劉曉鵬　姜寧　丁峰峻　丁振國　李力　梁玉堂

【摘要】目的：優(yōu)化連錢草總黃酮提取工藝。方法：以連錢草總黃酮提取的四個(gè)主要因素（提取時(shí)間、提取溫度、液固比、乙醇）為自變量，黃酮提取率為響應(yīng)值，采用響應(yīng)面法Box-Behnken試驗(yàn)建立回歸方程，優(yōu)化連錢草總黃酮的提取工藝。結(jié)果：經(jīng)過驗(yàn)證，當(dāng)提取時(shí)間15h，提取溫度41℃，液固比23∶1，乙醇濃度90%時(shí)，黃酮提取率可達(dá)632%～647%。結(jié)論：本研究優(yōu)化出了連錢草總黃酮的提取工藝，該工藝能很好地指導(dǎo)實(shí)踐生產(chǎn)，為連錢草總黃酮的進(jìn)一步開發(fā)提供了理論基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】連錢草；總黃酮；響應(yīng)面法；提取工藝；優(yōu)化

【中圖分類號(hào)】R2842【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2014）21-0012-03

連錢草為唇形科活血丹屬植物活血丹[Glechoma longituba （Nakai） Kupr]干燥地上部分。連錢草性味涼辛，微苦，微寒。歸肝、腎、膀胱經(jīng)[1]，具有利膽、利尿、抗菌、抗炎、降血糖、抗腫瘤以及抗腹瀉等藥理作用，主治黃疸型肝炎、膽囊炎、膽石癥、疳積、腎結(jié)石、膀胱結(jié)石、多發(fā)性膿瘍、瘡癰腫痛、嬰兒濕疹、跌打損傷、腮腺炎、牙痛等癥[2]。

連錢草的主要化學(xué)成分有萜類[3]、黃酮[4，5]、揮發(fā)油[6]、有機(jī)酸[7，8]以及多糖等。其中，萜類化合物主要包括熊果酸、齊墩果酸、烏蘇酸、2-羥基烏蘇酸等；黃酮和黃酮苷類化合物包括木犀草素、蘆丁、芹菜素、刺槐素、海常素、胡蘿卜苷、槲皮素、連錢草酮等；揮發(fā)油類化合物包括左旋薄荷酮、胡薄荷酮、旅烯、檸檬烯、1，8-桉葉素、異薄荷酮、異松樟酮、α-松油醇等，具有特殊的清香味；有機(jī)酸類化合物包括阿魏酸、咖啡酸、介子酸、月桂酸、迷迭香酸、原兒茶醛、迷迭香酸甲酯、三十烷酸、肉豆蔻酸等有機(jī)酸。

目前針對(duì)連錢草總黃酮提取工藝的研究尚不多見。本研究通過考察提取時(shí)間、提取溫度、液固比和乙醇等因素，采用單因素試驗(yàn)和Box-Behnken試驗(yàn)優(yōu)化了連錢草總黃酮的提取工藝，結(jié)果理想，報(bào)告如下。

1儀器與試藥

11儀器TU-1810型紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）、RT-02A型多功能粉碎機(jī)（弘荃機(jī)械企業(yè)有限公司）、BECKMAN COUCTER型離心機(jī)（美國BECKMAN公司）、HHS型恒溫水浴鍋等儀器（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）。

12試藥連錢草由南京同仁堂洪澤中藥材科技有限公司提供（經(jīng)姜寧副教授鑒定為唇形科活血丹屬植物活血丹[Glechoma longituba （Nakai） Kupr]），烘干，粉碎，過60目篩；無水乙醇、蘆丁、亞硝酸鈉、硝酸鋁等均為分析純，購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

2方法與結(jié)果

21黃酮含量的測(cè)定以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，參照文獻(xiàn)[9]進(jìn)行。

22Box-Behnken試驗(yàn)

221Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)在預(yù)試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用 Design-Expert 80的Box-Behnken 設(shè)計(jì)，以提取時(shí)間、溫度、液固比、乙醇濃度為自變量，黃酮提取率為響應(yīng)值。試驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)和結(jié)果分別見表1、表2。

根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，建立了如下回歸模型：R=638–016A+0057B+044C+011D+015AB+011AC+062AD+036BC+0030BD+0013CD-063A2–061B2–085C2–054D2。該回歸模型的決定系數(shù)R2為09746，校正后的決定系數(shù)（adj-R2）為09493，說明該模型擬合性較好。對(duì)回歸模型和各因子進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表3。從表3可知：該模型F值為3841，P值<00001，而失擬性試驗(yàn)F值為219，不顯著，說明此模型與實(shí)際情況擬合得較好。根據(jù)F值和P值，可以得出各因素對(duì)響應(yīng)值的作用由大到小為：C2>A2> B2>C>D2>AD>BC>A>D>AB>AC>B>BD>CD。其中：B、AB、AC、BD、CD對(duì)響應(yīng)值的作用不顯著，所以上述回歸方程中以上幾項(xiàng)可以忽略，所得回歸方程如下：R=638–016A+044C+011D+062AD+036BC-063A2–061B2–085C2–054D2。

222優(yōu)化工藝的確定由Box-Behnken試驗(yàn)結(jié)果所得的回歸方程，可以計(jì)算出當(dāng)A=-005，B=013，C=028，D=008時(shí)，R有極大值645%。將各因素的水平回代，可以得到最優(yōu)工藝是提取時(shí)間14975h，413℃，液固比228∶1，乙醇濃度904%時(shí)，黃酮提取率最高。為了操作方便，將優(yōu)化的工藝確定為提取時(shí)間15h，提取溫度41℃，液固比23∶1，乙醇濃度90%，并對(duì)該工藝進(jìn)行了驗(yàn)證，連錢草黃酮提取率在632%～647%之間。說明經(jīng)過響應(yīng)面法優(yōu)化的工藝具有很強(qiáng)的實(shí)踐指導(dǎo)作用。

223響應(yīng)面分析圖1為響應(yīng)面分析。從中可以看出：當(dāng)C=028，D=008時(shí)，黃酮的提取率隨著A和B的增加而上升，當(dāng)達(dá)到最大值后，A和B的上升反而會(huì)使提取率下降（圖1A）；B和D分別為013、008時(shí)，A和C處于低水平時(shí)，響應(yīng)值較低，隨著A和C的升高，響應(yīng)值也隨之升高，當(dāng)?shù)揭欢ǔ潭群?，響?yīng)值不再隨A和C的上升而上升，而是下降（圖1B）；如B=013、C=028，A和D的變化會(huì)顯著影響黃酮的提取率，當(dāng)A和D較小時(shí)，黃酮提取率也較低，當(dāng)A和D增大后，提取率也增高，當(dāng)提取率達(dá)到極大值后，其會(huì)隨著A和D的上升而下降（圖1C）；圖1D顯示了B和C對(duì)響應(yīng)值的影響，響應(yīng)值開始隨著B和C的上升而上升，當(dāng)達(dá)到一定值后，反而會(huì)隨著B和C的上升而下降； 隨著B和D的變化，響應(yīng)值的變化則較平緩（圖1E）；A=-005、B=013時(shí)，當(dāng)C和D較小時(shí)，提取率也較低，C和D上升后，提取率也增加，當(dāng)提取率達(dá)到最大值后，C和D的增加反而會(huì)使提取率下降，不過下降的幅度較上升的幅度平緩（圖1F）。

3討論

提取時(shí)間、提取溫度、液固比和乙醇濃度是影響黃酮提取率的四個(gè)主要因素。提取時(shí)間的延長會(huì)增加植物體內(nèi)的黃酮溶出，當(dāng)提取達(dá)到一定時(shí)間后，連錢草黃酮的提取率不再顯著增加，這是因?yàn)榻鲆褐悬S酮與植物內(nèi)的黃酮濃度差縮小，黃酮溶出速度下降。提取溫度41℃時(shí)連錢草黃酮的提取率最高，隨后溫度的提高反而會(huì)使提取率下降，說明高溫可能會(huì)破壞連錢草黃酮的結(jié)構(gòu)。液固比的增加會(huì)提高植物內(nèi)黃酮與浸出液中黃酮的濃度差，從而加快黃酮的溶出，但當(dāng)液固比過大時(shí)，會(huì)使后續(xù)處理繁瑣，加大處理過程中的損耗從而使提取率下降。本研究中乙醇濃度較高時(shí)，連錢草黃酮的提取率較大，說是連錢草黃酮在高濃度的乙醇溶液中溶解性較好。響應(yīng)面法是優(yōu)化黃酮提取工藝常用的方法之一，本研究通過響應(yīng)面法優(yōu)化的連錢草黃酮提取工藝得到驗(yàn)證，有很好的實(shí)用性。

參考文獻(xiàn)

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2]宋銳，張?jiān)?，叢曉東，等.連錢草的化學(xué)成分及生物活性研究進(jìn)展[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2010，28（12）：2511-2514.

[3]張前軍，楊小生，朱海燕，等.連錢草中三萜類化學(xué)成分[J].中草藥，2006，37（12）：1780-1781.

[4]楊念云，段金廒，李萍，等.連錢草中的黃酮類化學(xué)成分[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，36（3）：210-212.

[5]黃天賜，聶晶，張立群.連錢草中黃酮、有機(jī)酸類成分的HPLC指紋圖譜[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（1）：132-135.

[6]吳麗群，江芳.連錢草揮發(fā)油化學(xué)成分的研究[J].中國醫(yī)藥科學(xué)，2012，2（23）：101-102.

[7]劉杰，李國強(qiáng)，吳霞，等.連錢草的化學(xué)成分研究[J].中國中藥雜志，2014，39（4）：695-698.

[8]于志斌，吳霞，葉蘊(yùn)華，等.連錢草化學(xué)成分研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2008，20（2）：262-264.

[9]田春蓮，蔣鳳開.茜草總黃酮提取工藝研究[J].食品科學(xué)，2011，32（24）：60-63.

（收稿日期：20140813）endprint

【摘要】目的：優(yōu)化連錢草總黃酮提取工藝。方法：以連錢草總黃酮提取的四個(gè)主要因素（提取時(shí)間、提取溫度、液固比、乙醇）為自變量，黃酮提取率為響應(yīng)值，采用響應(yīng)面法Box-Behnken試驗(yàn)建立回歸方程，優(yōu)化連錢草總黃酮的提取工藝。結(jié)果：經(jīng)過驗(yàn)證，當(dāng)提取時(shí)間15h，提取溫度41℃，液固比23∶1，乙醇濃度90%時(shí)，黃酮提取率可達(dá)632%～647%。結(jié)論：本研究優(yōu)化出了連錢草總黃酮的提取工藝，該工藝能很好地指導(dǎo)實(shí)踐生產(chǎn)，為連錢草總黃酮的進(jìn)一步開發(fā)提供了理論基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】連錢草；總黃酮；響應(yīng)面法；提取工藝；優(yōu)化

【中圖分類號(hào)】R2842【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2014）21-0012-03

連錢草為唇形科活血丹屬植物活血丹[Glechoma longituba （Nakai） Kupr]干燥地上部分。連錢草性味涼辛，微苦，微寒。歸肝、腎、膀胱經(jīng)[1]，具有利膽、利尿、抗菌、抗炎、降血糖、抗腫瘤以及抗腹瀉等藥理作用，主治黃疸型肝炎、膽囊炎、膽石癥、疳積、腎結(jié)石、膀胱結(jié)石、多發(fā)性膿瘍、瘡癰腫痛、嬰兒濕疹、跌打損傷、腮腺炎、牙痛等癥[2]。

連錢草的主要化學(xué)成分有萜類[3]、黃酮[4，5]、揮發(fā)油[6]、有機(jī)酸[7，8]以及多糖等。其中，萜類化合物主要包括熊果酸、齊墩果酸、烏蘇酸、2-羥基烏蘇酸等；黃酮和黃酮苷類化合物包括木犀草素、蘆丁、芹菜素、刺槐素、海常素、胡蘿卜苷、槲皮素、連錢草酮等；揮發(fā)油類化合物包括左旋薄荷酮、胡薄荷酮、旅烯、檸檬烯、1，8-桉葉素、異薄荷酮、異松樟酮、α-松油醇等，具有特殊的清香味；有機(jī)酸類化合物包括阿魏酸、咖啡酸、介子酸、月桂酸、迷迭香酸、原兒茶醛、迷迭香酸甲酯、三十烷酸、肉豆蔻酸等有機(jī)酸。

目前針對(duì)連錢草總黃酮提取工藝的研究尚不多見。本研究通過考察提取時(shí)間、提取溫度、液固比和乙醇等因素，采用單因素試驗(yàn)和Box-Behnken試驗(yàn)優(yōu)化了連錢草總黃酮的提取工藝，結(jié)果理想，報(bào)告如下。

1儀器與試藥

11儀器TU-1810型紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）、RT-02A型多功能粉碎機(jī)（弘荃機(jī)械企業(yè)有限公司）、BECKMAN COUCTER型離心機(jī)（美國BECKMAN公司）、HHS型恒溫水浴鍋等儀器（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）。

12試藥連錢草由南京同仁堂洪澤中藥材科技有限公司提供（經(jīng)姜寧副教授鑒定為唇形科活血丹屬植物活血丹[Glechoma longituba （Nakai） Kupr]），烘干，粉碎，過60目篩；無水乙醇、蘆丁、亞硝酸鈉、硝酸鋁等均為分析純，購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

2方法與結(jié)果

21黃酮含量的測(cè)定以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，參照文獻(xiàn)[9]進(jìn)行。

22Box-Behnken試驗(yàn)

221Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)在預(yù)試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用 Design-Expert 80的Box-Behnken 設(shè)計(jì)，以提取時(shí)間、溫度、液固比、乙醇濃度為自變量，黃酮提取率為響應(yīng)值。試驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)和結(jié)果分別見表1、表2。

根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，建立了如下回歸模型：R=638–016A+0057B+044C+011D+015AB+011AC+062AD+036BC+0030BD+0013CD-063A2–061B2–085C2–054D2。該回歸模型的決定系數(shù)R2為09746，校正后的決定系數(shù)（adj-R2）為09493，說明該模型擬合性較好。對(duì)回歸模型和各因子進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表3。從表3可知：該模型F值為3841，P值<00001，而失擬性試驗(yàn)F值為219，不顯著，說明此模型與實(shí)際情況擬合得較好。根據(jù)F值和P值，可以得出各因素對(duì)響應(yīng)值的作用由大到小為：C2>A2> B2>C>D2>AD>BC>A>D>AB>AC>B>BD>CD。其中：B、AB、AC、BD、CD對(duì)響應(yīng)值的作用不顯著，所以上述回歸方程中以上幾項(xiàng)可以忽略，所得回歸方程如下：R=638–016A+044C+011D+062AD+036BC-063A2–061B2–085C2–054D2。

222優(yōu)化工藝的確定由Box-Behnken試驗(yàn)結(jié)果所得的回歸方程，可以計(jì)算出當(dāng)A=-005，B=013，C=028，D=008時(shí)，R有極大值645%。將各因素的水平回代，可以得到最優(yōu)工藝是提取時(shí)間14975h，413℃，液固比228∶1，乙醇濃度904%時(shí)，黃酮提取率最高。為了操作方便，將優(yōu)化的工藝確定為提取時(shí)間15h，提取溫度41℃，液固比23∶1，乙醇濃度90%，并對(duì)該工藝進(jìn)行了驗(yàn)證，連錢草黃酮提取率在632%～647%之間。說明經(jīng)過響應(yīng)面法優(yōu)化的工藝具有很強(qiáng)的實(shí)踐指導(dǎo)作用。

223響應(yīng)面分析圖1為響應(yīng)面分析。從中可以看出：當(dāng)C=028，D=008時(shí)，黃酮的提取率隨著A和B的增加而上升，當(dāng)達(dá)到最大值后，A和B的上升反而會(huì)使提取率下降（圖1A）；B和D分別為013、008時(shí)，A和C處于低水平時(shí)，響應(yīng)值較低，隨著A和C的升高，響應(yīng)值也隨之升高，當(dāng)?shù)揭欢ǔ潭群?，響?yīng)值不再隨A和C的上升而上升，而是下降（圖1B）；如B=013、C=028，A和D的變化會(huì)顯著影響黃酮的提取率，當(dāng)A和D較小時(shí)，黃酮提取率也較低，當(dāng)A和D增大后，提取率也增高，當(dāng)提取率達(dá)到極大值后，其會(huì)隨著A和D的上升而下降（圖1C）；圖1D顯示了B和C對(duì)響應(yīng)值的影響，響應(yīng)值開始隨著B和C的上升而上升，當(dāng)達(dá)到一定值后，反而會(huì)隨著B和C的上升而下降； 隨著B和D的變化，響應(yīng)值的變化則較平緩（圖1E）；A=-005、B=013時(shí)，當(dāng)C和D較小時(shí)，提取率也較低，C和D上升后，提取率也增加，當(dāng)提取率達(dá)到最大值后，C和D的增加反而會(huì)使提取率下降，不過下降的幅度較上升的幅度平緩（圖1F）。

3討論

提取時(shí)間、提取溫度、液固比和乙醇濃度是影響黃酮提取率的四個(gè)主要因素。提取時(shí)間的延長會(huì)增加植物體內(nèi)的黃酮溶出，當(dāng)提取達(dá)到一定時(shí)間后，連錢草黃酮的提取率不再顯著增加，這是因?yàn)榻鲆褐悬S酮與植物內(nèi)的黃酮濃度差縮小，黃酮溶出速度下降。提取溫度41℃時(shí)連錢草黃酮的提取率最高，隨后溫度的提高反而會(huì)使提取率下降，說明高溫可能會(huì)破壞連錢草黃酮的結(jié)構(gòu)。液固比的增加會(huì)提高植物內(nèi)黃酮與浸出液中黃酮的濃度差，從而加快黃酮的溶出，但當(dāng)液固比過大時(shí)，會(huì)使后續(xù)處理繁瑣，加大處理過程中的損耗從而使提取率下降。本研究中乙醇濃度較高時(shí)，連錢草黃酮的提取率較大，說是連錢草黃酮在高濃度的乙醇溶液中溶解性較好。響應(yīng)面法是優(yōu)化黃酮提取工藝常用的方法之一，本研究通過響應(yīng)面法優(yōu)化的連錢草黃酮提取工藝得到驗(yàn)證，有很好的實(shí)用性。

參考文獻(xiàn)

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2]宋銳，張?jiān)?，叢曉東，等.連錢草的化學(xué)成分及生物活性研究進(jìn)展[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2010，28（12）：2511-2514.

[3]張前軍，楊小生，朱海燕，等.連錢草中三萜類化學(xué)成分[J].中草藥，2006，37（12）：1780-1781.

[4]楊念云，段金廒，李萍，等.連錢草中的黃酮類化學(xué)成分[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2005，36（3）：210-212.

[5]黃天賜，聶晶，張立群.連錢草中黃酮、有機(jī)酸類成分的HPLC指紋圖譜[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2013，19（1）：132-135.

[6]吳麗群，江芳.連錢草揮發(fā)油化學(xué)成分的研究[J].中國醫(yī)藥科學(xué)，2012，2（23）：101-102.

[7]劉杰，李國強(qiáng)，吳霞，等.連錢草的化學(xué)成分研究[J].中國中藥雜志，2014，39（4）：695-698.

[8]于志斌，吳霞，葉蘊(yùn)華，等.連錢草化學(xué)成分研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2008，20（2）：262-264.

[9]田春蓮，蔣鳳開.茜草總黃酮提取工藝研究[J].食品科學(xué)，2011，32（24）：60-63.

（收稿日期：20140813）endprint

【摘要】目的：優(yōu)化連錢草總黃酮提取工藝。方法：以連錢草總黃酮提取的四個(gè)主要因素（提取時(shí)間、提取溫度、液固比、乙醇）為自變量，黃酮提取率為響應(yīng)值，采用響應(yīng)面法Box-Behnken試驗(yàn)建立回歸方程，優(yōu)化連錢草總黃酮的提取工藝。結(jié)果：經(jīng)過驗(yàn)證，當(dāng)提取時(shí)間15h，提取溫度41℃，液固比23∶1，乙醇濃度90%時(shí)，黃酮提取率可達(dá)632%～647%。結(jié)論：本研究優(yōu)化出了連錢草總黃酮的提取工藝，該工藝能很好地指導(dǎo)實(shí)踐生產(chǎn)，為連錢草總黃酮的進(jìn)一步開發(fā)提供了理論基礎(chǔ)。

【關(guān)鍵詞】連錢草；總黃酮；響應(yīng)面法；提取工藝；優(yōu)化

【中圖分類號(hào)】R2842【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2014）21-0012-03

連錢草為唇形科活血丹屬植物活血丹[Glechoma longituba （Nakai） Kupr]干燥地上部分。連錢草性味涼辛，微苦，微寒。歸肝、腎、膀胱經(jīng)[1]，具有利膽、利尿、抗菌、抗炎、降血糖、抗腫瘤以及抗腹瀉等藥理作用，主治黃疸型肝炎、膽囊炎、膽石癥、疳積、腎結(jié)石、膀胱結(jié)石、多發(fā)性膿瘍、瘡癰腫痛、嬰兒濕疹、跌打損傷、腮腺炎、牙痛等癥[2]。

連錢草的主要化學(xué)成分有萜類[3]、黃酮[4，5]、揮發(fā)油[6]、有機(jī)酸[7，8]以及多糖等。其中，萜類化合物主要包括熊果酸、齊墩果酸、烏蘇酸、2-羥基烏蘇酸等；黃酮和黃酮苷類化合物包括木犀草素、蘆丁、芹菜素、刺槐素、海常素、胡蘿卜苷、槲皮素、連錢草酮等；揮發(fā)油類化合物包括左旋薄荷酮、胡薄荷酮、旅烯、檸檬烯、1，8-桉葉素、異薄荷酮、異松樟酮、α-松油醇等，具有特殊的清香味；有機(jī)酸類化合物包括阿魏酸、咖啡酸、介子酸、月桂酸、迷迭香酸、原兒茶醛、迷迭香酸甲酯、三十烷酸、肉豆蔻酸等有機(jī)酸。

目前針對(duì)連錢草總黃酮提取工藝的研究尚不多見。本研究通過考察提取時(shí)間、提取溫度、液固比和乙醇等因素，采用單因素試驗(yàn)和Box-Behnken試驗(yàn)優(yōu)化了連錢草總黃酮的提取工藝，結(jié)果理想，報(bào)告如下。

1儀器與試藥

11儀器TU-1810型紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）、RT-02A型多功能粉碎機(jī)（弘荃機(jī)械企業(yè)有限公司）、BECKMAN COUCTER型離心機(jī)（美國BECKMAN公司）、HHS型恒溫水浴鍋等儀器（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠）。

12試藥連錢草由南京同仁堂洪澤中藥材科技有限公司提供（經(jīng)姜寧副教授鑒定為唇形科活血丹屬植物活血丹[Glechoma longituba （Nakai） Kupr]），烘干，粉碎，過60目篩；無水乙醇、蘆丁、亞硝酸鈉、硝酸鋁等均為分析純，購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

2方法與結(jié)果

21黃酮含量的測(cè)定以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，參照文獻(xiàn)[9]進(jìn)行。

22Box-Behnken試驗(yàn)

221Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)在預(yù)試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用 Design-Expert 80的Box-Behnken 設(shè)計(jì)，以提取時(shí)間、溫度、液固比、乙醇濃度為自變量，黃酮提取率為響應(yīng)值。試驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)和結(jié)果分別見表1、表2。

根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，建立了如下回歸模型：R=638–016A+0057B+044C+011D+015AB+011AC+062AD+036BC+0030BD+0013CD-063A2–061B2–085C2–054D2。該回歸模型的決定系數(shù)R2為09746，校正后的決定系數(shù)（adj-R2）為09493，說明該模型擬合性較好。對(duì)回歸模型和各因子進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表3。從表3可知：該模型F值為3841，P值<00001，而失擬性試驗(yàn)F值為219，不顯著，說明此模型與實(shí)際情況擬合得較好。根據(jù)F值和P值，可以得出各因素對(duì)響應(yīng)值的作用由大到小為：C2>A2> B2>C>D2>AD>BC>A>D>AB>AC>B>BD>CD。其中：B、AB、AC、BD、CD對(duì)響應(yīng)值的作用不顯著，所以上述回歸方程中以上幾項(xiàng)可以忽略，所得回歸方程如下：R=638–016A+044C+011D+062AD+036BC-063A2–061B2–085C2–054D2。

222優(yōu)化工藝的確定由Box-Behnken試驗(yàn)結(jié)果所得的回歸方程，可以計(jì)算出當(dāng)A=-005，B=013，C=028，D=008時(shí)，R有極大值645%。將各因素的水平回代，可以得到最優(yōu)工藝是提取時(shí)間14975h，413℃，液固比228∶1，乙醇濃度904%時(shí)，黃酮提取率最高。為了操作方便，將優(yōu)化的工藝確定為提取時(shí)間15h，提取溫度41℃，液固比23∶1，乙醇濃度90%，并對(duì)該工藝進(jìn)行了驗(yàn)證，連錢草黃酮提取率在632%～647%之間。說明經(jīng)過響應(yīng)面法優(yōu)化的工藝具有很強(qiáng)的實(shí)踐指導(dǎo)作用。

223響應(yīng)面分析圖1為響應(yīng)面分析。從中可以看出：當(dāng)C=028，D=008時(shí)，黃酮的提取率隨著A和B的增加而上升，當(dāng)達(dá)到最大值后，A和B的上升反而會(huì)使提取率下降（圖1A）；B和D分別為013、008時(shí)，A和C處于低水平時(shí)，響應(yīng)值較低，隨著A和C的升高，響應(yīng)值也隨之升高，當(dāng)?shù)揭欢ǔ潭群螅憫?yīng)值不再隨A和C的上升而上升，而是下降（圖1B）；如B=013、C=028，A和D的變化會(huì)顯著影響黃酮的提取率，當(dāng)A和D較小時(shí)，黃酮提取率也較低，當(dāng)A和D增大后，提取率也增高，當(dāng)提取率達(dá)到極大值后，其會(huì)隨著A和D的上升而下降（圖1C）；圖1D顯示了B和C對(duì)響應(yīng)值的影響，響應(yīng)值開始隨著B和C的上升而上升，當(dāng)達(dá)到一定值后，反而會(huì)隨著B和C的上升而下降； 隨著B和D的變化，響應(yīng)值的變化則較平緩（圖1E）；A=-005、B=013時(shí)，當(dāng)C和D較小時(shí)，提取率也較低，C和D上升后，提取率也增加，當(dāng)提取率達(dá)到最大值后，C和D的增加反而會(huì)使提取率下降，不過下降的幅度較上升的幅度平緩（圖1F）。

3討論

提取時(shí)間、提取溫度、液固比和乙醇濃度是影響黃酮提取率的四個(gè)主要因素。提取時(shí)間的延長會(huì)增加植物體內(nèi)的黃酮溶出，當(dāng)提取達(dá)到一定時(shí)間后，連錢草黃酮的提取率不再顯著增加，這是因?yàn)榻鲆褐悬S酮與植物內(nèi)的黃酮濃度差縮小，黃酮溶出速度下降。提取溫度41℃時(shí)連錢草黃酮的提取率最高，隨后溫度的提高反而會(huì)使提取率下降，說明高溫可能會(huì)破壞連錢草黃酮的結(jié)構(gòu)。液固比的增加會(huì)提高植物內(nèi)黃酮與浸出液中黃酮的濃度差，從而加快黃酮的溶出，但當(dāng)液固比過大時(shí)，會(huì)使后續(xù)處理繁瑣，加大處理過程中的損耗從而使提取率下降。本研究中乙醇濃度較高時(shí)，連錢草黃酮的提取率較大，說是連錢草黃酮在高濃度的乙醇溶液中溶解性較好。響應(yīng)面法是優(yōu)化黃酮提取工藝常用的方法之一，本研究通過響應(yīng)面法優(yōu)化的連錢草黃酮提取工藝得到驗(yàn)證，有很好的實(shí)用性。

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（收稿日期：20140813）endprint