鄭百波

[摘要] 目的 對胸腔積液患者的胸水脫落細胞進行DNA倍體分析和癌胚抗原檢測，將兩種方法進行比較，評估其診斷價值。方法 選取經(jīng)過臨床確診的56例胸腔積液患者作為觀察組，56例良性胸腔積液患者作為對照組，對胸水脫落細胞進行DNA倍體分析和癌胚抗原檢測。結(jié)果 DNA倍體分析的特異度為80.36%，靈敏度為83.93%，Youden指數(shù)為0.7029；CEA檢測的特異度為96.43%，靈敏度為60.71%，Youden指數(shù)為0.5714，兩種診斷方法在靈敏度和特異度方面差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，P<0.01），而在Youden指數(shù)方面差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 DNA倍體分析檢測胸腔積液的靈敏度和特異度更高，如果和CEA聯(lián)用，診斷價值更高。

[關(guān)鍵詞] DNA倍體分析；癌胚抗原；胸腔積液；診斷價值

[中圖分類號] R4 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-0742（2014）07（b）-0022-02

胸腔積液是一種常見的胸膜病變，其發(fā)生原因有很多，但最主要的是結(jié)核性和惡性腫瘤[1]。對于胸腔積液的傳統(tǒng)診斷方法主要包括依據(jù)細胞學(xué)檢查、細菌學(xué)檢查以及胸膜活檢進行確認[2]。目前DNA倍體分析和癌胚抗原檢測被應(yīng)用到臨床，在診斷惡性胸腔積液方面也有較大的臨床價值[3]。該研究選取該院2011年1月—2013年1月間收治的患者112例，旨在探討采用DNA倍體分析和癌胚抗原檢測對胸腔積液患者的胸水脫落細胞進行診斷分析，以評估這兩種方法的診斷價值，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院收治的患者112例，綜合分析患者的病史、影像學(xué)資料、各項檢查結(jié)果，獲得最終的診斷結(jié)果。將已經(jīng)確診的患者隨機分成兩組，其中實驗組56例，均為惡性胸腔積液患者，男27例，女29例，年齡34～75歲，平均47歲，對照組56例，均為良性胸腔積液患者，男24例，女32例，年齡32～77歲，平均50歲，兩組一般資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 DNA倍體分析 選擇美國Becton Dick-inson公司生產(chǎn)的流式細胞儀進行檢測，DNA倍體分析試劑盒中的A液為細胞膜穿透液，B液為RNA消化酶，C液為PI染液，光源為氬離子激光器，輸出功率為15 w，波長為630 nm，保證峰的變異系數(shù)（CV）<5%，可以采用雞血紅細胞對其進行調(diào)節(jié)[4]。主要包括以下幾個步驟：①對所有患者均進行胸腔穿刺，從得到的胸水中取出50 mL進行抗凝處理。②將處理之后的胸水采用1 200轉(zhuǎn)離心5 min，留下沉淀舍棄上清液，采用生理鹽水進行洗滌和重復(fù)離心直至沉淀中出現(xiàn)紅細胞。③將紅細胞充分溶解，搖勻震蕩，并且避光靜置10 min后，采用1 200轉(zhuǎn)離心5 min，留下沉淀舍棄上清液。④采用PBS液對沉淀進行1～2次洗滌，采用1 200轉(zhuǎn)離心5 min，留下沉淀舍棄上清液，制成單細胞懸液。⑤從單細胞懸液中取出1 mL，向其中加入250 μL的A液，然后再加入200 μL的B液，在室溫條件下進行10 min的孵育。⑥然后向孵育后的單細胞懸液中加入200 μL的冷C液，放到冰箱中進行10 min的避光孵育，并將冰箱溫度調(diào)至4 ℃。⑦從冰箱中取出細胞懸液，采用300目篩網(wǎng)進行過濾，最后進行上機檢測。采用健康人外周血淋巴細胞作為正常二倍體標(biāo)準(zhǔn)對照，選擇每例患者的10 000個細胞進行測定，將結(jié)果用單參數(shù)組方圖顯示，采用Cell-Quest軟件獲取細胞信息，采用ModFitLt軟件分析實驗結(jié)果進行數(shù)據(jù)處理。將被測標(biāo)本細胞DNA含量峰均道值與對照二倍體峰值之比為記作DNA指數(shù)，即DI。若為正常人，其細胞的二倍體DI范圍是（1±0.1）；若為患者，在DI>1.1或者DI<0.9且組方圖上出現(xiàn)兩個相分離的峰時，可以判定其為異倍體，陽性[5]。

1.2.2 癌胚抗原檢測 選擇德國拜耳公司生產(chǎn)的全自動化學(xué)發(fā)光分析儀進行檢測，測定方法為化學(xué)發(fā)光免疫法，診斷標(biāo)準(zhǔn)為：癌胚抗原>10 μg/L，則為陽性[6]。

1.3 統(tǒng)計方法

采用 SPSS17.0 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理分析，定量資料根據(jù)數(shù)據(jù)的正態(tài)分布與否，對兩種診斷方法的診斷指數(shù)、特異度、陽性預(yù)測值、靈敏度和準(zhǔn)確度等進行計算，并采用U檢驗比較診斷指標(biāo)，采用χ2比較組間陽性率。

2 結(jié)果

2.1 胸水DNA倍體分析結(jié)果

在試驗組中的56例患者，有47例胸水DNA倍體檢測為陽性，9例DNA倍體檢測為陰性，陽性率為83.93%；在對照組56例中，有11例檢測為陽性，45例為陰性，陽性率為19.64%。P=0.324，兩組陽性率相比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.005，V2=32.16，V=1）。

2.2 胸水CEA檢測結(jié)果

在試驗組中56例患者，有34例為陽性，22例為陰性，陽性率為60.71%；在對照組56例中，有2例為陽性，54例為陰性，陽性率為3.57%。P=0.187，兩組陽性率相比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.005，V2=28.15，V=1）。

2.3 胸水的DNA倍體分析和癌胚抗原檢測診斷試驗評價結(jié)果

采用胸水DNA倍體分析，靈敏度=[真陽性/（真陽性+假陰性）]×100%=83.93%，特異度=[真陰性/（真陰性+假陽性）]×100%=80.36%，Youden 指數(shù)=（靈敏度+特異度）-1=0.7029；采用癌胚抗原檢測，靈敏度=[真陽性/（真陽性+假陰性）]×100%=60.71%，特異度=[真陰性/（真陰性+假陽性）]×100%=96.43%，Youden 指數(shù)=（靈敏度+特異度）-1=0.5714。由此可見，兩種診斷方法在靈敏度和特異度方面差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；Youden 指數(shù)P>0.05。endprint

3 討論

呼吸內(nèi)科常見的疾病之一就是胸膜疾病，對于胸腔積液患者，由于腫瘤細胞侵犯胸膜時癌細胞會直接在胸腔內(nèi)釋放腫瘤標(biāo)志物，如果發(fā)生異常，腫瘤標(biāo)志物已大量吸收入血，則血清內(nèi)腫瘤標(biāo)志物的水平將會明顯升高[7]，而且胸腔液含量、形成速度及患者體質(zhì)均影響患者呼吸困難的程度，若積液含量多且形成較快，則患者肺臟功能受到影響，會出現(xiàn)端坐呼吸、呼吸困難加重甚至發(fā)紺等[8]。由于以往的診斷方法具有很多缺點，所以我們現(xiàn)在多采用DNA倍體分析和癌胚抗原檢測。DNA倍體分析的主要基于如下原理：正常人體細胞含23對染色體，DNA含量穩(wěn)定，為二倍體，只有當(dāng)細胞進入分裂期時細胞DNA含量增加，但是腫瘤細胞由于異常增殖，往往使染色體發(fā)生突變，染色體的結(jié)構(gòu)和數(shù)目發(fā)生異常，常形成三倍體和亞倍體等，所以可以對細胞內(nèi)的染色體進行檢測，如果為異倍體，則提示可能出現(xiàn)腫瘤細胞，但是由于有些腫瘤細胞可能會在復(fù)制時彌補其染色體丟失的部分，造成DNA含量平衡，而且在實體腫瘤中有很多都為二倍體腫瘤，檢測過程中若非整倍體峰很小則顯示不出來，由于種種原因也會造成DNA倍體分析出現(xiàn)假陰性，所以要仔細分析，采用多種診斷方法進行準(zhǔn)確診斷。而癌胚抗原應(yīng)用也比較廣泛，它是一種大分子的糖蛋白，是腫瘤標(biāo)志物之一，在血清中含量較低，但是在癌癥患者的血清中含量則顯著增多，而且該物質(zhì)不容易進入血液循環(huán)，也不容易被代謝，特異度極高，具有較高的應(yīng)用價值。

在該研究中，DNA倍體分析的特異度達到了80.36%，綜合反應(yīng)靈敏度和特異度的Youden指數(shù)也達到0.7029，可見DNA倍體分析具有良好的診斷價值； CEA的靈敏度為60.71%，特異度為96.43%，Youden指數(shù)為0.5714。二者的靈敏度和特異度相比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05，P<0.01），但兩者的Youden指數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。由此可見，兩種診斷方法在靈敏度和特異度方面差異有統(tǒng)計學(xué)意義。綜上，采用DNA倍體分析檢測胸腔積液更加簡單、準(zhǔn)確，能夠彌補傳統(tǒng)診斷方法的不足。將大大提高診斷率，有效提高患者的生存質(zhì)量，值得臨床推廣應(yīng)用。

[參考文獻]

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[2] 姜濤.DNA倍體分析在胸腔積液診斷中應(yīng)用價值[J].中國醫(yī)師進修，2012，36（16）：28.

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[8] 鄢斌.聯(lián)合檢測血清及胸水LDH、ADA、CEA、CA153對胸水性質(zhì)的鑒別價值[J].現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2011，25（10）：1505.

（收稿日期：2014-04-13）endprint