李月琴　周九蘭

【摘要】目的：建立百部止咳糖漿中苦杏仁苷的含量測(cè)定方法。方法：應(yīng)用HPLC檢測(cè)法，色譜柱為Kromasi C18（5μm，46mm×250mm），流動(dòng)相為甲醇-水（20∶80），柱溫25℃，流速10ml/min。檢測(cè)波長(zhǎng)215nm。結(jié)果：苦杏仁苷在004～024mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=09995），平均回收率9965%。RSD為190%。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確、快速、可靠，可用于測(cè)定百部止咳糖漿中苦杏仁苷的含量。

【關(guān)鍵詞】百部止咳糖漿；苦杏仁苷；高效液相色譜法；含量測(cè)定

【中圖分類號(hào)】R2841【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2014）21-0016-02

百部止咳糖漿為泰州市姜堰中醫(yī)院肺病科與藥劑科共同研制，具有清肺止咳功效，用于急慢性支氣管炎，小兒百日咳?？嘈尤受諡榭嘈尤实闹饕钚猿煞?，苦杏仁苷經(jīng)腸道微生物或苦杏仁本身所含苦杏仁酶能分解產(chǎn)生微量的氫氰酸，對(duì)呼吸中樞有抑制作用，該作用與鎮(zhèn)咳、平喘效應(yīng)有關(guān)[1]。過(guò)量的氫氰酸可引起中毒，抑制細(xì)胞呼吸，形成“細(xì)胞內(nèi)窒息”組織缺氧[2]。因此本文采用高效液相色譜法測(cè)定百部止咳糖漿中苦杏仁苷的含量，以完善百部止咳糖漿的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

1儀器與材料

11儀器SHMADZU日本島津高效液相色譜儀，檢測(cè)器為SPD-10AVP，雙泵LC-10ATCP，大連依利特色譜工作站。電子分析天平（Max 220g，Min 10mg，e=1mg，d=01mg）。

12材料甲醇為色譜純，水為超純水，其它試劑為分析純；苦杏仁苷對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；百部止咳糖漿由江蘇省泰州市姜堰中醫(yī)院提供（批號(hào)：20121212、20130217、20130413）。

2方法與結(jié)果

21色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)色譜柱：Kromasi C18柱（5μm，46mm×250mm）；流動(dòng)相：甲醇-水（20∶80）；流速：10ml/min；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm[3]。在該色譜條件下苦杏仁苷與相鄰雜質(zhì)峰的分離度R>15，理論塔板數(shù)>3000，基線平穩(wěn)，陰性樣品在此條件下無(wú)干擾峰。

22對(duì)照品溶液的制備精密稱取干燥至恒重的苦杏仁苷對(duì)照品2mg置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度搖勻，制備成02mg/ml的對(duì)照品溶液。

23供試品溶液的制備精密量取百部止咳糖漿50ml于50ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用045μm微孔濾膜過(guò)濾，取濾液即得供試品溶液。

24線性關(guān)系精密量取上述對(duì)照品溶液02、04、06、08、10、12ml分別至10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度搖勻。分別精密量取10μl進(jìn)樣，記錄色譜圖，以峰面積（A）對(duì)質(zhì)量濃度（C）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?？嘈尤受赵?04～024mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好?；貧w方程為A=53963C+614，r=09995。

25精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取上述對(duì)照品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，計(jì)算RSD=103%，表明儀器的精密度良好。

26重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批樣品依法制成6份供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣10μl，測(cè)定峰面積。6次測(cè)定結(jié)果的RSD=095%，表明該方法的重復(fù)性良好。

27穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取供試品溶液及對(duì)照品溶液各10μl，在上述色譜條件下，分別于0、4、8、12、24h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，5次測(cè)定的結(jié)果RSD=101%。結(jié)果分析表明，對(duì)照品溶液及供試品溶液均在24h內(nèi)穩(wěn)定。

28加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密量取已知含量的上述供試品溶液20、15、10ml，各平行3份，置10ml容量瓶中，分別加入濃度為02mg/ml的對(duì)照品溶液10、08、06ml，各平行3份，用甲醇稀釋至刻度，按上述色譜條件進(jìn)行操作測(cè)定含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

29樣品的含量測(cè)定取批號(hào)為20121212、20130217、20130413百部止咳糖漿的樣品，按23供試品溶液的制備方法制備樣品的溶液，精密吸取該樣品溶液10μl進(jìn)樣，測(cè)定含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

3討論

苦杏仁具祛痰鎮(zhèn)咳、平喘，抗炎的功效，其有效成分主要是苦杏仁苷，為蛋白酶水解產(chǎn)物，其祛痰鎮(zhèn)咳、平喘抗炎的作用與苦杏仁的止咳平喘的機(jī)理一致。而苦杏仁經(jīng)加熱炮制后，可以殺酶保苷?？嘈尤式佑|到水，會(huì)使部分苷溶于水，也能使一部分苷水解，因此不同的炮制方法會(huì)影響苦杏仁中苦杏仁苷的含量。

本文對(duì)苦杏仁中的主要活性成分苦杏仁苷進(jìn)行含量測(cè)定，且對(duì)苦杏仁苷的HPLC法做了柱效分離度、方法學(xué)的考察，確定了苦杏仁苷在百部止咳糖漿中的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為百部止咳糖漿中苦杏仁的質(zhì)量控制提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

本方法還對(duì)多種流動(dòng)相的組成、流速、柱溫進(jìn)行了分析，實(shí)驗(yàn)表明當(dāng)流動(dòng)相為甲醇-水（20∶80），柱溫25℃，流速10ml/min時(shí)苦杏仁苷的色譜峰的基線平穩(wěn)與雜質(zhì)峰的分離度較好。

2010版中國(guó)藥典中只有苦杏仁藥材中苦杏仁苷的含量測(cè)定方法，而沒(méi)有成品制劑中關(guān)于苦杏仁苷的含量測(cè)定的方法。但文獻(xiàn)中高效液相色譜法檢測(cè)苦杏仁苷含量的報(bào)道較多[4-5]，本試驗(yàn)采用高效液相色譜法方法準(zhǔn)確、快速、可靠，可用于測(cè)定百部止咳糖漿中苦杏仁苷的含量。

參考文獻(xiàn)

[1]侯家玉，方泰惠.中藥藥理學(xué)[M].北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社.2007：177.

[2]李貴海，劉青，孫付軍，等.不同炮制方法對(duì)苦杏仁主要藥效作用的影響[J].中成藥，2007，29（7）：1031-1034.

[3]錢平，賈蕓，劉志輝，等.高效液相色譜法測(cè)定郁李仁中苦杏仁苷的含量[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2009，16（12）：50-51.

[4]吳迪，王建中，趙云霞，等.苦杏仁苷幾種測(cè)定方法的比較研究[J].食品工業(yè)科技，2006，27（2）：184-185.

[5]王乾蕾，李運(yùn)軍，余健，等.高效液相色譜法測(cè)定清肺合劑中苦杏仁苷含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2008，17（19）：31-32.

（收稿日期：20140816）endprint

【摘要】目的：建立百部止咳糖漿中苦杏仁苷的含量測(cè)定方法。方法：應(yīng)用HPLC檢測(cè)法，色譜柱為Kromasi C18（5μm，46mm×250mm），流動(dòng)相為甲醇-水（20∶80），柱溫25℃，流速10ml/min。檢測(cè)波長(zhǎng)215nm。結(jié)果：苦杏仁苷在004～024mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=09995），平均回收率9965%。RSD為190%。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確、快速、可靠，可用于測(cè)定百部止咳糖漿中苦杏仁苷的含量。

【關(guān)鍵詞】百部止咳糖漿；苦杏仁苷；高效液相色譜法；含量測(cè)定

【中圖分類號(hào)】R2841【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2014）21-0016-02

百部止咳糖漿為泰州市姜堰中醫(yī)院肺病科與藥劑科共同研制，具有清肺止咳功效，用于急慢性支氣管炎，小兒百日咳?？嘈尤受諡榭嘈尤实闹饕钚猿煞郑嘈尤受战?jīng)腸道微生物或苦杏仁本身所含苦杏仁酶能分解產(chǎn)生微量的氫氰酸，對(duì)呼吸中樞有抑制作用，該作用與鎮(zhèn)咳、平喘效應(yīng)有關(guān)[1]。過(guò)量的氫氰酸可引起中毒，抑制細(xì)胞呼吸，形成“細(xì)胞內(nèi)窒息”組織缺氧[2]。因此本文采用高效液相色譜法測(cè)定百部止咳糖漿中苦杏仁苷的含量，以完善百部止咳糖漿的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

1儀器與材料

11儀器SHMADZU日本島津高效液相色譜儀，檢測(cè)器為SPD-10AVP，雙泵LC-10ATCP，大連依利特色譜工作站。電子分析天平（Max 220g，Min 10mg，e=1mg，d=01mg）。

12材料甲醇為色譜純，水為超純水，其它試劑為分析純；苦杏仁苷對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；百部止咳糖漿由江蘇省泰州市姜堰中醫(yī)院提供（批號(hào)：20121212、20130217、20130413）。

2方法與結(jié)果

21色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)色譜柱：Kromasi C18柱（5μm，46mm×250mm）；流動(dòng)相：甲醇-水（20∶80）；流速：10ml/min；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm[3]。在該色譜條件下苦杏仁苷與相鄰雜質(zhì)峰的分離度R>15，理論塔板數(shù)>3000，基線平穩(wěn)，陰性樣品在此條件下無(wú)干擾峰。

22對(duì)照品溶液的制備精密稱取干燥至恒重的苦杏仁苷對(duì)照品2mg置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度搖勻，制備成02mg/ml的對(duì)照品溶液。

23供試品溶液的制備精密量取百部止咳糖漿50ml于50ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用045μm微孔濾膜過(guò)濾，取濾液即得供試品溶液。

24線性關(guān)系精密量取上述對(duì)照品溶液02、04、06、08、10、12ml分別至10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度搖勻。分別精密量取10μl進(jìn)樣，記錄色譜圖，以峰面積（A）對(duì)質(zhì)量濃度（C）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?？嘈尤受赵?04～024mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好?；貧w方程為A=53963C+614，r=09995。

25精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取上述對(duì)照品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，計(jì)算RSD=103%，表明儀器的精密度良好。

26重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批樣品依法制成6份供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣10μl，測(cè)定峰面積。6次測(cè)定結(jié)果的RSD=095%，表明該方法的重復(fù)性良好。

27穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取供試品溶液及對(duì)照品溶液各10μl，在上述色譜條件下，分別于0、4、8、12、24h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，5次測(cè)定的結(jié)果RSD=101%。結(jié)果分析表明，對(duì)照品溶液及供試品溶液均在24h內(nèi)穩(wěn)定。

28加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密量取已知含量的上述供試品溶液20、15、10ml，各平行3份，置10ml容量瓶中，分別加入濃度為02mg/ml的對(duì)照品溶液10、08、06ml，各平行3份，用甲醇稀釋至刻度，按上述色譜條件進(jìn)行操作測(cè)定含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

29樣品的含量測(cè)定取批號(hào)為20121212、20130217、20130413百部止咳糖漿的樣品，按23供試品溶液的制備方法制備樣品的溶液，精密吸取該樣品溶液10μl進(jìn)樣，測(cè)定含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

3討論

苦杏仁具祛痰鎮(zhèn)咳、平喘，抗炎的功效，其有效成分主要是苦杏仁苷，為蛋白酶水解產(chǎn)物，其祛痰鎮(zhèn)咳、平喘抗炎的作用與苦杏仁的止咳平喘的機(jī)理一致。而苦杏仁經(jīng)加熱炮制后，可以殺酶保苷。苦杏仁接觸到水，會(huì)使部分苷溶于水，也能使一部分苷水解，因此不同的炮制方法會(huì)影響苦杏仁中苦杏仁苷的含量。

本文對(duì)苦杏仁中的主要活性成分苦杏仁苷進(jìn)行含量測(cè)定，且對(duì)苦杏仁苷的HPLC法做了柱效分離度、方法學(xué)的考察，確定了苦杏仁苷在百部止咳糖漿中的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為百部止咳糖漿中苦杏仁的質(zhì)量控制提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

本方法還對(duì)多種流動(dòng)相的組成、流速、柱溫進(jìn)行了分析，實(shí)驗(yàn)表明當(dāng)流動(dòng)相為甲醇-水（20∶80），柱溫25℃，流速10ml/min時(shí)苦杏仁苷的色譜峰的基線平穩(wěn)與雜質(zhì)峰的分離度較好。

2010版中國(guó)藥典中只有苦杏仁藥材中苦杏仁苷的含量測(cè)定方法，而沒(méi)有成品制劑中關(guān)于苦杏仁苷的含量測(cè)定的方法。但文獻(xiàn)中高效液相色譜法檢測(cè)苦杏仁苷含量的報(bào)道較多[4-5]，本試驗(yàn)采用高效液相色譜法方法準(zhǔn)確、快速、可靠，可用于測(cè)定百部止咳糖漿中苦杏仁苷的含量。

參考文獻(xiàn)

[1]侯家玉，方泰惠.中藥藥理學(xué)[M].北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社.2007：177.

[2]李貴海，劉青，孫付軍，等.不同炮制方法對(duì)苦杏仁主要藥效作用的影響[J].中成藥，2007，29（7）：1031-1034.

[3]錢平，賈蕓，劉志輝，等.高效液相色譜法測(cè)定郁李仁中苦杏仁苷的含量[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2009，16（12）：50-51.

[4]吳迪，王建中，趙云霞，等.苦杏仁苷幾種測(cè)定方法的比較研究[J].食品工業(yè)科技，2006，27（2）：184-185.

[5]王乾蕾，李運(yùn)軍，余健，等.高效液相色譜法測(cè)定清肺合劑中苦杏仁苷含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2008，17（19）：31-32.

（收稿日期：20140816）endprint

【摘要】目的：建立百部止咳糖漿中苦杏仁苷的含量測(cè)定方法。方法：應(yīng)用HPLC檢測(cè)法，色譜柱為Kromasi C18（5μm，46mm×250mm），流動(dòng)相為甲醇-水（20∶80），柱溫25℃，流速10ml/min。檢測(cè)波長(zhǎng)215nm。結(jié)果：苦杏仁苷在004～024mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r=09995），平均回收率9965%。RSD為190%。結(jié)論：該方法準(zhǔn)確、快速、可靠，可用于測(cè)定百部止咳糖漿中苦杏仁苷的含量。

【關(guān)鍵詞】百部止咳糖漿；苦杏仁苷；高效液相色譜法；含量測(cè)定

【中圖分類號(hào)】R2841【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2014）21-0016-02

百部止咳糖漿為泰州市姜堰中醫(yī)院肺病科與藥劑科共同研制，具有清肺止咳功效，用于急慢性支氣管炎，小兒百日咳?？嘈尤受諡榭嘈尤实闹饕钚猿煞?，苦杏仁苷經(jīng)腸道微生物或苦杏仁本身所含苦杏仁酶能分解產(chǎn)生微量的氫氰酸，對(duì)呼吸中樞有抑制作用，該作用與鎮(zhèn)咳、平喘效應(yīng)有關(guān)[1]。過(guò)量的氫氰酸可引起中毒，抑制細(xì)胞呼吸，形成“細(xì)胞內(nèi)窒息”組織缺氧[2]。因此本文采用高效液相色譜法測(cè)定百部止咳糖漿中苦杏仁苷的含量，以完善百部止咳糖漿的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

1儀器與材料

11儀器SHMADZU日本島津高效液相色譜儀，檢測(cè)器為SPD-10AVP，雙泵LC-10ATCP，大連依利特色譜工作站。電子分析天平（Max 220g，Min 10mg，e=1mg，d=01mg）。

12材料甲醇為色譜純，水為超純水，其它試劑為分析純；苦杏仁苷對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；百部止咳糖漿由江蘇省泰州市姜堰中醫(yī)院提供（批號(hào)：20121212、20130217、20130413）。

2方法與結(jié)果

21色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)色譜柱：Kromasi C18柱（5μm，46mm×250mm）；流動(dòng)相：甲醇-水（20∶80）；流速：10ml/min；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：215nm[3]。在該色譜條件下苦杏仁苷與相鄰雜質(zhì)峰的分離度R>15，理論塔板數(shù)>3000，基線平穩(wěn)，陰性樣品在此條件下無(wú)干擾峰。

22對(duì)照品溶液的制備精密稱取干燥至恒重的苦杏仁苷對(duì)照品2mg置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度搖勻，制備成02mg/ml的對(duì)照品溶液。

23供試品溶液的制備精密量取百部止咳糖漿50ml于50ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，用045μm微孔濾膜過(guò)濾，取濾液即得供試品溶液。

24線性關(guān)系精密量取上述對(duì)照品溶液02、04、06、08、10、12ml分別至10ml容量瓶中，用甲醇定容至刻度搖勻。分別精密量取10μl進(jìn)樣，記錄色譜圖，以峰面積（A）對(duì)質(zhì)量濃度（C）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?？嘈尤受赵?04～024mg/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好?；貧w方程為A=53963C+614，r=09995。

25精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取上述對(duì)照品溶液10μl，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，計(jì)算RSD=103%，表明儀器的精密度良好。

26重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批樣品依法制成6份供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣10μl，測(cè)定峰面積。6次測(cè)定結(jié)果的RSD=095%，表明該方法的重復(fù)性良好。

27穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取供試品溶液及對(duì)照品溶液各10μl，在上述色譜條件下，分別于0、4、8、12、24h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，5次測(cè)定的結(jié)果RSD=101%。結(jié)果分析表明，對(duì)照品溶液及供試品溶液均在24h內(nèi)穩(wěn)定。

28加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密量取已知含量的上述供試品溶液20、15、10ml，各平行3份，置10ml容量瓶中，分別加入濃度為02mg/ml的對(duì)照品溶液10、08、06ml，各平行3份，用甲醇稀釋至刻度，按上述色譜條件進(jìn)行操作測(cè)定含量，結(jié)果見(jiàn)表1。

29樣品的含量測(cè)定取批號(hào)為20121212、20130217、20130413百部止咳糖漿的樣品，按23供試品溶液的制備方法制備樣品的溶液，精密吸取該樣品溶液10μl進(jìn)樣，測(cè)定含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

3討論

苦杏仁具祛痰鎮(zhèn)咳、平喘，抗炎的功效，其有效成分主要是苦杏仁苷，為蛋白酶水解產(chǎn)物，其祛痰鎮(zhèn)咳、平喘抗炎的作用與苦杏仁的止咳平喘的機(jī)理一致。而苦杏仁經(jīng)加熱炮制后，可以殺酶保苷?？嘈尤式佑|到水，會(huì)使部分苷溶于水，也能使一部分苷水解，因此不同的炮制方法會(huì)影響苦杏仁中苦杏仁苷的含量。

本文對(duì)苦杏仁中的主要活性成分苦杏仁苷進(jìn)行含量測(cè)定，且對(duì)苦杏仁苷的HPLC法做了柱效分離度、方法學(xué)的考察，確定了苦杏仁苷在百部止咳糖漿中的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為百部止咳糖漿中苦杏仁的質(zhì)量控制提供了實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

本方法還對(duì)多種流動(dòng)相的組成、流速、柱溫進(jìn)行了分析，實(shí)驗(yàn)表明當(dāng)流動(dòng)相為甲醇-水（20∶80），柱溫25℃，流速10ml/min時(shí)苦杏仁苷的色譜峰的基線平穩(wěn)與雜質(zhì)峰的分離度較好。

2010版中國(guó)藥典中只有苦杏仁藥材中苦杏仁苷的含量測(cè)定方法，而沒(méi)有成品制劑中關(guān)于苦杏仁苷的含量測(cè)定的方法。但文獻(xiàn)中高效液相色譜法檢測(cè)苦杏仁苷含量的報(bào)道較多[4-5]，本試驗(yàn)采用高效液相色譜法方法準(zhǔn)確、快速、可靠，可用于測(cè)定百部止咳糖漿中苦杏仁苷的含量。

參考文獻(xiàn)

[1]侯家玉，方泰惠.中藥藥理學(xué)[M].北京：中國(guó)中醫(yī)藥出版社.2007：177.

[2]李貴海，劉青，孫付軍，等.不同炮制方法對(duì)苦杏仁主要藥效作用的影響[J].中成藥，2007，29（7）：1031-1034.

[3]錢平，賈蕓，劉志輝，等.高效液相色譜法測(cè)定郁李仁中苦杏仁苷的含量[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2009，16（12）：50-51.

[4]吳迪，王建中，趙云霞，等.苦杏仁苷幾種測(cè)定方法的比較研究[J].食品工業(yè)科技，2006，27（2）：184-185.

[5]王乾蕾，李運(yùn)軍，余健，等.高效液相色譜法測(cè)定清肺合劑中苦杏仁苷含量[J].中國(guó)藥業(yè)，2008，17（19）：31-32.

（收稿日期：20140816）endprint