張俊君，成 翔，秦 龍，魏戰(zhàn)峰（陜西省咸陽(yáng)市疾病預(yù)防控制中心 712000）

手足口?。℉FMD）好發(fā)于5歲以下兒童，可由多種病原體感染所致，包括柯薩奇病毒 A組（CoxA）的16、4、5、7、9、10型，B組（CoxB）的3、7型，以及埃可病毒和腸道病毒（EV）71型（EV71）等，其中以 CoxA16和 EV71最為常見(jiàn)［1］。近年來(lái)，HFMD病原體雖然仍以CoxA16和EV71為主，但其他EV型別的檢出率有所上升。多數(shù)HFMD患者癥狀輕微，以發(fā)熱和手、足、口腔等部位的皮疹或皰疹為主要。少數(shù)患者可出現(xiàn)無(wú)菌性腦膜炎、腦炎、急性弛緩性麻痹、神經(jīng)源性肺水腫和心肌炎等。個(gè)別重癥患者則病情進(jìn)展快，最終死亡。目前，HFMD尚無(wú)特異性治療方法，也缺乏特異性的疫苗［2］。陜西省咸陽(yáng)市自2011年在陜西省HFMD防治項(xiàng)目專(zhuān)項(xiàng)資金的支持下，開(kāi)展了HFMD病原學(xué)監(jiān)測(cè)工作，以了解HFMD病原體的分布變化以及影響病原學(xué)檢測(cè)結(jié)果的因素?，F(xiàn)將咸陽(yáng)市2012年HFMD病原學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料 以縣為單位，由縣級(jí)疾病預(yù)防控制中心采集咽拭子標(biāo)本，包括常規(guī)監(jiān)測(cè)標(biāo)本、重癥病例標(biāo)本、聚集性疫情標(biāo)本、重癥密切接觸者標(biāo)本和死亡病例標(biāo)本。

1.2 儀器與試劑 四通道實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）擴(kuò)增儀（西安天隆科技有限公司）；掌式離心機(jī)（珠海黑馬醫(yī)學(xué)儀器有限公司）；微量振蕩器（常州市華普達(dá)教學(xué)儀器有限公司）；自動(dòng)核酸提取儀及配套 MagMAX－96病毒核酸抽提試劑盒（美國(guó)ABI公司）；實(shí)時(shí)熒光逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT－PCR）試劑盒（江蘇碩世生物科技有限公司、上海之江生物科技有限公司）；cDNA合成試劑盒（美國(guó)Promega公司）

1.3 方法

1.3.1 核酸提取 所有標(biāo)本采集后浸入裝有3.5mL病毒保存液的采樣管中，冷藏送至咸陽(yáng)市疾控中心綜合實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。取50μL標(biāo)本，使用自動(dòng)核酸提取儀及配套核酸抽提試劑盒提取病毒核酸。同時(shí)提取試劑盒陰性對(duì)照品和陽(yáng)性對(duì)照品核酸。

1.3.2 EV通用型、CoxA16和EV71型核酸檢測(cè) 按照HFMD預(yù)防控制指南（2009年版）附件1的要求，采用EV通用型、CoxA16和EV71型病毒基因特異性引物和Taqman探針，以及實(shí)時(shí)熒光RT－PCR試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，操作步驟嚴(yán)格參照說(shuō)明書(shū)［2］。

1.3.3 其他型別病毒核酸檢測(cè) 取4μL病毒核酸提取液，使用cDNA合成試劑盒合成cDNA，選用CoxA6和CoxA10特異性引物和VP1區(qū)通用引物，參照文獻(xiàn)［3－6］的方法，通過(guò)RTPCR擴(kuò)增、核酸序列分析進(jìn)行病毒分型。PCR反應(yīng)條件：50℃30min；94℃3min；94℃30s，51℃30s，72℃30s，循環(huán)30次；72℃8min。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Microsoft Excel 2003軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，采用SPSS12.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)。P＜0.05為比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 疫情概況 2012年咸陽(yáng)市13個(gè)縣、市、區(qū)共報(bào)告HFMD病例8 762 例，發(fā)病率約為179.03／10萬(wàn)，重癥278例，死亡13例，死亡率約為0.27／10萬(wàn)?；颊咭陨⒕觾和? 936例）和幼托兒童（1 462例）為主，占病例總數(shù)的95.85%。散居兒童占79.16%。8 762 例報(bào)告病例中，7 467 例為0～5歲兒童，占病例總數(shù)的85.22%。所有病例中，男5 460例、女3 302例，男女性別比例為1.65∶1。

2.2 總體檢測(cè)結(jié)果 2012年咸陽(yáng)市疾病預(yù)防控制中心共計(jì)檢測(cè)臨床確診HFMD病例咽拭子標(biāo)本549份，EV陽(yáng)性126份，陽(yáng)性檢出率22.95%，其中EV71陽(yáng)性77份（占61.11%）、CoxA16陽(yáng)性10份（占7.94%）、CoxA10陽(yáng)性9份（占7.14%）、其他未分型 EV 陽(yáng)性30份（占23.81%），未檢出CoxA6陽(yáng)性標(biāo)本。

2.3 不同年齡組病毒檢出情況 在所有送檢咽拭子標(biāo)本的病例中，年齡小于或等于3歲者EV陽(yáng)性檢出率為25.41%，年齡大于3歲者陽(yáng)性檢出率為19.92%，陽(yáng)性檢出率組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝2.317，P＞0.05）。兩個(gè)年齡組間不同病毒陽(yáng)性構(gòu)成比比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝1.70，P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 不同年齡組HMFD病原體陽(yáng)性構(gòu)成比

2.4 不同時(shí)期標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果 2012年咸陽(yáng)市HFMD發(fā)病出現(xiàn)2個(gè)高峰，分別在5～7月和9～10月。按照咽拭子標(biāo)本送檢時(shí)間，將549份標(biāo)本分成高峰期組452份與非高峰期組97份，高峰期組檢出EV陽(yáng)性標(biāo)本112份，陽(yáng)性檢出率24.78%，非高峰期組檢出EV陽(yáng)性標(biāo)本14例，陽(yáng)性檢出率14.43%，陽(yáng)性率比較差異有統(tǒng)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝4.834，P＜0.05）。

2.5 不同病情病例病原體檢出情況 普通病例和重癥病例EV71陽(yáng)性檢出率分別為9.30%和21.16%，比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝14.953，P＜0.05）。不同病情病例EV檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同病情病例EV檢測(cè)結(jié)果

2.6 不同試劑檢測(cè)結(jié)果 2012年，共采用2個(gè)廠(chǎng)家的試劑進(jìn)行檢測(cè)，不同試劑陽(yáng)性檢出率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝2.499，P＞0.05），見(jiàn)表3。

表3 不同試劑陽(yáng)性檢出率［n或n（%）］

3 討 論

自2008年起，衛(wèi)生部將HFMD列入法定報(bào)告管理的丙類(lèi)傳染病。咸陽(yáng)市自2011年起，開(kāi)展了HFMD的病原學(xué)監(jiān)測(cè)，為疫情監(jiān)測(cè)和報(bào)告提供了及時(shí)的實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)，疫情信息更加準(zhǔn)確。

咸陽(yáng)市2012年HFMD疫情監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，HFMD病例以0～5歲為主。在送檢咽拭子標(biāo)本的549例病例中，年齡小于或等于3歲組與年齡大于3歲組EV陽(yáng)性檢出率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且不同年齡組間不同病毒的陽(yáng)性構(gòu)成比比較差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。所有報(bào)告病例中，男性所占比例高于女性，與類(lèi)似研究報(bào)道一致［7］。2012年咸陽(yáng)市HFMD病原體構(gòu)成情況顯示，EV71陽(yáng)性構(gòu)成比高于CoxA16、Cox－A10和其他型別EV，但與2009～2011年咸陽(yáng)市HFMD流行特征相比［8］，其他EV陽(yáng)性構(gòu)成比有所升高，并且在2012年首次檢出CoxA10，說(shuō)明將CoxA6和CoxA10納入2013年HFMD監(jiān)測(cè)范圍十分必要。重癥病例EV71陽(yáng)性檢出率高于普通病例（P＜0.05），與深圳等地重癥病例的病原體檢測(cè)結(jié)果一致［9－10］。5例死亡病例中，4例為 EV71陽(yáng)性。由此可見(jiàn)，EV71陽(yáng)性HFMD病例更易發(fā)展至重癥病例或者死亡。這可能是因?yàn)镋V71神經(jīng)毒力強(qiáng)及存在高變異性，更易導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)癥狀或肺水腫、肺出血，進(jìn)而導(dǎo)致病情加重甚至死亡。對(duì)549份HFMD臨床確診病例咽拭子標(biāo)本EV陽(yáng)性檢出率為22.95%，比類(lèi)似研究報(bào)道的陽(yáng)性檢出率偏低［11］。這可能與采用的檢測(cè)方法、檢測(cè)試劑及標(biāo)本類(lèi)型等存在差異有關(guān)［12］。本文的分析結(jié)果表明：在使用同一類(lèi)型標(biāo)本、相同檢測(cè)方法和儀器時(shí)，試劑種類(lèi)對(duì)檢測(cè)結(jié)果無(wú)影響。本文的分析結(jié)果也表明：是否在發(fā)病高峰期采樣對(duì)檢測(cè)結(jié)果有影響，發(fā)病高峰期采樣標(biāo)本陽(yáng)性檢出率高于非高峰期采樣標(biāo)本（P＜0.05）。有文獻(xiàn)報(bào)道，糞便標(biāo)本與咽拭子標(biāo)本陽(yáng)性檢出率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義［13］。因此，在條件允許時(shí)，應(yīng)盡可能采集糞便或肛拭子標(biāo)本，以提高陽(yáng)性檢出率，盡早明確HFMD病原體型別，為制訂針對(duì)性的防控措施提供依據(jù)。

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