張曉偉，唐啟明，劉春華，肖 鋒，胡建功（.泰山醫(yī)學(xué)院，山東泰安 7000 ；.重慶市大足區(qū)人民醫(yī)院 40360）

全球范圍內(nèi)，因食管癌死亡的患者例數(shù)在惡性腫瘤患者中占第6位，且其發(fā)病率迅速增加［1］。國內(nèi)最常見的食管癌類型是食管鱗狀細(xì)胞癌（ESCC）。由于食管癌患者早期癥狀不典型，多數(shù)食管癌患者就診時(shí)已進(jìn)展至中晚期，極易因癌組織浸潤和轉(zhuǎn)移導(dǎo)致預(yù)后不良，甚至死亡。基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPS）是一組參與細(xì)胞外基質(zhì)降解和組織重構(gòu)的內(nèi)肽酶，也具有抑制細(xì)胞凋亡和刺激癌細(xì)胞浸潤的作用［2－3］。MMP－11是 MMPS家族成員之一，在基質(zhì)降解、組織重構(gòu)和腫瘤浸潤等方面具有重要作用。本研究對ESCC癌組織、癌旁組織和正常食管組織進(jìn)行了MMP－11蛋白檢測，分析了 MMP－11與ESCC的關(guān)系，旨在探討MMP－11在ESCC發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2012年11月至2013年11月接受手術(shù)治療的ESCC確診患者36例，術(shù)前未接受放化療及其他免疫治療，無其他部位腫瘤；年齡40～76歲，男20例、女16例。按照第6版TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，分為Ⅰ～Ⅱ期13例、Ⅲ～Ⅳ期23例，T1～T2期16例、T3～T4期20例，淋巴轉(zhuǎn)移21例、無淋巴轉(zhuǎn)移15例［4］。同期胃鏡下采集正常食管組織的患者9例納入本研究。

1.2 主要試劑 鼠抗人 MMP－11單克隆抗體（美國Santa Cruz公司）。即用型免疫組織化學(xué)（簡稱免疫組化）EliVisionTMsuper試劑盒（福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司），包括試劑A（放大劑）、試劑B（多聚酶結(jié)合物）。

1.3 方法 采集ESCC確診患者癌組織、癌旁組織（無腫瘤細(xì)胞浸潤）及正常食管組織標(biāo)本，經(jīng)10%甲醛溶液固定后石蠟包埋，以厚度5μm制作組織切片，用于蘇木精－伊紅（HE）染色和免疫組化檢測。操作步驟：切片脫蠟及水化，高壓修復(fù)，依次加入 MMP－11抗體（1∶50稀釋）、試劑A、試劑B、新鮮配制的二氨基聯(lián)苯胺（DAB），蘇木精復(fù)染，鹽酸酒精分化，自來水沖洗，碳酸鋰返藍(lán)，梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固，由2名病理科專家在不知標(biāo)本對應(yīng)患者臨床病理特征情況下，顯微鏡下觀察并作出判斷。以已知陽性的切片為陽性對照，磷酸鹽緩沖液（PBS）代替 MMP－11抗體作為空白對照。參照Yoshikawa等［5］方法，將胞核和（或）胞漿出現(xiàn)黃或棕黃色顆粒的細(xì)胞視為陽性細(xì)胞。陽性細(xì)胞所占比例小于5%判為陰性表達(dá)，陽性細(xì)胞所占比例大于或等于5%判為陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS18.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)。P＜0.05為比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 MMP－11蛋白在不同組織中的表達(dá)情況 MMP－11蛋白主要在胞漿中表達(dá)（見圖1）。ESCC癌組織染色結(jié)果見圖1，其 MMP－11蛋白陽性表達(dá)率為69.4%（25／36）；ESCC癌旁組織染色結(jié)果見圖2，其 MMP－11蛋白陽性表達(dá)率為25.0%（9／36）；正常食管組織染色結(jié)果見圖3，其MMP－11蛋白陽性表達(dá)率為22.2%（2／9）。癌旁組織和正常食管組織 MMP－11蛋白陽性表達(dá)率低于癌組織（P＜0.05），癌旁組織與正常食管組織MMP－11蛋白陽性表達(dá)率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

圖1 ESCC癌組織MMP－11蛋白表達(dá)檢測（免疫組化染色，×100）

圖2 ESCC癌旁組織MMP－11蛋白表達(dá)檢測（免疫組化染色，×100）

圖3 正常食管組織MMP－11蛋白表達(dá)檢測（免疫組化染色，×100）

2.2 MMP－11蛋白與ESCC的相關(guān)性 MMP－11蛋白陽性表達(dá)率與ESCC患者年齡、性別、分化程度、腫瘤直徑和位置無關(guān)（P＞0.05），但Ⅰ～Ⅱ期患者陽性表達(dá)率低于Ⅲ～Ⅳ期患者、T1～T2期患者低于T3～T4期患者、無淋巴轉(zhuǎn)移患者低于淋巴轉(zhuǎn)移患者（P＜0.05），見表1。

表1 MMP－11蛋白表達(dá)與ESCC的相關(guān)性

3 討 論

腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移涉及腫瘤細(xì)胞黏附分子減少、腫瘤細(xì)胞與基底膜黏附力增加、細(xì)胞外基質(zhì)降解等因素，其中基底膜黏附力增加和細(xì)胞外基質(zhì)降解是關(guān)鍵因素。腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致腫瘤患者預(yù)后不良的重要因素，而MMPS是引起基底膜黏附力增加和細(xì)胞外基質(zhì)降解的主要物質(zhì)之一，因此與腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。

Sharma等［6］的研究結(jié)果顯示，ESCC癌組織 MMP－11蛋白陽性表達(dá)率為78%，高于不典型增生組織及正常食管組織，且表達(dá)水平與淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)。也有研究證實(shí)MMP－11蛋白高表達(dá)與食管癌患者預(yù)后不良密切相關(guān)［7］。Zhao等［8］的研究結(jié)果顯示，胃癌組織MMP－11mRNA表達(dá)水平高于癌旁組織，且超過50%的進(jìn)展期胃癌患者高表達(dá) MMP－11。Jones等［9］對胰腺導(dǎo)管腺癌和正常胰腺組織的研究結(jié)果顯示，二者M(jìn)MP－11蛋白陽性表達(dá)率分別為69%和20%，且其表達(dá)水平與淋巴轉(zhuǎn)移相關(guān)，陽性表達(dá)患者總體生存時(shí)間明顯短于陰性表達(dá)患者。Skoglund等［10］對原發(fā)性結(jié)、直腸腺癌的研究結(jié)果顯示，其MMP－11蛋白陽性表達(dá)率為72%，且 MMP－11蛋白表達(dá)水平與腫瘤生長方式、患者性別有關(guān)，但與患者年齡、Dukes分期和分化程度無關(guān)。由此可見，消化系統(tǒng)腫瘤中普遍存在MMP－11蛋白異常表達(dá)，說明MMP－11蛋白在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中起著較為重要的作用，與癌組織的浸潤、轉(zhuǎn)移及患者的預(yù)后密切相關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，ESCC癌旁組織和正常食管MMP－11蛋白表達(dá)水平低于ESCC癌組織，且其表達(dá)水平與ESCC臨床分期、TNM分期、淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)，隨著分期的增高，表達(dá)水平升高，有淋巴轉(zhuǎn)移的患者表達(dá)水平高于無淋巴轉(zhuǎn)移的患者，提示MMP－11蛋白表達(dá)水平越高，腫瘤組織侵襲能力越強(qiáng)，患者預(yù)后越差。因此，可以通過檢測ESCC癌組織 MMP－11蛋白水平判斷患者的預(yù)后。

綜上所述，MMP－11蛋白參與了ESCC的發(fā)生、發(fā)展，與腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移有關(guān)；檢測其在ESCC癌組織中的表達(dá)水平有助于判斷疾病惡性程度，也可為臨床診治提供一定的理論依據(jù)。至于MMP－11蛋白參與腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移的機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究。

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