曾 晶 李子奎 王 樂(lè)

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南長(zhǎng)沙410007）

益氣化瘀方抗炎止血鎮(zhèn)痛作用的藥效學(xué)研究

曾 晶 李子奎 王 樂(lè)

（湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南長(zhǎng)沙410007）

目的：研究益氣化瘀方抗炎、止血、鎮(zhèn)痛作用。方法：通過(guò)二甲苯致小鼠耳腫脹模型、小鼠凝血與斷尾止血模型、小鼠熱板模型與醋酸致小鼠扭體模型，評(píng)價(jià)益氣化瘀方鎮(zhèn)痛、止血、抗炎的藥效學(xué)作用。結(jié)果：與空白組比較，益氣化瘀方各劑量均能明顯降低二甲苯致炎小鼠的耳腫脹度（P＜0.05），能明顯縮短小鼠凝血時(shí)間（P＜0.01）和出血時(shí)間（P＜0.01），明顯減少小鼠扭體次數(shù)（P＜0.01），顯著抑制小鼠出現(xiàn)的疼痛反應(yīng)（P＜0.05）。益氣化瘀方抗炎作用與阿司匹林相似（P＞0.05）；益氣化瘀方中、高劑量止血作用與氨基己酸、三七粉相當(dāng)（P＞0.05）；益氣化瘀方鎮(zhèn)痛作用和阿司匹林比較仍有顯著差異（P＜0.05）。結(jié)論：益氣化瘀方具有較好的抗炎、止血、鎮(zhèn)痛作用。

益氣化瘀方 耳郭腫脹度 凝血時(shí)間 出血時(shí)間 扭體次數(shù) 痛閾 小鼠

產(chǎn)后子宮內(nèi)膜慢性炎癥可能是導(dǎo)致產(chǎn)后復(fù)舊不全的主要原因[2]。益氣化瘀方是第四批全國(guó)老中醫(yī)藥專家學(xué)術(shù)經(jīng)驗(yàn)繼承工作指導(dǎo)老師尤昭玲教授臨床治療子宮復(fù)舊不全的常用有效方。臨床研究顯示，益氣化瘀方對(duì)產(chǎn)后子宮復(fù)舊不全表現(xiàn)為產(chǎn)后腹痛、產(chǎn)后惡露不絕、產(chǎn)后身痛等療效顯著[3]。結(jié)合產(chǎn)后多虛多瘀的病機(jī)特點(diǎn)，本研究擬從抗炎、止血、鎮(zhèn)痛藥效作用三個(gè)方面，探討益氣化瘀方的作用效果，為益氣化瘀方的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 BALB/C清潔級(jí)小鼠，雌雄兼?zhèn)洌w重18～22g，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。許可證號(hào):SCXK（湘）2011-0003，飼養(yǎng)于SPF實(shí)驗(yàn)室。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 益氣化瘀方（黨參8g，蒲黃5g，黃芪5g，馬鞭草5g，鹿銜草8g，茜草5g，狗脊5g，續(xù)斷5g，烏藥5g，甘草1g），臨床用量為52g/d，湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院提供，制備成濃度為4.43g（生藥）/g的浸膏，批號(hào)20140514。實(shí)驗(yàn)用藥大、中、小劑量組含原藥材量分別為 6.76g/kg、13.52g/kg、27.04g/kg，實(shí)驗(yàn)當(dāng)日用白開(kāi)水配制。阿司匹林腸溶片，非甾體抗炎藥，可用于鎮(zhèn)痛解熱、抗炎，選其為鎮(zhèn)痛、抗炎試驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照藥，臨床用量4g/d，湖南湘藥制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào):20130923。氨基己酸，具有止血作用，選其為凝血試驗(yàn)、斷尾止血試驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照藥，臨床用量6g/d，湖南制藥廠生產(chǎn)，批號(hào):000908-2。三七粉，具有止血、散瘀、定痛作用，選其為凝血試驗(yàn)、斷尾止血試驗(yàn)的中藥陽(yáng)性對(duì)照藥，湖南省醫(yī)藥公司生產(chǎn)，批號(hào):20130709。

1.3 主要試劑 己烯雌酚注射液，2mg/mL，上海第九制藥廠生產(chǎn)，批號(hào):00089777；醋酸，500mL，廣東汕頭市西隴化工廠生產(chǎn)，批號(hào):0701291；二甲苯，國(guó)藥集體化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，批號(hào):F20090218。

1.4 主要儀器 梅特勒托利多十萬(wàn)分之一電子天平AG205；湘儀天平儀器廠TP100型動(dòng)物天平；上海星鉆秒表有限公司機(jī)械秒表；安徽正華生物儀器ZH-YLS-6B智能熱板儀。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 凝血實(shí)驗(yàn) 采用毛細(xì)玻管法。取BALB/C清潔級(jí)小鼠72只，雌雄各半，依據(jù)體重編號(hào)，按性別、體重分層，再用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分成6組，即空白組（等體積生理鹽水）、氨基己酸組（0.78g/kg）、三七粉組（1.04g/kg）和益氣化瘀方低、中、高劑量組。每日灌胃給藥1次，灌胃體積為8mL/（kg·d），連續(xù)給藥3d。最后一次給藥后2h用直徑1mm的玻璃毛細(xì)管內(nèi)眥后靜脈叢取血，毛細(xì)玻管內(nèi)血栓至少大于5cm。每間隔30s折斷一段毛細(xì)玻管，觀察有無(wú)血凝絲出現(xiàn)。計(jì)算從毛細(xì)玻管采血到出現(xiàn)血凝絲的時(shí)間（s），即為凝血時(shí)間，比較各組間的凝血時(shí)間。

2.2 斷尾止血實(shí)驗(yàn) 采用小鼠斷尾法。取BALB/C清潔級(jí)小鼠72只，雌雄各半，依據(jù)體重編號(hào)，按性別、體重分層，再用隨機(jī)排列表法隨機(jī)分成6組，即空白組（等體積生理鹽水）、氨基己酸組（0.78g/kg）、三七粉組（1.04g/kg）和益氣化瘀方低、中、高劑量組。每日灌胃給藥1次，灌胃體積為8mL/（kg·d），連續(xù)給藥3d。最后一次給藥后30min，距小鼠尾尖0.5cm處橫斷尾部，自血液自動(dòng)流出后計(jì)時(shí)，間隔15s用濾紙吸去血滴，直至血流自然停止，計(jì)算出血時(shí)間，并進(jìn)行組間比較。

2.3 扭體鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn) BALB/C清潔級(jí)小鼠60只，雌雄各半，依據(jù)稱重編號(hào)，按性別、體重分層，再用隨機(jī)排列表法隨機(jī)分成5組，每組12只，即空白組（等體積生理鹽水）、阿司匹林組（0.195g/kg）和益氣化瘀方 低、中、高劑量組。每日灌胃給藥1次，灌胃體積為8mL/（kg·d），連續(xù)給藥3d。最后一次給藥后30min，腹腔注射0.3%醋酸0.2mL/只，觀察30min內(nèi)各組動(dòng)物醋酸引起的扭體次數(shù)和鎮(zhèn)痛百分率（%）。鎮(zhèn)痛百分率 （%）=（空白組扭體次數(shù)-用藥組扭體次數(shù)）/空白組扭體次數(shù)×100%。

2.4 熱板鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn) 清潔級(jí)BALB/C雌性小鼠60只，體重18～22g，依據(jù)體重編號(hào)，隨機(jī)分成5組，每組12只，即空白組（等體積生理鹽水）、阿司匹林組（0.195g/kg）和益氣化瘀方低、中、高劑量組。每日灌胃給藥1次，灌胃體積為8mL/（kg·d），連續(xù)給藥3d。第3次給藥后30、90、120min時(shí)測(cè)定痛閾值，超過(guò)60s仍無(wú)反應(yīng)者以痛閾值為60s計(jì)算，并計(jì)算痛閾提高百分率。痛閾提高百分率（%）=（用藥后痛閾值-用藥前痛閾值）/用藥前痛閾值×100%。痛閾值測(cè)定方法:智能熱板儀溫度控制在（55±0.5）℃，于室溫下每次放入1只小鼠，用秒表記錄小鼠自放入至出現(xiàn)舔后足的時(shí)間（s）作為該鼠的痛閾值，間隔30min復(fù)測(cè)1次，2次平均值為痛閾值（給藥前痛閾均值不超過(guò)30s者為合格）。

2.5 對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫抑腫實(shí)驗(yàn) 清潔級(jí)BALB/C小鼠50只，雌雄各半，依據(jù)體重分層，隨機(jī)分成空白組（等體積生理鹽水）、阿司匹林組（0.195g/kg）和益氣化瘀方低、中、高劑量組。各組小鼠每日灌胃給藥1次，灌胃體積為8mL/（kg·d），連續(xù)給藥3d。最后一次給藥后30min，將二甲苯棉球接觸小鼠右耳5s，15min后處死動(dòng)物。用6mm打孔器沿左右耳郭相同部位打孔取材，分別用AG205電子天平稱重，以兩耳片重量差值作為腫脹程度指標(biāo)，比較藥物組與對(duì)照組間的差異，并求出抑腫率。抑腫率（%）=（對(duì)照組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度）/對(duì)照組平均腫脹度×100%。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 分析數(shù)據(jù)使用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件包。計(jì)量資料用（±s）表示，符合正態(tài)性和方差齊性用單因素方差分析。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 各組小鼠凝血、出血時(shí)間比較 與空白組比較，益氣化瘀方低、中、高劑量組小鼠凝血時(shí)間明顯縮短（P＜0.01），其作用隨劑量的增加而增強(qiáng)。與氨基己酸比較，益氣化瘀方中、高劑量凝血作用與之相似（P＞0.05）。說(shuō)明益氣化瘀方的止血效果明顯。與空白組比較，益氣化瘀方各劑量組出血時(shí)間明顯縮短（P＜0.01），低劑量作用次于氨基己酸（P＜0.05），中、高劑量作用與氨基己酸、三七粉相似，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說(shuō)明益氣化瘀的止血效果明顯。見(jiàn)表1。

表1 各組小鼠凝血、出血時(shí)間比較（±s）

表1 各組小鼠凝血、出血時(shí)間比較（±s）

注：與空白組比較，△△P＜0.01；與氨基己酸組比較，▲P＜0.05。

組別 動(dòng)物數(shù)（只）劑量（g/kg） 凝血時(shí)間（s） 出血時(shí)間（s）空白組12222.50±39.34 236.83±36.20氨基己酸組 12 0.78 172.50±36.46△△169.25±33.406△△三七粉組 12 1.04 155.00±45.83△△172.43±42.43△△益氣化瘀方低劑量組 12 1.54 175.00±44.00△△▲202.33±34.34△△▲益氣化瘀方中劑量組 12 4.62 147.50±45.15△△187.25±36.53△△益氣化瘀方高劑量組 12 13.86 132.50±32.51△△174.92±45.75△△

3.2 各組小鼠痛閾改變情況比較 與空白組比較，益氣化瘀方低、中、高劑量組小鼠扭體次數(shù)明顯減少（P＜0.01），其作用隨劑量的增加而加強(qiáng)。益氣化瘀方鎮(zhèn)痛作用明顯低于阿司匹林（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 各組小鼠痛閾改變情況比較（±s）

表2 各組小鼠痛閾改變情況比較（±s）

注：與空白組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與阿司匹林組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。

組別 動(dòng)物數(shù)（只）劑量（g/kg）給藥前痛閾（s）痛閾及提高百分率45min 90min 120min空白組 1021.1±3.00痛閾（s） 痛閾提高百分率（%） 痛閾（s）21.8±4.02 22.2±5.49痛閾提高百分率（%） 痛閾（s） 痛閾提高百分率（%）24.0±4.74阿司匹林組 10益氣化瘀方低劑量組 10 6.76 21.2±2.56 28.0±8.01△▲32.08 28.5±6.02△▲34.43 30.0±5.87△▲▲41.51益氣化瘀方中劑量組 10 13.52 21.15±2.54 27.7±6.80△▲30.97 29.0±7.90△▲37.16 30.8±7.97△▲45.63益氣化瘀方高劑量組 10 27.04 20.85±2.76 29.2±4.64△△▲40.05 34.5±7.29△△▲65.47 33.3±6.20△△▲59.71 0.195 20.3±2.9435.6±7.86△△75.37 37.1±8.41△△82.76 40.6±8.90△△100.00

3.3 各組小鼠扭體次數(shù)與鎮(zhèn)痛百分率比較 腹腔注射醋酸后可引起小鼠腹腔疼痛，出現(xiàn)扭體反應(yīng)。給藥后各組均能顯著抑制小鼠出現(xiàn)的疼痛反應(yīng)，和空白組比較差異顯著（P＜0.05，P＜0.01）。益氣化瘀方各劑量鎮(zhèn)痛作用與阿司匹林比較仍有顯著性差異（P＜0.05，P＜0.01）。說(shuō)明益氣化瘀方有良好的鎮(zhèn)痛作用，但其作用有限，次于阿司匹林。見(jiàn)表3。

表3 各組小鼠扭體次數(shù)與鎮(zhèn)痛百分率比較（±s）

表3 各組小鼠扭體次數(shù)與鎮(zhèn)痛百分率比較（±s）

注：與空白組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與阿司匹林組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。

劑量（g/kg）組別 動(dòng)物數(shù)（只）扭體法扭體次數(shù) 鎮(zhèn)痛率（%）空白組 12 35.08±5.316阿司匹林組 12 0.195 20.75±5.429△△40.85益氣化瘀方低劑量組 12 6.76 30.33±4.539△▲▲13.54▲▲益氣化瘀方中劑量組 12 13.52 26.67±6.919△△▲▲23.97▲益氣化瘀方高劑量組 12 27.04 25.25±7.899△△▲24.68▲

3.4 各組小鼠耳腫脹度比較 空白組小鼠右耳較左耳明顯紅腫，厚度增加。各給藥組小鼠右耳變化不明顯，動(dòng)物兩側(cè)耳片差異明顯低于空白組兩側(cè)耳片差異（P＜0.05）。表明益氣化瘀方各劑量與阿司匹林均有較好的抑制炎癥作用，益氣化瘀方高劑量與阿司匹林抑腫作用比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。見(jiàn)表4。

表4 各組小鼠耳腫脹程度比較（±s）

表4 各組小鼠耳腫脹程度比較（±s）

注：與空白組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與阿司匹林組比較，▲P＜0.05。

組別 動(dòng)物數(shù)劑量（g/kg）右耳重（mg）左耳重（mg）腫脹度（mg）空白組10抑腫率（%）13.86±2.4825.58±4.83 11.72±4.09—0.195 13.22±2.08 18.72±2.72 5.50±1.92△△益氣化瘀方低劑量組 10 4.29 13.39±4.13 22.35±4.48 8.86±2.01△24.38▲益氣化瘀方中劑量組 10 12.87 13.07±1.89 21.65±2.47 8.58±2.74△△26.77▲益氣化瘀方高劑量組 10 38.61 13.40±2.42 19.50±2.13 6.10±1.77△△47.90阿司匹林組 10 53.09

4 討論

產(chǎn)時(shí)用力耗氣，元?dú)鈸p傷，瘀血內(nèi)阻，產(chǎn)后病機(jī)多虛多瘀，氣虛血瘀為產(chǎn)后病發(fā)生的首要病機(jī)。產(chǎn)后瘀血不去，新血難生，瘀阻胞中，導(dǎo)致惡露淋漓不盡，“不通則痛”；或氣虛不能統(tǒng)攝血液，失血過(guò)多，胞宮胞脈失養(yǎng)，“不榮則痛”。產(chǎn)后子宮復(fù)舊不全臨床以虛、血、痛為主要表現(xiàn)，益氣化瘀為首要治療大法。益氣化瘀方由黨參、黃芪、蒲黃炭等10味藥物組成，能益氣止血、化瘀止痛，臨床主要用于人流、藥流后或產(chǎn)后氣虛血瘀所致的子宮復(fù)舊不全，表現(xiàn)為陰道出血淋漓不斷、腹痛等?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，產(chǎn)后子宮內(nèi)膜炎癥是導(dǎo)致產(chǎn)后子宮復(fù)舊不全的主要原因。治療時(shí)首先是止血、加強(qiáng)宮縮、抗炎鎮(zhèn)痛，其次為增強(qiáng)機(jī)體自身的機(jī)能狀態(tài)。益氣化瘀方臨床療效確切，我們推測(cè)益氣化瘀方具有促進(jìn)子宮內(nèi)膜修復(fù)，止血、抗炎、鎮(zhèn)痛作用，故通過(guò)本研究予以證實(shí)。

益氣化瘀方以黨參、蒲黃為君藥，黨參補(bǔ)中益氣，生津和胃，補(bǔ)氣“無(wú)剛燥之弊”；蒲黃涼血止血，活血消瘀，性平則無(wú)寒熱，止血而不留瘀。二藥合用，補(bǔ)而不滯，行而能止，共奏益氣化瘀之功。黃芪、馬鞭草、茜草為臣。黃芪大補(bǔ)元?dú)?，扶正固本；馬鞭草活血散瘀，清熱解毒，利水消腫；茜草既能涼血止血，又能活血行血，祛瘀生新。狗脊、鹿銜草、續(xù)斷、臺(tái)烏藥為佐。狗脊補(bǔ)肝腎，強(qiáng)腰膝，溫補(bǔ)固攝；鹿銜草補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨，能收斂止血；續(xù)斷補(bǔ)肝腎，強(qiáng)筋骨，續(xù)折傷，止崩漏。三藥合用，既可補(bǔ)肝腎強(qiáng)筋骨，又可續(xù)傷止血。加入臺(tái)烏藥通理上下諸氣，治療少腹疼痛。

二甲苯是一種化學(xué)致炎劑，通過(guò)炎癥介質(zhì)的釋放，增加毛細(xì)血管的通透性和炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，造成耳部急性滲出性炎性水腫[4]。益氣化瘀方能減輕二甲苯引起的小鼠耳腫脹，具有較好的抗炎作用。結(jié)合藥理學(xué)研究提示:方中蒲黃炭、黃芪、馬鞭草、茜草、鹿銜草、烏藥具有抗炎作用。其中蒲黃炭改善微循環(huán)，通過(guò)促進(jìn)重吸收和降低毛細(xì)血管的通透性達(dá)到抗炎目的，同時(shí)能促進(jìn)血液凝固[5]。黃芪能提升機(jī)體免疫功能，增加白細(xì)胞，增強(qiáng)中性粒及巨噬細(xì)胞的吞噬和殺菌能力[6]。馬鞭草具有消炎止痛作用[7]。茜草具有抗菌作用[8]。鹿銜草能抗菌，促進(jìn)免疫功能。烏藥抗菌、鎮(zhèn)痛消炎[9]。

血液凝固在人體止血機(jī)制中起重要作用，活血化瘀中藥具有擴(kuò)血管，降低血液黏度，激活凝血系統(tǒng)，改善微循環(huán)的作用[10]。益氣化瘀方中黨參、馬鞭草、續(xù)斷、茜草、狗脊均具有止血作用。其中黨參能提高機(jī)體免疫功能，改善血管壁功能抑制血小板聚集和黏附，改善血液流變學(xué)，增加血液流速，防止血栓形成[11]。馬鞭草、茜草促進(jìn)泌乳，提高子宮平滑肌興奮性，促進(jìn)子宮縮復(fù)止血[7-8]。續(xù)斷能止血、鎮(zhèn)痛。狗脊對(duì)組織損傷出血有肯定的快速止血作用[12]。

篩選鎮(zhèn)痛藥的常用致痛方法概括有物理法（熱刺激小鼠足部產(chǎn)生痛反應(yīng)）和化學(xué)法（化學(xué)物質(zhì)腹腔注射，刺激腹膜引起持久的疼痛反應(yīng)）。益氣化瘀方能抑制由醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)，提高小鼠的耐熱能力，具有較好的鎮(zhèn)痛作用。我們推測(cè)，藥物可能通過(guò)抗炎，抑制炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)達(dá)到鎮(zhèn)痛作用。

本研究結(jié)果表明，益氣化瘀方確實(shí)具有一定的抗炎、止血、鎮(zhèn)痛作用，然而作為中藥復(fù)方成分，進(jìn)一步明確其有效成分，將其推廣應(yīng)用是我們今后研究的重點(diǎn)。

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R289.53

A

1672-397X（2015）03-0074-04分娩后，宮頸外口如袖口狀未完全閉合，胎盤剝離面開(kāi)放，子宮內(nèi)膜創(chuàng)面尚未修復(fù)，此時(shí)病原體容易逆行感染導(dǎo)致子宮內(nèi)膜炎，影響子宮復(fù)舊，表現(xiàn)為產(chǎn)后反復(fù)發(fā)作盆腹腔疼痛、子宮出血淋漓不斷[1]。

曾晶（1982-），女，博士，主治醫(yī)師，研究方向：中西醫(yī)結(jié)合治療婦產(chǎn)科月經(jīng)病、產(chǎn)后病。841825639@qq.com

2014-12-27

編輯：吳 寧

國(guó)家自然科學(xué)青年基金項(xiàng)目（81202848）；湖南省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（14JJ3121）