江峰　呂賽平　黃秀珍　彭曉　匡?？怠蔷虐l(fā)　王東升　黃建

【摘要】 目的：探討非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）組織表達(dá)叉頭框轉(zhuǎn)錄因子M1（FOXM1）與患者臨床特征及術(shù)后輔助化療療效的關(guān)系。方法：選取2012年5月-2013年7月本院收治的115例NSCLC患者作為研究對象，所有患者均接受肺癌完全性切除術(shù)治療。在手術(shù)過程中取腫瘤組織，并采用免疫組化法進(jìn)行FOXM1表達(dá)檢測。結(jié)果：FOXM1表達(dá)陽性組與FOXM1表達(dá)陰性組之間性別、年齡、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤細(xì)胞分化程度比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；FOXM1表達(dá)陽性組的臨床分期顯著高于FOXM1表達(dá)陰性組（P<0.05）。FOXM1表達(dá)陽性組的1年生存率顯著低于陰性組（P<0.05）。結(jié)論：NSCLC組織表達(dá)FOXM1與臨床分期有一定的關(guān)系，且與預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 非小細(xì)胞肺癌； 叉頭框轉(zhuǎn)錄因子M1； 肺癌完全性切除術(shù)； 臨床分期

術(shù)后輔助化療是提高NSCLC患者遠(yuǎn)期療效的主要手段之一，而腫瘤細(xì)胞對化療藥物的耐藥性常給術(shù)后輔助化療療效帶來一定的負(fù)性影響。目前研究認(rèn)為，多種基因參與了腫瘤細(xì)胞的耐藥機(jī)制。為提高NSCLC患者的生存率，節(jié)約醫(yī)療及社會(huì)成本，在化療之前進(jìn)行某些耐藥基因檢測是必要的，而探索相關(guān)基因亦成為NSCLC治療的重要研究方向之一[1-2]。本研究即旨在探討NSCLC組織表達(dá)FOXM1與患者臨床特征及輔助化療預(yù)后的關(guān)系，以期為臨床治療NSCLC提供新的思路，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年5月-2013年7月本院收治的115例NSCLC患者作為研究對象，其中男81例，女34例；年齡47～71歲，中位年齡62歲；病理類型鱗癌50例、腺癌43例、其他22例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移61例、無轉(zhuǎn)移54例；腫瘤細(xì)胞分化程度低分化61例、中分化37例、高分化17例；臨床分期Ⅰ期11例，Ⅱa期32例，Ⅱb期33例，Ⅲa期39例。將患者按FOXM1表達(dá)檢測結(jié)果分為FOXM1表達(dá)陽性組和FOXM1表達(dá)陰性組。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) （1）接受完全性切除術(shù)治療（2005年國際肺癌研究會(huì)分期委員會(huì)的肺癌完全性切除定義）；（2）術(shù)前經(jīng)相關(guān)檢查排除遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；（3）術(shù)后病理證實(shí)為Ⅰb～Ⅲa期NSCLC；（4）術(shù)后2個(gè)月內(nèi)開始接受輔助化療；（5）術(shù)后化療周期數(shù)≥3個(gè)。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) （1）術(shù)前曾行新輔助化療或放療；（2）行肺段切除術(shù)或楔形切除等達(dá)不到完全切除標(biāo)準(zhǔn)；（3）不能耐受輔助化療的患者；（4）輔助化療開始時(shí)間與手術(shù)時(shí)間之差>2個(gè)月的患者。

1.4 研究方法

1.4.1 FOXM1表達(dá)檢測 石蠟切片脫蠟至水→抗原修復(fù)→磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌2～3次，5 min/次→3%過氧化氫溶液對內(nèi)源性過氧化物酶進(jìn)行封閉，室溫靜置10 min→PBS洗滌2～3次，5 min/次→正常血清封閉，室溫靜置20 min，甩去多余液體→PBS洗滌2～3次，5 min/次→滴加一抗50 μL，4 ℃過夜→

37 ℃復(fù)溫45 min→PBS洗滌3次，2 min/次→滴加增強(qiáng)子→PBS洗滌3次，2 min/次→滴加酶標(biāo)二抗

50 μL，37 ℃靜置1 h→PBS洗滌3次，5 min/次→二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色5～10 min→自來水沖洗10 min→蘇木素復(fù)染2 min→梯度酒精脫水→自來水沖洗10～15 min→二甲苯透明→封片。

1.4.2 術(shù)后輔助化療及隨訪 在手術(shù)后2個(gè)月內(nèi)給予研究對象輔助化療，化療周期數(shù)≥3個(gè)，化療結(jié)束后對所有研究對象進(jìn)行隨訪，直至本研究結(jié)束。

1.5 FOXM1表達(dá)檢測結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) 每例標(biāo)本選5個(gè)高倍視野，根據(jù)細(xì)胞質(zhì)染色程度、陽性染色細(xì)胞百分比進(jìn)行評分。細(xì)胞質(zhì)染色程度評分：不著色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕褐色為3分。陽性染色細(xì)胞百分比評分：陽性細(xì)胞<1%為0分，1%～10%為1分，11%～50%為2分，>50%為3分。染色程度評分與陽性染色細(xì)胞百分比評分的乘積≥4分為FOXM1陽性表達(dá)，0～3分為FOXM1陰性表達(dá)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，組間性別、年齡、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較采用R×C表 字2檢驗(yàn)，組間腫瘤細(xì)胞分化程度、臨床分期比較采用秩和檢驗(yàn)，組間1年生存率比較采用Log rank檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NSCLC組織表達(dá)FOXM1與患者臨床特征的關(guān)系分析 FOXM1表達(dá)陽性組與FOXM1表達(dá)陰性組之間性別、年齡、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤細(xì)胞分化程度比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；FOXM1表達(dá)陽性組的臨床分期顯著高于FOXM1表達(dá)陰性組（P<0.05），見表1。

2.2 NSCLC組織表達(dá)FOXM1與術(shù)后輔助化療療效的關(guān)系分析 經(jīng)12個(gè)月隨訪，F(xiàn)OXM1表達(dá)陽性組1年生存率為83.33%（35/42），低于FOXM1表達(dá)陰性組的97.26%（71/73），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

3 討論

肺癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，世界衛(wèi)生組織2002年對世界人口調(diào)查發(fā)現(xiàn)肺癌男性發(fā)病率為42.4/10萬，死亡率為33.21/10萬，女性肺癌發(fā)病率為19.0/10萬，死亡率為13.45/10萬。目前臨床上常將肺癌分為NSCLC、小細(xì)胞肺癌（SCLC）兩大類，其中以前者最為常見。與其他絕大多數(shù)惡性腫瘤一樣，手術(shù)仍然是NSCLC最重要、最有效的治療手段，但由于早期NSCLC無典型的臨床癥狀，初診時(shí)約2/3的NSCLC患者已屬于局部晚期或發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移而喪失了根治性手術(shù)治療的機(jī)會(huì)[3]；盡管剩余1/3的NSCLC患者在初診時(shí)可以行根治性手術(shù)切除，但即使是完全切除的Ⅰ期患者，術(shù)后2年的復(fù)發(fā)率或轉(zhuǎn)移率高達(dá)40%左右[4]。因此NSCLC患者術(shù)后往往需要輔助化療，以提高其遠(yuǎn)期療效。值得注意的是，目前臨床上主要依據(jù)臨床經(jīng)驗(yàn)或指南選定術(shù)后輔助化療方案，并未參考腫瘤生物學(xué)特征、患者對化療藥物敏感性而選擇適合個(gè)體的抗癌藥物，從而使術(shù)后化療療效受到一定的影響[5-6]。因此在NSCLC患者接受術(shù)后化療之前，有必要對他們進(jìn)行某些基因的檢測，從而使NSCLC化療患者獲得最佳的療效。

FOXM1是叉頭框轉(zhuǎn)錄因子家族中一種亞型，其表達(dá)與轉(zhuǎn)錄激活需要多因子、多細(xì)胞信號通路的共同參與，并依賴于細(xì)胞周期進(jìn)程。FOXM1表達(dá)水平與正常細(xì)胞增殖、衰老及器官的形成過程密切相關(guān)，而FOXM1異常表達(dá)則通過影響基因組的穩(wěn)定性以及有絲分裂過程等促進(jìn)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移，且FOXM1在腫瘤干細(xì)胞的存在、維持干細(xì)胞多能性方面發(fā)揮重要作用，因此FOXM1表達(dá)水平將成為腫瘤診斷、評估、預(yù)后等提供一個(gè)重要指標(biāo)[7-8]。基于上述原因，F(xiàn)OXM1與惡性腫瘤的關(guān)系成為近年來的研究熱點(diǎn)之一。Chan等[9]報(bào)道FOXM1過度表達(dá)與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。Ahmad等[10]報(bào)道下調(diào)FOXM1表達(dá)可以抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲。Li等[11]報(bào)道FOXM1在胃癌血管生成、進(jìn)展過程中發(fā)揮著關(guān)鍵的作用。Wang等[12]報(bào)道下調(diào)FOXM1表達(dá)可以抑制前列腺癌細(xì)胞的生長，并誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡。

在本研究中，筆者主要探討NSCLC組織表達(dá)FOXM1與患者臨床特征及術(shù)后輔助化療療效的關(guān)系，結(jié)果顯示FOXM1表達(dá)陽性組與FOXM1表達(dá)陰性組之間性別、年齡、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤細(xì)胞分化程度相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），F(xiàn)OXM1表達(dá)陽性組的臨床分期顯著高于FOXM1表達(dá)陰性組（P<0.05）；FOXM1表達(dá)陽性組的1年生存率顯著低于對照組（P<0.05）。目前國內(nèi)外有關(guān)FOXM1與NSCLC的研究較少，現(xiàn)有的研究均認(rèn)為NSCLC組織表達(dá)FOXM1與其預(yù)后成負(fù)相關(guān)。Liu等[13]報(bào)道FOXM1表達(dá)狀況是影響NSCLC預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。Xu等[14]報(bào)道FOXM1表達(dá)在NSCLC細(xì)胞體外實(shí)驗(yàn)對吉非替尼耐藥過程中發(fā)揮著重要作用。Xu等[15]報(bào)道FOXM1表達(dá)通過促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移從而使NSCLC患者獲得更差的預(yù)后。在此需要強(qiáng)調(diào)的是，有關(guān)FOXM1表達(dá)影響NSCLC預(yù)后的確切機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

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（收稿日期：2014-05-14） （本文編輯：蔡元元）

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（收稿日期：2014-05-14） （本文編輯：蔡元元）