋）和TOPO-Ⅱ（1∶50稀釋），37℃孵育130min，洗滌后DBA顯色劑顯色，蘇木素染核，封片，鏡檢。同時用PBS代替一抗作陰性對照，用已知的陽性切片作陽性對照。

1.3 結(jié)果判定 Pgp蛋白陽性表達(dá)為在細(xì)胞膜和胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕色顆粒，GST-π陽性表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，TOPO-Ⅱ陽性表達(dá)在細(xì)胞核。高倍鏡下取10個高倍視野，每個視野計數(shù)100個細(xì)胞，共計數(shù)1 000個細(xì)胞，陽性細(xì)胞比例≥25.0%為陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件，用χ2檢驗或精確概率法分析不同組別間Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ表達(dá)的差異。

2 結(jié)果

2.1 Pgp的表達(dá) 64例胃印戒細(xì)胞癌組織中Pgp陽性表達(dá)共16例（圖1A），陽性表達(dá)率25.0%；64例胃高-中分化腺癌組織中陽性表達(dá)共7例，陽性表達(dá)率10.9%；30例正常胃黏膜組織中有1例陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率3.3%。Pgp在胃印戒細(xì)胞癌中的陽性表達(dá)率高于胃高-中分化腺癌和正常胃黏膜組織，均具有統(tǒng)計學(xué)差異（χ2=6.7、14.6，均P＜0.05）。

2.2 GST-π的表達(dá) 64例胃印戒細(xì)胞癌組織中GST-π陽性表達(dá)共23例（圖1B），陽性表達(dá)率35.9%；64例胃高-中分化腺癌組織中陽性表達(dá)共24例，陽性表達(dá)率37.5%；30例胃正常黏膜組織中陽性表達(dá)共5例，陽性表達(dá)率16.7%。胃印戒細(xì)胞癌中陽性表達(dá)率與胃高-中分化腺癌比較無統(tǒng)計學(xué)差異（χ2=0.254，P＞0.05）；但高于正常胃黏膜組織（χ2=7.7，P＜0.05）。

2.3 TOPO-Ⅱ的表達(dá) 64例胃印戒細(xì)胞癌組織中TOPO-Ⅱ陽性表達(dá)共26例（圖1C），陽性表達(dá)率40.6%；64例胃高-中分化腺癌組織中陽性表達(dá)共39例，陽性表達(dá)率60.9%；30例胃正常黏膜組織中陽性表達(dá)2例，陽性表達(dá)率6.7%。胃印戒細(xì)胞癌中陽性表達(dá)率明顯低于胃高-中分化腺癌，而高于正常胃黏膜組織，均有統(tǒng)計學(xué)差異（χ2=11.7、13.7，均P＜0.05）。

圖1 Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ在胃印戒細(xì)胞癌組織中的表達(dá)（A：Pgp；B：GST-π；C：TOPO-Ⅱ；免疫組化En Vision二步法染色，×100）

2.4 Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ表達(dá)與胃印戒細(xì)胞癌患者臨床病理特征的關(guān)系 胃印戒細(xì)胞癌的Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ陽性表達(dá)率在不同臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者間比較均有統(tǒng)計學(xué)差異（均P＜0.05），在不同年齡、性別患者間比較均無統(tǒng)計學(xué)差異（均P＞0.05），見表1。

3 討論

胃印戒細(xì)胞癌是胃黏液癌中的特殊類型，屬于低分化癌，好發(fā)于年輕女性、侵襲力強、預(yù)后差[5]，就診時患者大多已屬中晚期，失去手術(shù)機會，化療成為主要的治療手段。而胃癌化療的療效很大程度上受到腫瘤細(xì)胞多藥耐藥（MDR）的影響。MDR是指腫瘤細(xì)胞長期接觸一種化療藥物，不僅對該化療藥物產(chǎn)生耐藥性，而且對結(jié)構(gòu)和功能不同的多種藥物產(chǎn)生交叉耐藥性，是造成腫瘤化療失敗的主要原因。胃癌MDR的產(chǎn)生與化療藥物代謝以及細(xì)胞增殖有關(guān)，其中Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ3種耐藥基因?qū)τ谖赴┑陌l(fā)生、發(fā)展及化療反應(yīng)起著重要作用，這些細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)是惡性腫瘤產(chǎn)生MDR的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。本研究通過免疫組化方法檢測這3種基因在胃印戒細(xì)胞癌、胃高-中分化腺癌以及正常胃黏膜組織中的表達(dá)，并分析其表達(dá)與患者臨床病理特征間的相關(guān)性，以期能為臨床上胃印戒細(xì)胞癌患者的治療和預(yù)后判斷提供理論和實驗依據(jù)。

表1 Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ陽性表達(dá)率與胃印戒細(xì)胞癌患者臨床病理特征的關(guān)系[例（%）]

Pgp為含1 280個氨基酸的一種膜轉(zhuǎn)運蛋白，具有通道蛋白的功能，在三磷酸腺苷（ATP）的參與下可與多種藥物結(jié)合，并以主動轉(zhuǎn)運的方式將細(xì)胞內(nèi)的親脂類藥物泵出細(xì)胞外，從而使細(xì)胞內(nèi)藥物濃度降低，最終造成耐藥現(xiàn)象。Pgp高表達(dá)時提示對蒽環(huán)類、長春堿類及紫杉醇類藥物耐藥。凌斌勛等[6]報道Pgp在胃癌中陽性表達(dá)率為79.9%，與本研究結(jié)果相符。本研究發(fā)現(xiàn)Pgp在印戒細(xì)胞癌組織中呈高表達(dá)，提示其對親脂性抗癌藥物易耐藥；其次腫瘤細(xì)胞分化程度越低、臨床分期越高、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者Pgp表達(dá)程度越高，提示其可能與惡性腫瘤細(xì)胞侵襲性有關(guān)。

GST是一組多功能藥物代謝酶，許多藥物都在GST催化下通過與谷胱甘肽（GSH）結(jié)合而解毒,與細(xì)胞內(nèi)解毒密切相關(guān)，其中GST-π活性最高，與腫瘤MDR關(guān)系最密切。GST-π表達(dá)增加主要介導(dǎo)烷化劑、鉑類、絲裂霉素類等藥物耐藥[7]。GST-π在胃癌中的表達(dá)明顯增高，可高達(dá)80.0%[8-9]。本研究發(fā)現(xiàn)胃印戒細(xì)胞癌中GST-π陽性表達(dá)率明顯增高，高于正常胃黏膜組織，且有統(tǒng)計學(xué)差異，與胃高-中分化癌無統(tǒng)計學(xué)差異，且所有患者在取材前均未接受放化療，說明GST-π高表達(dá)可能與胃癌原發(fā)性耐藥密切相關(guān)，提示通過檢測GST-π的表達(dá)情況可了解患者對化療藥物的耐受情況，有利于制定更為有效的化療方案，進而獲得滿意的化療效果。其次臨床分期越高，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者GST-π表達(dá)程度越高，提示GST-π可能與惡性腫瘤細(xì)胞侵襲性有關(guān)，可作為預(yù)后判斷指標(biāo)之一。

TOPO-Ⅱ是一種重要的DNA限制酶，參與DNA的轉(zhuǎn)錄、翻譯、復(fù)制等過程，TOPO-Ⅱ能夠作為抗癌藥物的靶點，這類藥物主要包括胺丫啶、蒽環(huán)類和鬼臼霉素等[7]。TOPO-Ⅱ的質(zhì)和量改變所致的MDR，與腫瘤的惡性程度有關(guān)。本研究結(jié)果與劉麗梅等[10]研究結(jié)果相符，胃印戒細(xì)胞癌中TOPO-Ⅱ陽性表達(dá)率高于正常胃黏膜組織，明顯低于胃高-中分化腺癌，提示腫瘤惡性程度越低，TOPO-Ⅱ表達(dá)程度越高。細(xì)胞內(nèi)TOPO-Ⅱ水平直接影響TOPO-Ⅱ抑制劑的抗腫瘤活性，TOPO-Ⅱ表達(dá)程度越高，對抗癌藥物的敏感性越高。TOPO-Ⅱ含量和活性的降低可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的耐藥產(chǎn)生，這可能是印戒細(xì)胞癌對化療不敏感的原因之一。

綜上所述，本研究結(jié)果與呂春燕等[11]的研究結(jié)果一致，提示聯(lián)合檢測Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ3種耐藥基因的蛋白表達(dá)有利于判斷腫瘤耐藥情況、指導(dǎo)臨床化療藥物的選擇，對預(yù)后判斷具有一定的參考意義。因此在臨床上可聯(lián)合檢測Pgp、GST-π、TOPO-Ⅱ，籍此指導(dǎo)治療及評估預(yù)后，但影響胃癌預(yù)后的綜合因素很多，仍需進一步研究明確。

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（本文編輯：胥昀）

《浙江醫(yī)學(xué)》對圖表的要求

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本刊編輯部

Expression of Pgp,GST-π,TOPO-Ⅱ in gastric signet ring cell carcinoma and their clinicopathological significance

LI Ya,YE Shufang,WANG Jianbo,et al.
Department of Gastroenterology,the Central Hospital of Lishui,Lishui 323000,China

Stomach Gastric signet ring cell carcinoma Pgp GST-π TOPO-Ⅱ Immunohistochemistry

2014-11-03）

323000 麗水市中心醫(yī)院消化科

李雅，E-mail:liya9210@163.com