鼻咽癌是我國常見的惡性腫瘤之一，在頭頸部惡性腫瘤中占首位。鼻咽部固有膜內(nèi)淋巴管網(wǎng)豐富，易早期發(fā)生淋巴道轉(zhuǎn)移，預(yù)后較差。研究鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制，探尋鼻咽癌轉(zhuǎn)移指標(biāo)是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)?；|(zhì)金屬蛋白酶刺激因子（CD147）是一種相對(duì)分子質(zhì)量為50×103～60×103的高度糖基化單鏈跨膜糖蛋白，屬于免疫球蛋白超家族成員。有研究發(fā)現(xiàn)，CD147 高表達(dá)于多種腫瘤中，促進(jìn)腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移[1]。成纖維細(xì)胞生長因子-2（fibroblast growth factor-2，F(xiàn)GF-2）是成纖維細(xì)胞生長因子家族中的重要一員，可促進(jìn)腫瘤血管生成和細(xì)胞增殖。CD147 與FGF-2 在鼻咽癌中的表達(dá)及其相關(guān)性，迄今國內(nèi)尚少見報(bào)道。本研究采用免疫組織化學(xué)（免疫組化）方法檢測CD147 和FGF-2 在鼻咽癌中的表達(dá)，并初步探討二者間的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究所用標(biāo)本全部取自本院2009 年5 月至2012 年8 月就診患者，均經(jīng)鼻咽部活檢病理確診，共81 例。其中男47 例，女34 例；年齡16～76 歲，平均（47.11±10.20）歲，≥60 歲27 例，＜60 歲54 例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移49 例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例；組織學(xué)類型：低分化鱗癌45 例，未分化癌36 例；按鼻咽癌2008年臨床分期[2]：Ⅰ期11 例，Ⅱ期22 例，Ⅲ期35 例，Ⅳ期13 例。同時(shí)選取同期43 例經(jīng)病理證實(shí)為鼻咽慢性炎癥組織作為對(duì)照。本研究得到深圳市第五人民醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，且征得所有研究對(duì)象知情簽字同意。

1.2 試劑與方法 所有標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片。采用免疫組化鏈霉素抗生素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法（SP 法），即用型兔抗人CD147 多克隆抗體、兔抗人FGF-2 多克隆抗體、SP 試劑盒、3，3-二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色劑均購自北京中杉生物公司。嚴(yán)格按試劑盒說明書方法染色，儀器采用ROCHE全自動(dòng)免疫組化染色系統(tǒng)，型號(hào)Bench Mark GX。用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗作為陰性對(duì)照，采用已知強(qiáng)陽性表達(dá)的乳腺癌組織作為陽性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) 所有免疫組化染色結(jié)果均由2 位病理醫(yī)師盲法閱片判斷。每張切片至少在高倍鏡（×400）下觀察10 個(gè)不同視野來判斷結(jié)果。CD147 以細(xì)胞膜及胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性結(jié)果，F(xiàn)GF-2 以胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性結(jié)果。參照Salvesen 等[3]的標(biāo)準(zhǔn)采用半定量方法將染色強(qiáng)度分為4 級(jí)：不著色為0 分，黃色為1 分，棕黃色為2 分，黃褐色為3 分。將陽性細(xì)胞的比例也分為4 級(jí)：陽性細(xì)胞數(shù)小于或等于10%為0 分，＞10%～40%為1 分，＞40%～70%為2 分，＞70%為3 分。2 種評(píng)分相加，0～1分為陰性（-），2 分為弱陽性（+），3～4 分為中等陽性（++），5～6 分為強(qiáng)陽性（+++）。統(tǒng)計(jì)時(shí)（-）為陰性，其余為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)； 兩個(gè)變量相關(guān)性采用Spearman′s 等級(jí)相關(guān)分析。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 CD147、FGF-2 在鼻咽癌與鼻咽炎組織中的表達(dá) CD147 的陽性表達(dá)位于細(xì)胞膜及胞漿，呈棕黃色顆粒（圖1）。81 例鼻咽癌組中CD147 蛋白陽性表達(dá)62 例，陽性表達(dá)率為76.54%；43 例鼻咽炎組中CD147 蛋白陽性表達(dá)9 例，陽性表達(dá)率為20.93%，兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。FGF-2 的陽性表達(dá)均位于胞漿，呈棕黃色顆粒（圖2）。81 例鼻咽癌組中FGF-2 蛋白陽性表達(dá)56 例，陽性表達(dá)率為69.14%，鼻咽炎組中陽性表達(dá)6 例，陽性表達(dá)率為13.95%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

圖1 CD147 在鼻咽癌細(xì)胞膜和胞漿中的陽性表達(dá)（SP 二步法，×200）

圖2 FGF-2 在鼻咽癌細(xì)胞胞漿中的陽性表達(dá)（SP 二步法，×400）

表1 CD147 和FGF-2 在鼻咽癌與鼻咽炎組織中的表達(dá)（n）

2.2 鼻咽癌組中CD147、FGF-2 表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系通過CD147 和FGF-2 蛋白在鼻咽癌中的表達(dá)及與臨床病理特征的比較發(fā)現(xiàn)，CD147 與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），與患者年齡、性別及組織學(xué)類型等臨床特征無關(guān)（P＞0.05）；FGF-2 僅與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P＜0.05），而與患者年齡、性別、組織學(xué)類型及臨床分期等臨床特征無關(guān)（P＞0.05），見表2。

表2 CD147 和FGF-2 與鼻咽癌各臨床病理特征的關(guān)系

2.3 鼻咽癌組織中CD147 與FGF-2 蛋白表達(dá)的相關(guān)性 通過對(duì)鼻咽癌CD147、FGF-2 蛋白表達(dá)的半定量數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)分析顯示，CD147 與FGF-2 在鼻咽癌中的表達(dá)呈正相關(guān)[相關(guān)系數(shù)（r）=0.387，P＜0.05]，見表3。

表3 鼻咽癌組織中CD147 與FGF-2 表達(dá)的相關(guān)性

3 討 論

腫瘤的發(fā)生與發(fā)展是一個(gè)多因素參與、多步驟完成的過程，侵襲和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致腫瘤難以治愈的重要因素。CD147 分子又名細(xì)胞外基質(zhì)金屬蛋白酶誘導(dǎo)因子，是一類屬于免疫球蛋白超家族（immunoglobulin superfamily，IGSF）的跨膜糖蛋白[4]。CD147 在人體內(nèi)廣泛分布，通過細(xì)胞-細(xì)胞及細(xì)胞-間質(zhì)黏附作用不僅參與機(jī)體多種不同的生理功能，還與腫瘤的增殖、浸潤、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[5]。目前認(rèn)為，CD147 能刺激腫瘤周圍的成纖維細(xì)胞產(chǎn)生基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs），從而促進(jìn)腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移。同時(shí)，它也可以通過一種旁分泌方式作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的MMPs 表達(dá)。MMPs 是一組重要的細(xì)胞外基質(zhì)降解酶，通過對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)中不同成分的降解，促進(jìn)腫瘤新生血管的形成，在腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移中起重要作用。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，鼻咽癌組織中CD147 陽性表達(dá)率明顯高于鼻咽炎組織（P＜0.05）。通過分析其與臨床病理特征的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，CD147 的陽性表達(dá)率在腫瘤Ⅲ～Ⅳ期與有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中均顯著高于Ⅰ～Ⅱ期與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P＜0.05），提示CD147 過表達(dá)與鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展過程密切相關(guān)。這一結(jié)果說明，CD147 在鼻咽癌浸潤轉(zhuǎn)移過程中可能通過刺激其周圍的成纖維細(xì)胞產(chǎn)生MMPs 來降解細(xì)胞外基質(zhì)，調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞MMPs 的產(chǎn)生而促進(jìn)腫瘤新生血管生成，從而促使腫瘤細(xì)胞侵襲周圍正常組織并向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。該結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道頭頸部腫瘤研究結(jié)果基本一致[6-8]。

FGF-2 是體內(nèi)非常重要的促血管生長因子之一[9]。FGF-2 廣泛分布于人體的多種組織，具有多種生物學(xué)功能[10-11]。有研究表明，F(xiàn)GF-2 可通過促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、血管生成，抑制腫瘤凋亡，利于腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用[12-15]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，鼻咽癌組織中FGF-2 的陽性表達(dá)率明顯高于鼻咽炎組織（P＜0.05）；通過分析其與臨床病理學(xué)的關(guān)系發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)GF-2的陽性表達(dá)與患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期有關(guān)（P＜0.05），與患者年齡、性別、組織學(xué)類型無關(guān)（P＞0.05），提示FGF-2 在鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展過程中可能發(fā)揮重要作用。FGF-2 可能通過纖維母細(xì)胞生長因子受體信號(hào)傳導(dǎo)通路，一方面增加各種蛋白水解酶和膠原酶的分泌，降解基底膜和包繞腫瘤的基質(zhì)，突破基質(zhì)屏障，促進(jìn)腫瘤生長擴(kuò)散；另一方面促進(jìn)淋巴管增生、增加淋巴管通透性或改變淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞黏附性及表面趨化因子的表達(dá)等途徑，促進(jìn)鼻咽癌細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

綜上所述，本研究初步探討了CD147 和FGF-2 蛋白這2 種基礎(chǔ)作用機(jī)制不同的指標(biāo)在鼻咽癌中的關(guān)系。在對(duì)CD147 與FGF-2表達(dá)的相關(guān)性分析中發(fā)現(xiàn)，二者呈正相關(guān)（r=0.387，P＜0.05）。這一結(jié)果說明二者之間可能存在某種共同通路，從而產(chǎn)生協(xié)同或相加作用，共同參與鼻咽癌的發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)移。CD147 與FGF-2 的高表達(dá)可能通過多種胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)分子活化相關(guān)傳導(dǎo)途徑，產(chǎn)生多種生物學(xué)效應(yīng)，以增加腫瘤的遷移能力，促進(jìn)脈管生長，提高鼻咽癌組織的惡性侵襲性，是鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的重要影響因素之一。因此，通過免疫組化方法聯(lián)合檢測CD147 和FGF-2 的表達(dá)，對(duì)鼻咽癌的診斷、臨床分期以及臨床預(yù)后判斷具有積極意義。

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