于 哲 蔣春林

廣州中醫(yī)藥大學(xué)祈福醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東廣州 511495

流產(chǎn)是婦女妊娠過(guò)程中的一個(gè)過(guò)程，妊娠期流產(chǎn)和免疫系統(tǒng)有著密切的關(guān)系[1]。該研究2013年3月—2014年2月間通過(guò)對(duì)該院妊娠期流產(chǎn)病例臨床資料分析，觀察流產(chǎn)病例胎盤中Notch配體Jagged-1、Jagged-2和CD56+NK細(xì)胞定位和表達(dá)情況，從而分析妊娠期脫膜中CD56+NK細(xì)胞表達(dá)水平和Notch配體Jagged-1、Jagged-2之間的關(guān)系，為分析流產(chǎn)原因，給予相應(yīng)的措施以相應(yīng)的理論依據(jù)。報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院2013年3月—2014年2月收治的妊娠期流產(chǎn)對(duì)象42例和30例正常剖宮產(chǎn)對(duì)象臨床資料進(jìn)行分析，其中依據(jù)流產(chǎn)方式對(duì)42例妊娠期流產(chǎn)對(duì)象進(jìn)行分組，人工流產(chǎn)組22例，年齡 22～36歲，平均年齡（25.6±5.4）歲，孕周 5～11周，平均孕周（7.5±2.0）周，自然流產(chǎn)組 20例，年齡 23～37 歲，平均年齡（25.2±5.1）歲，孕周 6～10 周，平均孕周（7.3±2.1）周。另外取 42例流產(chǎn)對(duì)象的絨毛組織標(biāo)本作為絨毛組，剖宮產(chǎn)對(duì)象取其胎盤作為胎盤組，年齡23～37歲，平均年齡（26.5±4.4）歲。人工流產(chǎn)組和自然流產(chǎn)組、絨毛組和胎盤組研究對(duì)象的資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2 方法

Jagged-1、Jagged-2和CD56+NK細(xì)胞均采用免疫組化方法進(jìn)行測(cè)定。首先進(jìn)行固定標(biāo)本、對(duì)其進(jìn)行脫水、透明、浸蠟然后包埋，將其切至厚度為3～5μm。染色之前37℃烤箱過(guò)夜，脫蠟，水化，酒精、水進(jìn)行清洗，制成玻片放在濕盒內(nèi)，加入3%過(guò)氧化氫，蒸餾水沖洗，緩沖液浸泡振蕩，進(jìn)行抗原修復(fù)。分別滴加鼠抗人單克隆抗體CD56和CD16，兔抗人多克隆抗體Jagged-2、Jagged-1在組織上，通過(guò)PBS沖洗切片，加酶標(biāo)抗鼠/兔聚合物，37℃孵育30 min，沖洗切片，緩沖液浸潤(rùn)、振蕩，加入DAB進(jìn)行顯色，1min通過(guò)蒸餾水終止顯色，通過(guò)蘇木素進(jìn)行復(fù)染。通過(guò)高倍顯微鏡進(jìn)行觀察，隨機(jī)選擇15個(gè)高倍視野，計(jì)算每隔視野陽(yáng)性細(xì)胞面積和視野總面積的比值，呈現(xiàn)黃色或者棕黃色為陽(yáng)性反應(yīng)。

1.3 觀察指標(biāo)

①觀察絨毛組和胎盤組Jagged-1、Jagged-2表達(dá)情況；②觀察自然流產(chǎn)組和人工流產(chǎn)組絨毛中的CD56+、Jagged-1及Jagged-2的表達(dá)情況；③觀察CD56+、Jagged-1及Jagged-2表達(dá)的相關(guān)情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

通過(guò)采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 19.0建立數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，通過(guò)t檢驗(yàn)主要對(duì)計(jì)量資料進(jìn)行分析，運(yùn)用直線相關(guān)性的分析。

2 結(jié)果

2.1 絨毛組和胎盤組Jagged-1、Jagged-2表達(dá)情況

絨毛組和胎盤組Jagged-1、Jagged-2表達(dá)情況，見(jiàn)表1。胎盤組Jagged-1高于絨毛組，Jagged-2低于絨毛組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

表1 絨毛組和胎盤組Jagged-1、Jagged-2表達(dá)情況（）

表1 絨毛組和胎盤組Jagged-1、Jagged-2表達(dá)情況（）

組別Jagged-1 Jagged-2絨毛組(n=42)胎盤組(n=30)t值P值13.5±1.015.3±1.17.22<0.0527.6±1.216.7±1.435.44<0.05

2.2 人工流產(chǎn)組和自然流產(chǎn)組絨毛中 Jagged-1、Jagged-2及CD56+的表達(dá)情況

自然流產(chǎn)組和人工流產(chǎn)組絨毛中CD56+、Jagged-1及Jagged-2的表達(dá)情況，見(jiàn)表2。自然流產(chǎn)組Jagged-1、Jagged-2及CD56+的表達(dá)均低于人工流產(chǎn)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

表2 人工流產(chǎn)組和自然流產(chǎn)組絨毛中Jagged-1、Jagged-2及CD56+的表達(dá)情況（）

表2 人工流產(chǎn)組和自然流產(chǎn)組絨毛中Jagged-1、Jagged-2及CD56+的表達(dá)情況（）

組別Jagged-1Jagged-2 CD56+人工流產(chǎn)組(n=22)自然流產(chǎn)組(n=20)t值P值13.6±1.111.0±1.010.26<0.0527.3±1.113.7±1.053.69<0.059.6±1.26.7±1.010.82<0.05

2.3 Jagged-1陽(yáng)性細(xì)胞和Jagged-2陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)水平

CD56+NK細(xì)胞和絨毛組織中的Jagged-1陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)水平、Jagged-2陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)水平均呈現(xiàn)明顯正相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（r=0.91,0.95，P<0.05）。

3 討論

胚胎與母體之間接觸的界面稱為母胎界面，它包含了胎兒滋養(yǎng)層和母體子宮蛻膜。由當(dāng)蛻膜化誘導(dǎo)因子對(duì)子宮的內(nèi)膜間質(zhì)刺激時(shí)導(dǎo)致增殖分化從而形成了異質(zhì)性組織，這種組織叫做脫膜組織。脫膜組織由多種細(xì)胞組成[2]。胚胎及其附屬物的主要營(yíng)養(yǎng)來(lái)源是蛻膜，其不僅具有很好的營(yíng)養(yǎng)作用，同時(shí)也是一種局部的免疫器官，對(duì)于妊娠有著重要的作用。免疫細(xì)胞的入侵和蛻膜化是妊娠早期的主要過(guò)程，蛻膜中的B淋巴細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的在早期妊娠中的數(shù)有所減少，大約占蛻膜組織中20%左右的免疫細(xì)胞，子宮蛻膜自然殺傷細(xì)胞占子宮淋巴細(xì)胞的70%，主要分布在受精卵著床部位的周圍。Notch信號(hào)通路主要包括Notch受體、Notch配體、CSL DNA結(jié)合蛋白，其中Notch受體在T細(xì)胞、B細(xì)胞、干細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等多種細(xì)胞表面分布，其包括五種配體，主要是 Jagged-1、Jagged-2、Delta-like1、Delta-like3、Delta-like4.Jagged-1在胎盤、心臟、肺、腎均有廣泛的表達(dá)，其主要是對(duì)組織發(fā)育進(jìn)行調(diào)控，對(duì)造血前體細(xì)胞發(fā)育有效的維持，并且參與增殖分化[3]。有研究表明[4]，Notch信號(hào)在人胎盤中有重要的調(diào)節(jié)作用，Notch信號(hào)和配體Jagged-1參與了血管的塑性和穩(wěn)定。Jagged-1通過(guò)Notch信號(hào)系統(tǒng)參與T/NK細(xì)胞的更新和發(fā)育。以往資料顯示[5]，人體侵襲性胃癌和Notch配體Jagged-1有著密切的關(guān)系。經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)Jagged-1對(duì)Notch型號(hào)途徑介導(dǎo)，從而誘發(fā)多發(fā)性骨髓瘤發(fā)生增殖。有資料顯示[6]，Jagged-2在造血干細(xì)胞上表達(dá)豐富，提高了造血祖細(xì)胞的增生能力。在正常的妊娠絨毛組織中，有四種Notch受體進(jìn)行表達(dá)，其中第一期絨毛組織中的Jagged-1表達(dá)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于在妊娠第三期的胎盤組織中的Jagged-1表達(dá)，而Jagged-2的表達(dá)和 Jagged-1正好相反，Jagged-2、Jagged-1、對(duì)妊娠成功起著顯著的重要的作用[7]。在早期妊娠中，有不同功能的NK細(xì)胞和外周血表型在蛻膜中，其主要是CD56brightCD16dim，此類因子在滋養(yǎng)層細(xì)胞和受精卵著床周圍浸潤(rùn)。資料顯示[8]，自然流產(chǎn)蛻膜中的表達(dá)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于人工流產(chǎn)蛻膜中CD56+NK細(xì)胞表達(dá)量，通過(guò)研究顯示，當(dāng)自然流CD56+NK細(xì)胞的數(shù)量下降，可以導(dǎo)致母胎界面細(xì)胞因子中的GM-CSF和TGF-β表達(dá)的降低，進(jìn)一步的對(duì)胎兒的生長(zhǎng)發(fā)育環(huán)境造成了影響，最終導(dǎo)致流產(chǎn)。Jagged-1會(huì)刺激造血祖細(xì)胞發(fā)生分化，形成NK細(xì)胞Jagged-2可以誘導(dǎo)臍帶血 CD34+細(xì)胞表達(dá) CD56brightCD16-、CD94-和CD117+NK細(xì)胞，并且表達(dá)NKG2D表達(dá)，對(duì)于K256細(xì)胞有一定的殺傷活性。綜上所述，Jagged-1、Jagged-2可能共同參與了NK細(xì)胞表型的變化，從而對(duì)妊娠結(jié)局造成影響，并且形成妊娠免疫耐受。

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