辛雅萍 付艷芹 張東銘 王崇賢 張?zhí)K河 (鄭州大學第二附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科，河南 鄭州 450014)

腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白1(CTRP1)為新近發(fā)現(xiàn)的一種新型的脂肪細胞因子，為CTRP超家族成員之一，與脂聯(lián)素(ADPN)具有相似的空間結(jié)構(gòu)〔1〕。國外研究顯示，將體外重組補體C1q CTRP1注入小鼠體內(nèi)能顯著降低其血糖水平〔2〕。另有試驗表明CTRP1可升高血壓，調(diào)節(jié)血脂，改善肥胖，抗動脈粥樣硬化的作用〔3〕。但是目前尚無有關(guān)2型糖尿病(T2DM)患者CTRP1的臨床研究。ADPN是另一種脂肪細胞因子，其臨床降低血糖，降低血脂，改善胰島素抵抗，拮抗動脈粥樣硬化形成的作用已被廣泛證實〔4〕。本文旨在探討CTRP1在健康老年人及T2DM及其并發(fā)癥患者中的表達水平，重新分組后研究CTRP1的相關(guān)因素及其與ADPN的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011年9月至2012年6月鄭州大學第二附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科及心內(nèi)科住院老年患者。非糖尿病組42例，其中男22例，女20例，平均年齡(68.54±7.26)歲，為健康體檢者，排除DM、高血壓、冠心病(CHD)健康老年人。T2DM組30例，其中男16例，女14例，平均年齡(65.70±7.13)歲;無DM急慢性并發(fā)癥，未應(yīng)用胰島素及胰島素增敏劑噻唑烷二酮類治療。并發(fā)癥組32例，其中男16例，女16例，平均年齡(69.91±7.93)歲。根據(jù)典型的臨床表現(xiàn)和典型的心電圖或冠脈造影顯示管腔直徑減少70%～75%確立診斷，亦排除應(yīng)用胰島素及胰島素增敏劑噻唑烷二酮類治療者。CHD組31例，其中男15例，女16例，平均年齡(68.81±7.21)歲，亦根據(jù)典型的臨床表現(xiàn)和典型的心電圖或冠脈造影顯示管腔直徑減少70% ～75%確立診斷。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 所有研究對象均于清晨空腹抽取肘靜脈血4 ml。用于血清CTRP1、ADPN水平及一般生化指標測定。

1.2.2 血清CTRP1水平的測定 采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法。試劑盒購自Biovendor代理公司:上海普邁生物科技有限公司。嚴格按說明書操作。(1)標準品的稀釋，加樣。(2)樣品稀釋，加樣。(樣品最終稀釋度為20倍)。(3)溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 min。(4)洗滌:小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 s后棄去，如此重復5次，拍干。(5)加酶:每孔加入酶標試劑50 μl，空白孔除外。(6)溫育:操作同(3)。(7)洗滌:操作同(5)。(8)顯色:每孔先加入顯色劑A50 μl，再加入顯色劑B50 μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 min。(9)終止:每孔加終止液50 μl，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。(10)測定:以空白孔調(diào)零，450 nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15 min以內(nèi)進行。

1.2.3 ADPN測定方法同上。試劑盒購自北京岳泰生物技術(shù)公司，嚴格按說明書操作。

1.2.4 體重指數(shù)(BMI)及血脂測定 血脂由全日立7060自動生化分析儀測定，甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)采用CHOD-PAD法，試劑購自上海易博生物技術(shù)有限公司;高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)采用清除法，試劑盒購自上海金標生物技術(shù)公司。

1.3 統(tǒng)計學方法 應(yīng)用SPSS19.0軟件進行正態(tài)性檢驗和方差齊性檢驗，多組間樣本均數(shù)的比較采用單向方差分析及最小顯著(LSD)t檢驗;兩組間樣本均數(shù)的比較采用t檢驗;相關(guān)性用Pearson直線相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 各組一般資料比較 見表1。

2.2 非DM組與DM組血清CTRP1水平 DM組血清CTRP1水平〔(602.33 ±145.41)ng/ml〕明顯高于非 DM 組〔(448.97 ±213.05)ng/ml〕(P ＜0.05)。

2.3 非DM組與DM組血清CTRP1相關(guān)分析 非DM組CTRP1與各指標無明顯相關(guān)性。DM組 CTRP1與 BMI、TG、FPG、HOMA-IR、TNF-α呈正相關(guān);與ADPN呈負相關(guān)。見表2。

表1 各組一般資料比較(s)

表1 各組一般資料比較(s)

與對照組比較:1)P＜0.05;與T2DM組比較:2)P＜0.05;與并發(fā)癥組比較:3)P＜0.05

組別 n(男/女)AGE BMI(kg/m2)SBP(mmHg)DBP(mmHg)TC(mmol/L)病尿病組 42(20/22)68.54 ±7.26 23.84 ±1.70 114.38 ±10.59 70.81 ±7.44 4.66 ±0.63 T2DM 組 30(16/14)65.70 ±7.13 25.85 ±1.981) 124.70 ±14.811) 78.93 ±11.901) 5.59 ±0.931)并發(fā)癥組 32(16/16)69.91 ±7.93 26.15 ±2.641) 138.22 ±22.221)2) 80.47 ±13.951) 6.56 ±1.161)2)CHD 組 31(15/16)68.81 ±7.21 24.29 ±1.882)3) 136.94 ±28.731)2)3) 82.97 ±17.551) 4.82 ±1.082)3)組別 TG(mmol/L)HDL(mmol/L)LDL(mmol/L)FPG(mmol)HbA1c(%)糖尿病組 1.50 ±0.91 1.32 ±0.27 2.39 ±0.47 4.45 ±1.05 5.11 ±1.84 T2DM 組 1.91 ±1.44 1.16 ±0.281) 2.90 ±0.571) 8.95 ±0.841) 7.68 ±0.971)并發(fā)癥組 2.87 ±0.841)2) 1.02 ±0.341) 3.39 ±0.741)2) 11.07 ±1.891)2) 9.04 ±1.471)2)CHD 組 2.32 ±2.171) 1.12 ±0.331) 2.72 ±0.741)3) 5.32 ±0.651)2)3) 4.72 ±0.842)3)

表2 非DM組、DM組CTRP1與各指標相關(guān)性

3 討論

本文實驗結(jié)果表明，CTRP1與DM相關(guān)。國外唯一的臨床研究是關(guān)于CTRP1與代謝綜合征患者的研究，其結(jié)果顯示，CTRP1與代謝綜合征有明顯的相關(guān)關(guān)系〔5〕。本實驗結(jié)果支持這一結(jié)論。其機制可能為CTRP1刺激腎上腺分泌醛固酮，激活腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)有關(guān)〔5〕。

國外動物研究示，ADPN基因敲除的正常喂養(yǎng)小鼠未出現(xiàn)血糖升高及胰島素抵抗現(xiàn)象，而其體內(nèi)CTRP1水平顯著提高〔6，7〕，提示CTRP1可能存在與ADPN相似的降低血糖改善胰島素抵抗的生物學作用;另有試驗進一步證實將CTRP1注入小鼠體內(nèi)能顯著降低血糖水平。本研究觀察了CTRP1與血糖的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)DM組兩者存在正相關(guān)關(guān)系，推測患者CTRP1水平升高可能是血糖升高的反饋結(jié)果。而CTRP1水平與ADPN水平存在負相關(guān)關(guān)系，提示兩者為存在動態(tài)平衡，當血糖升高時ADPN水平下降，CTRP1水平升高進而起到拮抗血糖進一步升高，維持血糖的作用。有關(guān)于DM大鼠的研究顯示，DM肥胖大鼠較消瘦的DM大鼠有更高的CTRP1表達，提示CTRP1與肥胖有關(guān)。鑒于CTRP1可激活腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)，有升高血壓的作用，但本研究示CTRP1與血壓無明顯關(guān)系，這可能與患者應(yīng)用降壓藥物有關(guān)。

1 Sch?ffler A，Buechler C.CTRP family:linking immunity to metabolism〔J〕.Trends Endocrinol Metab，2012;23(4):194-204.

2 Wong GW，Krawczyk SA，Kitidis-Mitrokostas C，et al.Molecular，biochemical and functional characterizations of C1q/TNF family members:adipose-tissue-selective expression patterns，regulation by PPAR-γ agonist，cysteine-mediated oligomerizations，combinatorial associations and metabolic functions〔J〕.Biochem J，2008;416(2):161-77.

3 Peterson JM，Aja S，Wei Z，et al.CTRP1 protein enhances fatty acid oxidation via AMP-activated protein kinase(AMPK)activation and acetyl-CoA carboxylase(ACC)inhibition〔J〕.J Biol Chem，2012;287(2):1576-87.

4 Xu A，Vanhoutte PM.Adiponectin and adipocyte fatty acid binding protein in the pathogenesis of cardiovascular disease〔J〕.Am J Physiol Heart Circ Physiol，2012;302(6):H1231-40.

5 Chalupova A，Zakovska A，Adamcova K.Development of a novel enzymelinked immunosorbent assay(ELISA)for measurement of serum CTRP1:A pilot study:Measurement of serum CTRP1 in healthy donors and patients with metabolic syndrome〔J〕.Clin Biochem，2013;46(1-2):73-8.

6 Davis KE.Adiponectin:no longer the lone soul in the fight against insulin resistance〔J〕?Biochem J，2008;416(2):e7-9.

7 Nawrocki AR，Rajala M，Tomas T，et al.Mice lacking adiponectin show decreased hepatic insulin sensitivity and reduced responsiveness to peroxisome proliferator-activated receptor γ agonists〔J〕.J Biol Chem，2006;281(5):2654-60.