徐 彬，馬俊杰，2，王小龍，李智強，周 雷，徐增柏

(1沭陽縣中醫(yī)院，江蘇沐陽223600;2南京中醫(yī)藥大學基礎醫(yī)學院)

化療是目前晚期或復發(fā)乳腺癌患者主要的治療手段，但仍有40%的患者死于腫瘤復發(fā)和轉移［1］。近年來隨著免疫學的發(fā)展及深入研究，生物治療取得了較大進展，以樹突狀細胞(DC)為基礎構建的乳腺癌治療疫苗成為研究熱點［2］。但如何將DC疫苗特異性免疫治療與放、化療聯(lián)合，發(fā)揮綜合治療優(yōu)勢，尚需進一步探索。近2年來，我們采用DC自體回輸聯(lián)合TA方案化療治療晚期乳腺癌患者22例，取得較好效果?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 44例晚期乳腺癌患者，年齡33～75歲，平均45歲;病程3～21個月。均經(jīng)病理及影像學檢查確診。排除合并有心腦血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等嚴重原發(fā)性疾病;并發(fā)其他惡性腫瘤;有精神或心理疾病不能配合治療及療效評估者;妊娠、哺乳期婦女及過敏體質(zhì)患者。按照《中國常見惡性腫瘤診療規(guī)范》［3］中的診斷標準，臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期，存活期預計＞3個月，體力狀況(KPS)評分＞60分。血常規(guī)、肝腎功能、心電圖等檢查正常。曾先后行3～6個周期化療，化療方案為CAF或CEF;已停止化療1～3個月。將患者隨機分為觀察組和對照組各22例。

1.2 治療方法 對照組給予TA方案化療，第1～3天口服地塞米松片4.5 mg，2次/d。第2天靜滴多西紫杉醇(應用前先予西咪替丁、非那根，預防其可能引起的胃腸道及過敏反應)75 mg/m2。第3天靜脈推注表柔比星50 mg/m2。同步予護胃、鎮(zhèn)吐、補液等常規(guī)對癥治療。21 d為1個療程。觀察組在上述治療基礎上給予DC，療程與化療同步。具體操作方法:采集患者外周血50 mL，分離外周血單核細胞(PBMC)加粒細胞—巨噬細胞集落刺激因子(GMGSF)、IL-4及培養(yǎng)液培養(yǎng)，采用同源異體的腫瘤細胞株裂解物作為腫瘤相關抗原(TAA)進行抗原沖擊，培養(yǎng)7 d后成為致敏的成熟DC，取少量培養(yǎng)成熟的DC進行細菌和真菌培養(yǎng)，結果為陰性時收集細胞。觀察組在采血后第2天進行TA方案化療，用法、用量同對照組。化療第8、15、21、28天進行DC回輸，每次回輸DC數(shù)量為(1.0～3.0)×107個，選擇腋下或腹股溝皮下注射。

1.3 血清IL-2和TNF-α檢測方法 采集治療第1天及治療后第29天清晨空腹靜脈血3 mL，待血塊收縮后，以4 000 r/min離心10 min，置-75℃冰箱保存。采用雙抗夾心ELISA法測定血清中IL-2和TNF-α。試劑盒購于北京四正柏生物科技有限公司。按說明書操作，并進行質(zhì)量控制。酶標儀(瑞士帝肯公司Rainbow型)由專人操作，自動打印結果。

1.4 療效評價方法 ①近期療效。按WHO實體瘤標準判定，腫瘤完全消失并維持4周以上，無新病灶出現(xiàn)為完全緩解(CR);腫瘤體積減小50%以上，并維持4周以上，無新病灶出現(xiàn)為部分緩解(PR);腫瘤體積增大25%以下或縮小25%以下，并維持4周以上，無新病灶出現(xiàn)為穩(wěn)定(SD);腫瘤體積增大25%以上或有新病灶出現(xiàn)為進展(PD)。②生活質(zhì)量。采用KPS評分方法對生活質(zhì)量進行評價。③不良反應。按WHO抗癌藥物急性亞急性毒性反應分度標準分為0～Ⅳ度。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。計量資料以±s表示，兩組比較采用t檢驗;計數(shù)資料比較采用χ2檢驗。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

觀察組CR 6例，PR 10例，SD 4例，PD 2例，有效率為72.7%，對照組分別為 3、6、9、4 例，40.9%，兩組有效率比較，P＜0.05。兩組治療前后血清IL-2和TNF-α水平及KPS評分比較見表1。兩組患者在治療過程中出現(xiàn)的毒性反應主要是骨髓抑制、惡心、嘔吐、末梢神經(jīng)毒性等。觀察組骨髓抑制反應如白細胞、血小板的下降程度較對照組輕;惡心、嘔吐、乏力的發(fā)生率低于對照組(P＜0.05)。末梢神經(jīng)毒性不良反應未見明顯差異，均為Ⅰ～Ⅱ度，于治療結束后逐漸恢復。觀察組患者行DC治療時主要的不良反應為發(fā)熱(5例，約22.7%)、關節(jié)疼痛(2例，約9%)，均為Ⅲ度以下，予消炎痛類藥物對癥處理后改善。未發(fā)現(xiàn)過敏反應，無治療相關性死亡發(fā)生。

表1 兩組治療前后血清IL-2和TNF-α水平及 KPS 評分比較(±s)

表1 兩組治療前后血清IL-2和TNF-α水平及 KPS 評分比較(±s)

注:與同組治療前比較，*P＜0.01;與對照組治療后比較，▲P＜0.01

組別 KPS 評分(分) IL-2(μg/L) TNF-α(μg/L)63.00 ±11.74 8.04 ±2.24 3.85 ±1.53觀察組治療前 72.05 ± 9.03 8.33 ±1.66 4.40 ±1.47治療后 74.75 ±14.46＊▲ 12.49 ±1.71＊▲ 6.62 ±2.81＊▲對照組治療前 73.42 ± 9.45 8.81 ±3.93 4.37 ±1.49治療后

3 討論

乳腺癌是危及女性健康的主要疾病之一，發(fā)病率及病死率隨年齡的升高而上升。目前研究［4］發(fā)現(xiàn)，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及復發(fā)與機體的免疫功能下降密切相關，大部分腫瘤患者機體長期處于免疫力低下狀態(tài)。

DC作為專職抗原呈遞細胞，因其抗原呈遞功能及免疫佐劑作用，可誘導出高效而特異的抗腫瘤免疫，越來越引起國內(nèi)外學者的重視［5］。研究［6］表明，DC是已知體內(nèi)功能最強的專職抗原呈遞細胞，最大特點是能刺激初始型T細胞活化和增殖，是特異性免疫應答的始動者。DC還能誘導機體的體液免疫，激活 NK、NK-T細胞，參與非特異性免疫［7］。馬騰等［8］用熱休克法制備的DC腫瘤疫苗治療乳腺癌療效滿意，且能增強機體的抗腫瘤免疫反應。TA方案是治療乳腺癌常用的化療方案，療效肯定，耐受性好［9］，然而目前國內(nèi)外尚缺乏DC聯(lián)合該方案治療乳腺癌的臨床隨機對照研究報道。本研究結果發(fā)現(xiàn)，觀察組治療有效率及生活質(zhì)量改善程度明顯優(yōu)于對照組，而不良反應尤其是骨髓抑制情況卻顯著低于對照組，此可能與DC能減輕化療對機體造成的短暫免疫抑制狀態(tài)有關［10］。

IL-2又稱T細胞生長因子，可促進T淋巴細胞的增殖反應;增強T淋巴細胞、B淋巴細胞的增殖反應及自然殺傷細胞與單核細胞的吞噬作用，在機體抗腫瘤、抗感染中具有重要作用。TNF-α參與機體的免疫調(diào)節(jié)，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中具有雙向作用［11］。TNF-α能增強宿主免疫力，激活 NK細胞、LAK細胞，對腫瘤細胞產(chǎn)生殺傷作用;高水平TNF-α能促進腫瘤血管生成，使氧化應激反應增強，導致腫瘤細胞增殖及分化。本研究中，對照組血清 IL-2和TNF-α水平較治療前下降，說明化療降低了機體的免疫功能。而觀察組患者免疫功能明顯較治療前改善。

近年來，隨著DC在腫瘤治療中的廣泛應用，其臨床應用時出現(xiàn)的不良反應日益受到重視。其引起的不良反應類似于化療藥物，可見發(fā)熱惡寒、乏力、流感樣癥狀，注射部位紅腫、酸痛、瘙癢等［12］;胃腸道反應主要是惡心、嘔吐，食欲下降［13］。嚴重影響患者的生活質(zhì)量，干擾進一步治療計劃。而在這些常見不良反應中尤以發(fā)熱最常見，是決定DC治療成敗的重要因素［14］。本研究觀察組行DC回輸時，常見的不良反應有發(fā)熱、關節(jié)疼痛，均為Ⅲ度以下，予消炎痛類藥物對癥處理后改善。未發(fā)現(xiàn)嚴重的不良發(fā)應，與國外報道［15］一致。據(jù)報道，此類發(fā)熱為非細菌性炎癥引起，主要與抗原抗體復合物引起的免疫性炎癥密切相關［16］。我們認為回輸?shù)腄C雖然由患者自體的外周血培養(yǎng)而來，但培養(yǎng)過程中的壞死組織殘留，抗原殘余的影響需要考慮。綜上所述，DC自體回輸聯(lián)合TA方案化療治療乳腺癌效果較好，可改善患者免疫功能，提高生活質(zhì)量，減輕化療的不良反應。

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