吳麗芬　范倩　陳風(fēng)華　孫文聞　劉永玉　姬海燕　魏蔚　鞏路

【摘要】 目的：研究血清淀粉樣蛋白P（SAP）在3種常見結(jié)締組織病患者血清中含量，探討其在結(jié)締組織病發(fā)生發(fā)展中的作用及意義。方法：用ELISA方法測(cè)定正常人、系統(tǒng)性紅斑狼瘡活動(dòng)期和緩解期、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎活動(dòng)期和緩解期、初治干燥綜合征等風(fēng)濕性疾病血清中血清淀粉樣蛋白P（SAP）含量。統(tǒng)計(jì)各型患者血清中血清淀粉樣蛋白P（SAP）的表達(dá)水平及其意義。結(jié)果：SAP在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者活動(dòng)期血清中高表達(dá)，且其表達(dá)水平顯著高于緩解期和正常人，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：血清淀粉樣蛋白P（SAP）在系統(tǒng)性紅斑狼瘡活動(dòng)期高表達(dá)，可以作為系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者活動(dòng)期的診斷指標(biāo)之一。

【關(guān)鍵詞】 血清淀粉樣蛋白酶P（SAP）； 系統(tǒng)性紅斑狼瘡； 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎； 干燥綜合征； DNA

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種表現(xiàn)有多系統(tǒng)損害的慢性自身免疫病，其血清具有以抗核抗體為代表的多種自身抗體。本病病程以病情緩解和急性發(fā)作交替為特點(diǎn)，臨床表現(xiàn)為皮膚損害、關(guān)節(jié)癥狀、貧血、心血管動(dòng)脈粥樣硬化和腎臟疾病和神經(jīng)系統(tǒng)損害等癥狀，感染、狼瘡腦病和狼瘡腎炎是該病最常見的死因[1-2]。系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）、原發(fā)性干燥綜合征（PSS）是3種臨床常見的彌漫性結(jié)締組織病，免疫功能異常及T或B細(xì)胞的紊亂是其共同的發(fā)病機(jī)制，3種疾病的主要病理基礎(chǔ)分別是血管炎、滑膜炎、外分泌腺體病變，但是后兩者在合并關(guān)節(jié)外或者腺體損害時(shí)也會(huì)有血管炎的表現(xiàn)[3-4]。至今為止，3種常見結(jié)締組織病的病因不清。血清淀粉樣蛋白P（SAP）是人體內(nèi)主要DNA結(jié)合蛋白，可促進(jìn)DNA被巨噬細(xì)胞吞噬起到免疫調(diào)理作用。本論文擬研究SAP在3種主要結(jié)締組織病患者血清中含量，探討其在這些疾病發(fā)生發(fā)展中的作用及意義，為3種結(jié)締組織病的診斷和治療提供新思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2010-2013年在本院風(fēng)濕免疫科門診就診或住院治療的無(wú)慢性消耗性疾病的10例活動(dòng)期和10例緩解期SLE患者、10例初治的PSS、10例活動(dòng)期和10例緩解期RA患者的血清標(biāo)本，同時(shí)選取在本院體檢中心A套餐中體檢的抗核抗體和類風(fēng)濕因子陰性的正常人血清標(biāo)本10例，研究對(duì)象年齡均在18～65歲之間。SAP試劑盒購(gòu)自美國(guó)RB公司。ELSIA試驗(yàn)所用分光光度計(jì)由天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院感染免疫科實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) （1）據(jù)SLEDAI評(píng)分系統(tǒng)將SLE患者分為活動(dòng)期和緩解期，SLE>4分為活動(dòng)期，SLE<4分為緩解期。（2）據(jù)28個(gè)關(guān)節(jié)疾病活動(dòng)度評(píng)分（DAS28）DAS 28評(píng)分系統(tǒng)來(lái)評(píng)分：DAS 28是以28個(gè)關(guān)節(jié)計(jì)分：包括雙肩、雙肘、雙腕、雙手掌指關(guān)節(jié)、雙手近端指間關(guān)節(jié)、雙膝關(guān)節(jié)。DAS 28>5.1表示疾病活動(dòng)高；3.2

1.3 方法 用ELISA方法測(cè)定正常人、SLE、初治的PSS、RA患者血清標(biāo)本中血清淀粉樣蛋白P蛋白的含量。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書操作：實(shí)驗(yàn)前20 min從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫（20～25℃），取出所需數(shù)量的板條，其余密封放回4 ℃；加樣、溫育、洗滌、顯色、終止、測(cè)定，然后繪曲線圖。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料以（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 SLE中SAP表達(dá)水平的測(cè)定 用ELISA方法檢測(cè)顯示SLE活動(dòng)期SAP含量為（382.29±277.96）?g/L明顯高于正常人SAP的（40.32±34.09）?g/L，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；SLE患者緩解期SAP水平含量為（111.82±153.25）?g/L，亦高于正常人，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2 SAP在RA患者活動(dòng)期、緩解期和正常人體內(nèi)的表達(dá)水平測(cè)定 RA患者活動(dòng)期SAP的表達(dá)水平為（121.04±60.12）?g/L高于正常人的（40.32±34.09）?g/L，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；而緩解期的SAP表達(dá)水平為（35.54±23.43）?g/L與正常人比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.3 SAP在初治PSS患者和正常人體內(nèi)的表達(dá)水平測(cè)定 初治PSS患者SAP的表達(dá)水平為（86.83±30.12）?g/L和正常人的（40.32±34.09） ?g/L

比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

3 討論

人血清淀粉樣蛋白P物質(zhì)（SAP），與C反應(yīng)蛋白（CRP）構(gòu)成血清正五聚蛋白家族，其系統(tǒng)發(fā)生學(xué)非常保守，表明具有重要生理功能。在生理狀態(tài)（鈣濃度2 mmol/L）下，SAP在血清中由5個(gè)相同亞基非共價(jià)結(jié)合而形成為環(huán)狀五聚體，并通過(guò)相鄰單體的氨基酸殘基相互影響，從而形成功能性空間結(jié)構(gòu)，具有結(jié)合LPS、凋亡細(xì)胞小體、DNA等物質(zhì)的能力。它每個(gè)亞基分子量為25.5 kd，且血清濃度相對(duì)恒定，約為40 ?g/mL。SAP蛋白易于沉積于腎臟等器官的基底膜組織，在各種炎癥組織中分布增加，尤其是具有很強(qiáng)的與淀粉樣纖維結(jié)合的能力，因此得名為血清淀粉樣蛋白。DNA是人體結(jié)構(gòu)的核心組成部分，也是人體免疫系統(tǒng)識(shí)別的重要成分。大量研究表明，無(wú)論是外源性的核酸物質(zhì)，包括感染病原體的核酸組分，人工合成的核酸片段和模擬分子等，還是內(nèi)源性的核酸物質(zhì)包括人體自身的體液循環(huán)核酸，細(xì)胞凋亡小體內(nèi)的DNA片段等，均可以成為免疫系統(tǒng)的識(shí)別對(duì)象，并引起強(qiáng)烈的先天免疫反應(yīng)和抗原特異性免疫反應(yīng)[5]。DNA免疫識(shí)別異?？梢砸鸲喾N自身免疫性疾病[6]；而另一方面DNA作為一種免疫調(diào)節(jié)劑，在腫瘤、感染性疾病中早有應(yīng)用，而攜帶特定基因的DNA載體，又在DNA疫苗和基因治療領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用，在人體內(nèi)SAP可以促進(jìn)DNA被人巨噬細(xì)胞吞噬從而起到免疫調(diào)理作用，從而介導(dǎo)DNA清除，以減輕DNA抗原在組織的沉積和自身免疫活性，阻止自身抗體的產(chǎn)生[7-8]。現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)SAP是血清中主要的DNA結(jié)合蛋白，并具有物種差異性的DNA結(jié)合活性，可以與巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞發(fā)生相互作用并且有可能具有調(diào)理吞噬的功能，即抑制DNA的轉(zhuǎn)染非吞噬細(xì)胞，促進(jìn)DNA被巨噬細(xì)胞清除[9-11]。SAP還可以抑制巨噬細(xì)胞引起的先天免疫激活。文獻(xiàn)[12-13]報(bào)道：SAP可以顯著地抑制DNA誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞激活，表現(xiàn)為細(xì)胞因子和趨化因子分泌大大減少，而且可以抑制TLR9下游的NF-κB，RIG-I、DAI下游的IRF3轉(zhuǎn)錄因子的激活。并揭示SAP對(duì)先天免疫反應(yīng)有著負(fù)向調(diào)控的作用。

本論文研究了SAP在3種常見結(jié)締組織病患者血清中含量，探討其在3種常見結(jié)締組織病發(fā)生發(fā)展中的作用及意義。SAP是一個(gè)功能蛋白，目前為止，國(guó)內(nèi)外對(duì)該蛋白在3種常見結(jié)締組織病中的功能的研究報(bào)道很少。2003年國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道SAP在SLE活動(dòng)期的表達(dá)升高，而緩解期升高不明顯；但2004年國(guó)外文獻(xiàn)[14-15]卻報(bào)道SAP在SLE患者體內(nèi)不減少，急性期也不升高，兩者存在矛盾性，筆者通過(guò)ELISA方法驗(yàn)證在SLE活動(dòng)期SAP的表達(dá)水平是升高的，而緩解期升高不明顯，且在RA活動(dòng)期和緩解期及PSS患者體內(nèi)血清淀粉樣蛋白P表達(dá)水平與正常人比較無(wú)明顯差別。

綜上所述，SAP在SLE活動(dòng)期高表達(dá)，可以作為SLE患者活動(dòng)期的診斷指標(biāo)之一。

參考文獻(xiàn)

[1] D'Cruz D P，Khamashta M A，Hughes G R.Systemic lupus erythematosus[J].Lancet，2007，369（9561）：587-96.

[2]董菽茜，張海棠，王吉波.系統(tǒng)性紅斑狼瘡合并冠心病患者臨床指標(biāo)的觀察分析[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2013，10（9）：142-143.

[3] Tsujimura S，Saito K，Nawata M，et al.Overcoming drug resistance induced by P-glycoprotein on lymphocytes in patients with refractory rheumatoid arthritis[J].Annals of the rheumatic diseases，2008，67（3）：380-388.

[4] Fox R I，Kang H I.Pathogenesis of Sjogren's syndrome[J].Rheumatic Diseases Clinics of North America，1992，18（3）：517-538.

[5] Hornung V，Latz E.Intracellular DNA recognition[J].Nature Reviews Immunology，2010，10（2）：123-130.

[6] Takeshita F，Ishii K J.Intracellular DNA sensors in immunity[J].Current Opinion in Immunology，2008，20（4）：383-388.

[7] Gurunathan S，Klinman D M，Seder R A.DNA vaccines： immunology， application， and optimization[J].Annual Review of Immunology，2000，18（5）：927-974.

[8] Burlingame R W，Volzer M A，Harris J，et al.The effect of acute phase proteins on clearance of chromatin from the circulation of normal mice[J].J Immunol，1996，156（12）：4783-4788.

[9] Bickerstaff M C，Botto M，Hutchinson W L，et al.Serum amyloid P component controls chromatin degradation and prevents antinuclear autoimmunity[J].Nature medicine，1999，5（6）：694-697.

[10] Lu J，Marnell L L， Arjon K D，et al.Structural recognition and functional activation of FcgammaR by innate pentraxins[J].Nature，2008，456（7224）：989-992.

[11] Garlanda C，Bottazzi B，Bastone A，et al.Pentraxins at the crossroads between innate immunity， inflammation， matrix deposition， and female fertility[J].Annual Review of Immunology，2005，23（8）：337-366.

[12] Wang Y，Guo Y，Wang X，et al.Human serum amyloid P functions as a negative regulator of the innate and adaptive immune responses to DNA vaccines[J].J Immunol，2011，186（5）：2860-2870.

[13] Tian J Q，Wang Y，Lin N，et al.Active immunization with glucose-dependent insulinotropic polypeptide vaccine influences brain function and behaviour in rats[J].Scandinavian Journal of Immunology，2010，72（1）：1-7.

[14]吳瑾，熊思東.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清淀粉樣P成分的測(cè)定及其意義[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2003，7（5）：257-259.

[15] Bijl M，Bootsma H，Van Der Geld Y，et al.Serum amyloid P component levels are not decreased in patients with systemic lupus erythematosus and do not rise during an acute phase reaction[J].Annals of the Rheumatic Diseases，2004，63（7）：831-835.

（收稿日期：2014-04-29） （本文編輯：蔡元元）endprint

本論文研究了SAP在3種常見結(jié)締組織病患者血清中含量，探討其在3種常見結(jié)締組織病發(fā)生發(fā)展中的作用及意義。SAP是一個(gè)功能蛋白，目前為止，國(guó)內(nèi)外對(duì)該蛋白在3種常見結(jié)締組織病中的功能的研究報(bào)道很少。2003年國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道SAP在SLE活動(dòng)期的表達(dá)升高，而緩解期升高不明顯；但2004年國(guó)外文獻(xiàn)[14-15]卻報(bào)道SAP在SLE患者體內(nèi)不減少，急性期也不升高，兩者存在矛盾性，筆者通過(guò)ELISA方法驗(yàn)證在SLE活動(dòng)期SAP的表達(dá)水平是升高的，而緩解期升高不明顯，且在RA活動(dòng)期和緩解期及PSS患者體內(nèi)血清淀粉樣蛋白P表達(dá)水平與正常人比較無(wú)明顯差別。

綜上所述，SAP在SLE活動(dòng)期高表達(dá)，可以作為SLE患者活動(dòng)期的診斷指標(biāo)之一。

參考文獻(xiàn)

[1] D'Cruz D P，Khamashta M A，Hughes G R.Systemic lupus erythematosus[J].Lancet，2007，369（9561）：587-96.

[2]董菽茜，張海棠，王吉波.系統(tǒng)性紅斑狼瘡合并冠心病患者臨床指標(biāo)的觀察分析[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2013，10（9）：142-143.

[3] Tsujimura S，Saito K，Nawata M，et al.Overcoming drug resistance induced by P-glycoprotein on lymphocytes in patients with refractory rheumatoid arthritis[J].Annals of the rheumatic diseases，2008，67（3）：380-388.

[4] Fox R I，Kang H I.Pathogenesis of Sjogren's syndrome[J].Rheumatic Diseases Clinics of North America，1992，18（3）：517-538.

[5] Hornung V，Latz E.Intracellular DNA recognition[J].Nature Reviews Immunology，2010，10（2）：123-130.

[6] Takeshita F，Ishii K J.Intracellular DNA sensors in immunity[J].Current Opinion in Immunology，2008，20（4）：383-388.

[7] Gurunathan S，Klinman D M，Seder R A.DNA vaccines： immunology， application， and optimization[J].Annual Review of Immunology，2000，18（5）：927-974.

[8] Burlingame R W，Volzer M A，Harris J，et al.The effect of acute phase proteins on clearance of chromatin from the circulation of normal mice[J].J Immunol，1996，156（12）：4783-4788.

[9] Bickerstaff M C，Botto M，Hutchinson W L，et al.Serum amyloid P component controls chromatin degradation and prevents antinuclear autoimmunity[J].Nature medicine，1999，5（6）：694-697.

[10] Lu J，Marnell L L， Arjon K D，et al.Structural recognition and functional activation of FcgammaR by innate pentraxins[J].Nature，2008，456（7224）：989-992.

[11] Garlanda C，Bottazzi B，Bastone A，et al.Pentraxins at the crossroads between innate immunity， inflammation， matrix deposition， and female fertility[J].Annual Review of Immunology，2005，23（8）：337-366.

[12] Wang Y，Guo Y，Wang X，et al.Human serum amyloid P functions as a negative regulator of the innate and adaptive immune responses to DNA vaccines[J].J Immunol，2011，186（5）：2860-2870.

[13] Tian J Q，Wang Y，Lin N，et al.Active immunization with glucose-dependent insulinotropic polypeptide vaccine influences brain function and behaviour in rats[J].Scandinavian Journal of Immunology，2010，72（1）：1-7.

[14]吳瑾，熊思東.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清淀粉樣P成分的測(cè)定及其意義[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2003，7（5）：257-259.

[15] Bijl M，Bootsma H，Van Der Geld Y，et al.Serum amyloid P component levels are not decreased in patients with systemic lupus erythematosus and do not rise during an acute phase reaction[J].Annals of the Rheumatic Diseases，2004，63（7）：831-835.

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本論文研究了SAP在3種常見結(jié)締組織病患者血清中含量，探討其在3種常見結(jié)締組織病發(fā)生發(fā)展中的作用及意義。SAP是一個(gè)功能蛋白，目前為止，國(guó)內(nèi)外對(duì)該蛋白在3種常見結(jié)締組織病中的功能的研究報(bào)道很少。2003年國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)報(bào)道SAP在SLE活動(dòng)期的表達(dá)升高，而緩解期升高不明顯；但2004年國(guó)外文獻(xiàn)[14-15]卻報(bào)道SAP在SLE患者體內(nèi)不減少，急性期也不升高，兩者存在矛盾性，筆者通過(guò)ELISA方法驗(yàn)證在SLE活動(dòng)期SAP的表達(dá)水平是升高的，而緩解期升高不明顯，且在RA活動(dòng)期和緩解期及PSS患者體內(nèi)血清淀粉樣蛋白P表達(dá)水平與正常人比較無(wú)明顯差別。

綜上所述，SAP在SLE活動(dòng)期高表達(dá)，可以作為SLE患者活動(dòng)期的診斷指標(biāo)之一。

參考文獻(xiàn)

[1] D'Cruz D P，Khamashta M A，Hughes G R.Systemic lupus erythematosus[J].Lancet，2007，369（9561）：587-96.

[2]董菽茜，張海棠，王吉波.系統(tǒng)性紅斑狼瘡合并冠心病患者臨床指標(biāo)的觀察分析[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2013，10（9）：142-143.

[3] Tsujimura S，Saito K，Nawata M，et al.Overcoming drug resistance induced by P-glycoprotein on lymphocytes in patients with refractory rheumatoid arthritis[J].Annals of the rheumatic diseases，2008，67（3）：380-388.

[4] Fox R I，Kang H I.Pathogenesis of Sjogren's syndrome[J].Rheumatic Diseases Clinics of North America，1992，18（3）：517-538.

[5] Hornung V，Latz E.Intracellular DNA recognition[J].Nature Reviews Immunology，2010，10（2）：123-130.

[6] Takeshita F，Ishii K J.Intracellular DNA sensors in immunity[J].Current Opinion in Immunology，2008，20（4）：383-388.

[7] Gurunathan S，Klinman D M，Seder R A.DNA vaccines： immunology， application， and optimization[J].Annual Review of Immunology，2000，18（5）：927-974.

[8] Burlingame R W，Volzer M A，Harris J，et al.The effect of acute phase proteins on clearance of chromatin from the circulation of normal mice[J].J Immunol，1996，156（12）：4783-4788.

[9] Bickerstaff M C，Botto M，Hutchinson W L，et al.Serum amyloid P component controls chromatin degradation and prevents antinuclear autoimmunity[J].Nature medicine，1999，5（6）：694-697.

[10] Lu J，Marnell L L， Arjon K D，et al.Structural recognition and functional activation of FcgammaR by innate pentraxins[J].Nature，2008，456（7224）：989-992.

[11] Garlanda C，Bottazzi B，Bastone A，et al.Pentraxins at the crossroads between innate immunity， inflammation， matrix deposition， and female fertility[J].Annual Review of Immunology，2005，23（8）：337-366.

[12] Wang Y，Guo Y，Wang X，et al.Human serum amyloid P functions as a negative regulator of the innate and adaptive immune responses to DNA vaccines[J].J Immunol，2011，186（5）：2860-2870.

[13] Tian J Q，Wang Y，Lin N，et al.Active immunization with glucose-dependent insulinotropic polypeptide vaccine influences brain function and behaviour in rats[J].Scandinavian Journal of Immunology，2010，72（1）：1-7.

[14]吳瑾，熊思東.系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血清淀粉樣P成分的測(cè)定及其意義[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，2003，7（5）：257-259.

[15] Bijl M，Bootsma H，Van Der Geld Y，et al.Serum amyloid P component levels are not decreased in patients with systemic lupus erythematosus and do not rise during an acute phase reaction[J].Annals of the Rheumatic Diseases，2004，63（7）：831-835.

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