朱春紅，萬盟，李維，朱余兵

(1.海南省皮膚病醫(yī)院 藥劑科，海南 海口 570206;2.南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京醫(yī)院 藥學(xué)部，江蘇 南京 210006)

黃精多糖(polygahatous polysaccharides，PSP)是我國傳統(tǒng)藥物黃精中的重要成分，近年研究表明，PSP具有調(diào)血脂、抗缺氧損傷、抗動脈粥樣硬化等作用［1-2］。阿托伐他汀是3-羥基-3-甲基-戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑，其作用機(jī)制是抑制膽固醇的合成、降低血清低密度脂蛋白(LDL)含量及降低血清甘油三酯水平等［3-4］，臨床廣泛用于治療冠心病與血脂異常等疾病，療效確切顯著。但長期臨床研究發(fā)現(xiàn)，阿托伐他汀易引起一些不良反應(yīng)，包括橫紋肌溶解、肝腎功能損傷等［5-6］。本研究旨在觀察PSP與阿托伐他汀合用后，PSP對阿托伐他汀的藥動學(xué)參數(shù)是否有影響，為PSP的臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)主要儀器:Agilent1100高效液相色譜儀，配有二元高壓泵、自動進(jìn)樣器、溫控系統(tǒng)、紫外檢測器;TGL-16G高速臺式離心機(jī)(上海安亭儀器廠);電子天平(Mettler Toledo儀器有限公司)。

1.1.2 藥品與試劑:阿托伐他汀鈣對照品(中國食品藥品檢定研究院，99.6%，批號100590－200902);阿托伐他汀鈣片(輝瑞制藥有限公司，批號J20070061);PSP(江蘇省中醫(yī)院制劑部提供20120322);醋酸銨(天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技公司，純度≥98%，批號 20100506);乙腈為色譜純(默克公司，批號JA025730);實(shí)驗(yàn)用水為雙重蒸餾去離子水。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)動物:雄性SD大鼠16只，體質(zhì)量(240±20)g，動物許可證號:SCXK2008-0011，購自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 給藥方法:取大鼠16只，隨機(jī)分為對照組(阿托伐他汀)和試驗(yàn)組(PSP+阿托伐他汀)，每組8只。對照組每天1次按10mL/kg容積灌胃給予蒸餾水，試驗(yàn)組每天1次按400mg/kg的劑量灌胃給PSP水溶液，7d后2組大鼠禁食不禁水12 h，分別按10mg/kg的劑量一次性灌胃給予阿托伐他汀水溶液。所有大鼠分別于給藥前和給藥后5，10，20，30，45，60，80，100，120，150，180，240，360 min 從眼內(nèi)眥取血 300 μL。置肝素化試管中，4 000 r/min離心 5 min，取上層血漿 120μL，立即置－20℃冰箱保存。

1.2.2 血漿樣品處理:精密吸取100μL血漿，加入400μL乙腈，渦旋混合1 min，12 000 r/min離心5 min后，取上清液400μL，以空氣流吹干，加入流動相100μL，渦旋混合，12 000 r/min離心5 min，自動進(jìn)樣器精密吸取20μL進(jìn)樣，并記錄色譜圖。

1.2.3 色譜條件:色譜柱:Hypersil C18(150 mm×4.6 mm，5μm);流動相:乙腈－0.1 mol/L醋酸銨緩沖液(45∶55)，pH 4.0;流速:1.0mL/min;柱溫:30℃;檢測波長:270 nm;進(jìn)樣量:20μL。

1.2.5 標(biāo)準(zhǔn)溶液制備:精密稱取阿托伐他汀對照品2mg置10mL棕色容量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度為199.2μg/mL的對照品貯備液，4℃下保存待用。

1.2.6 阿托伐他汀血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:精密吸取不同體積的阿托伐他汀標(biāo)準(zhǔn)溶液適量，吹干后分別加入100μL大鼠空白血漿，渦旋混合后使其濃度分別為9.96，19.92，49.8，99.6，249，498μg/L，按1.2.3項(xiàng)下方法操作，以阿托伐他汀峰面積(Y)對阿托伐他汀濃度(X)為作線性回歸計(jì)算。

1.2.7 血漿樣品測定方法的精密度和回收率試驗(yàn):配制19.92，99.6，498μg/L 3種質(zhì)量濃度的阿托伐他汀血漿樣品，每個質(zhì)量濃度平行5份，按1.2.3項(xiàng)下進(jìn)行操作，在一天內(nèi)測定5次，記錄色譜圖，考察日內(nèi)和連續(xù)3日的變異情況，計(jì)算日內(nèi)及日間精密度。另將3種質(zhì)量濃度的峰面積，與相應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)對照品直接進(jìn)樣所得的峰面積之比求算提取回收率。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 按標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算每只大鼠各時間點(diǎn)血藥濃度并繪制藥-時曲線。采用DAS2.11藥動學(xué)統(tǒng)計(jì)軟件對其進(jìn)行自動擬合處理，得到每只動物的藥代動力學(xué)參數(shù)。正態(tài)計(jì)量數(shù)據(jù)用“±s”表示，組間采用t檢驗(yàn)進(jìn)行比較。

2 結(jié)果

2.1 專屬性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 按1.2.2項(xiàng)的方法操作，對3組血漿樣品進(jìn)行分析。目標(biāo)化合物能有效分離，并且峰形良好，無雜峰干擾，表明該方法具有較高的特異性，可以用于測定阿托伐他汀的血漿濃度，色譜圖見圖1。

圖1 血漿中阿托伐他汀色譜圖A.空白血漿組;B.空白血漿+阿托伐他汀組;C.大鼠口服阿托伐他汀后1 h的血漿組;1－阿托伐他汀Fig.1 HPLC chromatograms of atorvastatin in plasma of ratsA.blank plasma;B.blank plasma+atorvastatin;C.plasma sample at 1 hour after oral adminstration of atorvastatin;1-atorvastatin

2.2 阿托伐他汀血漿標(biāo)準(zhǔn)曲線 按1.2.2項(xiàng)下方法操作，以阿托伐他汀峰面積(Y)對阿托伐他汀濃度(X)為作線性回歸計(jì)算。得血漿中阿托伐他汀的標(biāo)準(zhǔn)曲線Y=27.18X+21.54，r=0.9998(n=6)。結(jié)果表明，阿托伐他汀血藥濃度在9.96～498 μg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3 血漿樣品測定方法的精密度和回收率試驗(yàn)結(jié)果 血漿樣品測定方法的精密度和回收率試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 精密度與回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Results of precision and recovery test

2.4 藥物濃度曲線 對照組與試驗(yàn)組的阿托伐他汀平均血藥濃度－時間曲線，結(jié)果見圖2。

圖2 阿托伐他汀與阿托伐他汀+PSP的阿托伐他汀平均血藥濃度-時間曲線(n=8)Fig.2 Mean concentration-time profiles of atorvastatin group and combination group(n=8)

2.5 藥動學(xué)參數(shù) 對照組及試驗(yàn)組血藥濃度-時間經(jīng)DAS2.11軟件處理，算出2組的主要藥動學(xué)參數(shù)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，大鼠體內(nèi)的阿托伐他汀在對照組與試驗(yàn)組的藥代動力學(xué)參數(shù)均無著性變化(見表2)。

表2 阿托伐他汀與阿托伐他汀+PSP 2組大鼠體內(nèi)阿托伐他汀藥動學(xué)參數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果(n=8)Tab.2 Statistical results of pharmacokinetic patameters of atorvastatin group and combination group in rats(n=8)

3 討論

阿托伐他汀阻斷細(xì)胞內(nèi)甲羥戊酸代謝途徑，使細(xì)胞內(nèi)膽固醇合成減少。除了具有降低血清總膽固醇(TC)、升高高密度脂蛋白膽固醇(HDL-ch)作用外，還發(fā)現(xiàn)它具有抗炎、改善血管內(nèi)皮功能、抑制血小板激活、降低血液黏度、抑制凝血、防止血栓形成及穩(wěn)定、阻止、消退粥樣斑塊等作用，廣泛用于動脈粥樣硬化、心肌梗死、心力衰竭等心臟疾病中［7-9］。“冠心平”是通過歷代文獻(xiàn)回顧和現(xiàn)代臨床觀察根據(jù)冠心病基本病機(jī)研制而成的中成藥，其藥物配伍組成在臨床應(yīng)用已有近十年。文獻(xiàn)［10-11］表明其可以調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，防治動脈粥樣硬化。從而增加冠脈血流量，減輕心肌缺血缺氧，達(dá)到治療冠心病的目的。對于“冠心平”的作用機(jī)制研究本研究室也進(jìn)行了一系列的探索［12-13］。黃精是制劑“冠心平”中的主要組成部分，同時也廣泛的存在于調(diào)血脂、治療冠心病的中成藥制劑當(dāng)中。

PSP是黃精的主要成分，在前期實(shí)驗(yàn)中，在對冠心平試驗(yàn)研究基礎(chǔ)上，開展PSP的作用機(jī)制探討，發(fā)現(xiàn)PSP具有良好的調(diào)節(jié)血脂，抗氧化損傷，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用［14-15］。目前關(guān)于其體內(nèi)代謝研究較少，而PSP對阿托伐他汀體內(nèi)藥動學(xué)的影響一直未見報道。在本研究中，采用乙腈－0.1 mol/L醋酸銨緩沖液(pH 4，45∶55)為流動相，雜質(zhì)峰對樣品峰干擾小，保留時間適宜。為了充分觀察阿托伐他汀與PSP合用后藥動學(xué)參數(shù)的變化，本實(shí)驗(yàn)PSP采用多次給藥方式，可以充分體現(xiàn)2藥長期合用的影響。結(jié)果顯示，聯(lián)用PSP后，阿托伐他汀在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)參數(shù)與單用阿托伐他汀比較均無著性變化。因此初步認(rèn)為，PSP對阿托伐他汀在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)無影響。但在人體內(nèi)的影響是否與大鼠相同，尚需要進(jìn)一步探討。

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