徐 躍 崔艷雙 范艷艷 (深圳市南山區(qū)婦幼保健院，廣東 深圳 518000)

子宮內(nèi)膜癌(EC)可能與月經(jīng)失調(diào)、絕經(jīng)、外源性雌激素補(bǔ)充或糖尿病有關(guān)〔1，2〕。子宮內(nèi)膜癌與其他惡性腫瘤一樣，生物學(xué)特征在于細(xì)胞周期調(diào)節(jié)紊亂，影響細(xì)胞周期調(diào)節(jié)的因素都可影響腫瘤發(fā)生發(fā)展。從影響細(xì)胞周期的蛋白著手尋找與子宮內(nèi)膜癌發(fā)生和發(fā)展敏感及特異的標(biāo)志物，有助于在基因診斷或治療方面提供依據(jù)。S期激酶相關(guān)蛋白2(Skp2)/p27在眾多惡性腫瘤中作為調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的通路已得到驗(yàn)證〔3〕，但在子宮內(nèi)膜癌中的作用較少報(bào)道。

1 對(duì)象與方法

1.1 對(duì)象 收集2010年1月至2014年4月在我院和吉林大學(xué)第一醫(yī)院婦科接受手術(shù)并經(jīng)術(shù)后病理檢查確診為子宮內(nèi)膜癌的老年女性患者的子宮內(nèi)膜癌標(biāo)本65例作為子宮內(nèi)膜癌組，年齡(65.3±5.2)歲。選擇同期進(jìn)行因良性病變切除的子宮標(biāo)本43例作為對(duì)照，年齡(67.1±7.5)歲?；颊呔橥?。

1.2 排除標(biāo)準(zhǔn) 合并子宮內(nèi)膜異位癥、腺肌病者;其他婦科惡性腫瘤者;妊娠或哺乳期;術(shù)前半年內(nèi)接受激素治療、放療或化療。

1.3 檢測(cè) 采用S-P法檢測(cè)子宮內(nèi)膜組織中Skp2和P27蛋白表達(dá)、放大200倍鏡下觀(guān)察5個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，計(jì)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，將檢測(cè)結(jié)果分為四個(gè)等級(jí):著色強(qiáng)度無(wú)、弱、中和強(qiáng)分別記分:0～3分，陽(yáng)性細(xì)胞比例計(jì)分:0分:＜20%、1分:20% ～50%、2分:50% ～75%，3分:＞75%。綜合染色強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量?jī)烧呦嗉臃譃?級(jí):0～2分:“～”、3～4分:“+”、＞5分:“++”。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS15.0軟件，計(jì)數(shù)資料組間比較采用χ2檢驗(yàn)或方差分析，采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組Skp2和p27蛋白表達(dá)比較 Skp2主要表達(dá)于細(xì)胞核中，細(xì)胞核染成棕黃色為陽(yáng)性細(xì)胞;p27主要表達(dá)于細(xì)胞核，細(xì)胞質(zhì)少量表達(dá)，呈棕黃色顆粒狀。對(duì)照組Skp2和p27蛋白陽(yáng)性例分別為8例〔+5例(11.6%)，?3例(7.0%)〕和38例〔+15例(34.92%)，?23例(53.5%)〕，子宮內(nèi)膜癌組 Skp2和p27蛋白陽(yáng)性例分別為54例〔?2例(18.54%)，?42例(64.64%)〕與18例〔+13例(20.0%)，?5例(7.7%)〕。與對(duì)照組比，子宮內(nèi)膜癌組Skp2蛋白的表達(dá)較高(P＜0.01)，p27蛋白表達(dá)較低(P＜0.01)，見(jiàn)圖1。

2.2 不同組織學(xué)分級(jí)和臨床分期子宮內(nèi)膜癌患者組織Skp2和p27蛋白表達(dá) 不同組織學(xué)分級(jí)、不同臨床分期患者組織中Skp2和p27蛋白表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)意義(P＜0.05)，見(jiàn)表1。

圖1 兩組Skp2和p27蛋白表達(dá)比較(×200)

表1 不同組織學(xué)分級(jí)和臨床分期子宮內(nèi)膜癌患者組織Skp2和p27蛋白表達(dá)〔n(%)〕

2.3 子宮內(nèi)膜癌組織中Skp2和p27蛋白表達(dá)的相關(guān)性Spearman等級(jí)相關(guān)分析顯示Skp2和p27的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=－0.38，P ＜0.05)。

3 討論

Skp2屬于人F-box蛋白家族，通過(guò)在細(xì)胞周期調(diào)控因子的泛素依賴(lài)性蛋白水解途徑的特異性識(shí)別底物參與細(xì)胞周期的調(diào)控。研究顯示子宮內(nèi)膜癌Skp2陽(yáng)性率是正常分泌期宮內(nèi)膜的50倍，即便是增殖期仍低于子宮內(nèi)膜癌的表達(dá)，子宮內(nèi)膜腺癌的Skp2隨著組織學(xué)級(jí)別G1、G2和G3的增高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、淋巴管浸潤(rùn)等表達(dá)陽(yáng)性率逐漸增高〔4〕。Skp2在細(xì)胞周期的調(diào)控中發(fā)揮重要作用〔5〕。真核細(xì)胞通過(guò)泛素蛋白酶降解途徑降解泛素化的蛋白質(zhì)調(diào)控細(xì)胞周期，泛素連接酶復(fù)合物作為泛素連接酶，參與細(xì)胞周期調(diào)控因子的泛素依賴(lài)性蛋白水解，Skp2在泛素連接酶復(fù)合物對(duì)蛋白底物起著特異識(shí)別作用，p27、p53及p21均通過(guò)Skp2依賴(lài)性泛素蛋白酶體途徑降解，Skp2的表達(dá)水平與組織的惡性程度密切相關(guān)。研究顯示有絲分裂原不存在但生長(zhǎng)抑制因子存在時(shí)，Skp2可縮短初期肝細(xì)胞G～S期過(guò)渡時(shí)間，體內(nèi)肝細(xì)胞中轉(zhuǎn)染Skp2可促進(jìn)大量肝細(xì)胞的復(fù)制和肝組織增生，提示Skp2參與G～S期過(guò)渡調(diào)控，具有致癌作用;Skp2參與細(xì)胞DNA的合成，具有調(diào)控細(xì)胞進(jìn)入S期的作用，敲除Skp2基因的小鼠的細(xì)胞核明顯增大，細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)多中心體，表現(xiàn)為增長(zhǎng)減慢甚至凋亡;Skp2參與轉(zhuǎn)錄調(diào)控，Skp2在參與c-myc的泛素化作用和蛋白酶體降解時(shí)，也作為c-myc的聯(lián)合轉(zhuǎn)錄因子顯示協(xié)同轉(zhuǎn)錄作用，另外，阻斷Skp2與轉(zhuǎn)錄因子E2F-1的相互作用可使轉(zhuǎn)錄因子E2F-1的泛素化降低。本課題結(jié)果顯示Skp2在正常子宮內(nèi)膜呈低表達(dá)，但在子宮內(nèi)膜癌組織呈現(xiàn)高表達(dá)，活性增強(qiáng)，與文獻(xiàn)結(jié)果一致〔6，7〕，Skp2 過(guò)表達(dá)促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖，利于腫瘤浸潤(rùn)性生長(zhǎng)。

p27蛋白是細(xì)胞周期蛋白激酶抑制因子，可抑制CDK2/cyclinE和CDK2/cyclinD復(fù)合物活性負(fù)性調(diào)節(jié)細(xì)胞周期，阻止細(xì)胞由G1期轉(zhuǎn)至S期而停止增殖，在細(xì)胞的分化發(fā)育中起著重要作用。p27表達(dá)異常與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，如p27表達(dá)的增加能明顯提高HT29結(jié)腸癌細(xì)胞系對(duì)誘導(dǎo)分化的敏感性，通過(guò)腺病毒載體構(gòu)建高表達(dá)的p27，可以導(dǎo)致裸鼠食道癌的存活素水平下降，誘導(dǎo)食道癌細(xì)胞的凋亡，查耳酮通過(guò)上調(diào)p27的表達(dá)水平誘導(dǎo)人乳腺癌細(xì)胞凋亡〔8，9〕。本課題顯示子宮內(nèi)膜癌組織的p27蛋白表達(dá)降低或缺失，與文獻(xiàn)結(jié)果一致〔10〕。p27參與控制細(xì)胞周期進(jìn)程，通過(guò)抑制 CyclinE-CDK2與 CyclinDCDK4激酶復(fù)合物活性，與細(xì)胞凋亡發(fā)生有著密切關(guān)系，其中CyclinE-CDK2是促使細(xì)胞通過(guò)G/S限制點(diǎn)的關(guān)鍵酶，抑制機(jī)制:(1)通過(guò)C端Thr磷酸化位點(diǎn)抑制CDK2-Thr160的磷酸化，抑制CyclinE-CDK2前活性狀態(tài)復(fù)合物激活;(2)抑制Cyclin-CDKs組蛋白H激酶活性;(3)抑制Cyclin-CDKs對(duì)融合蛋白R(shí)b的磷酸化，使細(xì)胞周期停止于G～S期;(4)可部分參與細(xì)胞停止分裂和啟動(dòng)細(xì)胞分化〔11，12〕。

Skp2與p27存在相互制約，互為增減的關(guān)系。在鼠細(xì)胞核中cyclinD1與Cdk4表達(dá)引起的新生心肌細(xì)胞的增殖，Skp2可在細(xì)胞周期中降解p27，當(dāng)剔除鼠心肌細(xì)胞的p27，心肌的增殖加速〔13〕。Skp2與p27在許多惡性腫瘤如上皮性腺癌、非小細(xì)胞肺癌等存在負(fù)相關(guān)關(guān)系。上皮性腺癌Skp2 mRNA表達(dá)水平都增高，同時(shí)發(fā)現(xiàn)伴隨Skp2的表達(dá)增加，p27水平下降，Skp2過(guò)度表達(dá)與預(yù)后較差顯著相關(guān)。本課題中老年女性子宮內(nèi)膜癌的Skp2與p27表達(dá)呈顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系，與文獻(xiàn)結(jié)果一致〔14〕。Skp2有致癌基因的作用，p27蛋白有抑癌基因作用，p27蛋白是Skp2泛素化降解的主要底物，Skp2作用于p27的羧基端，誘導(dǎo)p27與Skpl-Cull-Rbxl-Skp2泛素連接酶復(fù)合體結(jié)合，被26S蛋白酶體降解，引起cyclinE/CDK活化及Rb蛋白磷酸化，釋放轉(zhuǎn)錄因子E2F，促進(jìn)細(xì)胞通過(guò)G1-S期轉(zhuǎn)換，加快細(xì)胞周期行，使細(xì)胞增殖失控，因此Skp2蛋白的高表達(dá)是p27蛋白水平減少的原因之一〔15，16〕。Skp2-p27可能形成了致癌通路，臨床已在一些惡性腫瘤的治療采用抑制或敲除Skp2基因可以上調(diào)p27蛋白表達(dá)，達(dá)到抑制惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展，提示也是基因治療的新靶點(diǎn)，那么子宮內(nèi)膜癌未來(lái)的治療方向也將朝向基因靶點(diǎn)。

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