張 歆，侯丹鳳，潘 瑩，程仕彤，郭曉臨（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，沈陽 110001）

精液常規(guī)分析是評(píng)價(jià)男性生育能力的基本檢驗(yàn)項(xiàng)目，準(zhǔn)確的精液分析不僅對(duì)制訂治療方案，而且對(duì)研究精液質(zhì)量總體變化趨勢(shì)、避孕效果和毒理作用都至關(guān)重要。目前，國(guó)內(nèi)多數(shù)男科實(shí)驗(yàn)室采用計(jì)算機(jī)輔助精液分析（CASA）系統(tǒng)進(jìn)行精液檢測(cè)，但由于分析系統(tǒng)的品牌及參數(shù)設(shè)置的差異，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果存在一定的差異。與此同時(shí)，不同實(shí)驗(yàn)室間的精子計(jì)數(shù)檢測(cè)結(jié)果可比性也較差［1］。因此，精液分析的標(biāo)準(zhǔn)十分必要?！妒澜缧l(wèi)生組織人類精液分析實(shí)驗(yàn)室技術(shù)手冊(cè)（第5版）》明確指出：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板檢測(cè)是精液檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)方法［2］。本次研究旨在通過比較清華同方CASA系統(tǒng)與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板法檢測(cè)精子密度檢測(cè)結(jié)果的差異，以及不同實(shí)驗(yàn)室間檢測(cè)結(jié)果的差異，衡量CASA檢測(cè)精子密度的結(jié)果準(zhǔn)確性和一致性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2013年4～7月與本院接受精子密度檢測(cè)的男性受試者100例，年齡17～57歲；排除無精癥、血精患者。所有受試者均簽署知情同意書。

1.2 方法 受試者禁欲3～5d后采集精液標(biāo)本，并在標(biāo)本采集前排凈尿液。采集受試者一次射出的全部精液，置于潔凈、干燥的容器內(nèi)。本研究不涉及精子活性檢測(cè)，同時(shí)為了排除活精子對(duì)計(jì)數(shù)結(jié)果的影響，故在精液標(biāo)本中加入40%甲醛滅活精子，并在保證無活精子的條件下進(jìn)行精子計(jì)數(shù)。按《世界衛(wèi)生組織人類精液分析實(shí)驗(yàn)室技術(shù)手冊(cè)（第5版）》的要求進(jìn)行標(biāo)本稀釋，再分別采用CASA（由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科和沈陽市生殖醫(yī)學(xué)中心精液檢測(cè)中心同時(shí)完成）和血細(xì)胞計(jì)數(shù)板法對(duì)進(jìn)行精子計(jì)數(shù)，再將中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科CASA檢測(cè)結(jié)果和血細(xì)胞計(jì)數(shù)板法檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行相關(guān)性分析。本研究選擇的實(shí)驗(yàn)室均采用相同型號(hào)的清華同方CASA系統(tǒng)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以表示，組間比較采用配對(duì)資料非參數(shù)檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用直線相關(guān)分析；P＜0.05為比較差異或分析參數(shù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

配對(duì)資料非參數(shù)檢驗(yàn)顯示，兩種方法檢測(cè)結(jié)果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；不同實(shí)驗(yàn)室間檢測(cè)結(jié)果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。不同方法及不同實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果見表1。

表1 不同方法及不同實(shí)驗(yàn)室精子計(jì)數(shù)檢測(cè)結(jié)果（，×109／L）

表1 不同方法及不同實(shí)驗(yàn)室精子計(jì)數(shù)檢測(cè)結(jié)果（，×109／L）

方法及實(shí)驗(yàn)室 n 100 101 .52±75.56 CASA（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科） 100 104 .45±73.57 CASA（沈陽市生殖醫(yī)學(xué)中心精液檢測(cè)中心）精子密度血細(xì)胞計(jì)數(shù)板法100 101 .60±73.71

100例精液標(biāo)本中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科CASA檢測(cè)結(jié)果和血細(xì)胞計(jì)數(shù)板法檢測(cè)結(jié)果的散點(diǎn)分布大致成直線趨勢(shì)，且數(shù)量變化的方向相同，回歸方程為Y＝0.944 X＋9.229，相關(guān)系數(shù)為0.944，呈顯著正相關(guān)。

3 討 論

影響精子計(jì)數(shù)檢測(cè)結(jié)果的因素不僅包括精液標(biāo)本自身因素（如標(biāo)本完整性、精液黏稠度等），還包括檢測(cè)操作過程中的技術(shù)誤差（如計(jì)數(shù)板的差異、樣本混勻狀態(tài)、加樣精確度、操作人員熟練程度等）。然而，由于不同實(shí)驗(yàn)室的管理方式不同，導(dǎo)致精液分析標(biāo)準(zhǔn)化仍然面臨著很大的挑戰(zhàn)。美國(guó)生物分析協(xié)會(huì)（ABB）2008年的能力比對(duì)驗(yàn)證（PT）程序顯示，553家實(shí)驗(yàn)室中僅有127家（23.0%）使用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板進(jìn)行精子計(jì)數(shù)，比參考文獻(xiàn)［1］報(bào)道的數(shù)據(jù)減少了53%。CASA是目前診斷男性不育癥的主要檢查方法，因此保證CASA計(jì)數(shù)精子的準(zhǔn)確性成為實(shí)驗(yàn)室需要面臨的首要問題。CASA通過連接攝像機(jī)與顯微鏡，從而確定和跟蹤單個(gè)精子細(xì)胞的活動(dòng)，并根據(jù)設(shè)定的精子運(yùn)動(dòng)移位、精子大小和灰度、精子運(yùn)動(dòng)有關(guān)參數(shù)對(duì)采集到的圖像進(jìn)行動(dòng)態(tài)處理和分析。CASA既可定量分析精子密度、精子活力、精子活動(dòng)力，又可分析精子運(yùn)動(dòng)速度和運(yùn)動(dòng)軌跡。CASA的應(yīng)用有利于提高檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和客觀性，減少工作量，為男性不育癥和人工授精提供準(zhǔn)確的診斷依據(jù)，而有效把握各個(gè)CASA檢測(cè)環(huán)節(jié)的質(zhì)量是保證結(jié)果準(zhǔn)確的前提［3］。然而，CASA檢測(cè)易受精液中細(xì)胞成分和非精子顆粒物質(zhì)的影響。而且，CASA檢測(cè)精子密度存在一定局限性，在精子密度為（20～50）×106／mL時(shí)，檢測(cè)結(jié)果較理想，因此精子密度過高時(shí)需要進(jìn)行標(biāo)本稀釋，標(biāo)本密度過低時(shí)則需選擇多個(gè)視野進(jìn)行采樣［4］。但也有學(xué)者認(rèn)為精子密度為（5～80）×106／mL時(shí)，CASA（西班牙 MICROPTIC公司Sperm Class Analyzer精液質(zhì)量分析儀）和精液常規(guī)分析檢測(cè)精子密度和活動(dòng)力的結(jié)果具有可比性；當(dāng)精子密度小于5×106／mL時(shí)，CASA檢測(cè)結(jié)果的誤差較大，需進(jìn)行精液常規(guī)分析驗(yàn)證；當(dāng)精子密度大于80×106／mL時(shí)，采用生理鹽水稀釋精液后進(jìn)行CASA和精液常規(guī)分析，二者檢測(cè)結(jié)果具有可比性［5］。有研究采用基于CASA的Sperm Quality AnalyzerⅡB分析儀與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板法對(duì)270例日本男性不育癥患者進(jìn)行精液檢測(cè)，證實(shí)二者檢測(cè)結(jié)果具有良好的一致性［6］。國(guó)內(nèi)學(xué)者的研究顯示，在進(jìn)行精子計(jì)數(shù)檢測(cè)時(shí)，WLJY－9000型CASA系統(tǒng)（北京偉力公司）與Cell－VU計(jì)數(shù)板（美國(guó) Millennium Sciences公司）檢測(cè)結(jié)果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），認(rèn)為各實(shí)驗(yàn)室可選擇合適的手工或CASA計(jì)數(shù)法［7－8］。由此可見，即使同樣基于CASA技術(shù)，不同廠商的儀器檢測(cè)結(jié)果也不盡相同。曾有研究?jī)H以3例不同密度的精液標(biāo)本為檢測(cè)對(duì)象，比較了清華同方CASA分析儀和精液常規(guī)分析檢測(cè)結(jié)果，因此所得結(jié)論存疑［9］。本研究以100例精液標(biāo)本為檢測(cè)對(duì)象，比較了清華同方CASA分析儀與血細(xì)胞計(jì)數(shù)板法檢測(cè)精子密度的結(jié)果，證實(shí)二者檢測(cè)結(jié)果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而且二者檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.944，呈顯著正相關(guān)。因此，可以認(rèn)為CASA檢測(cè)精子密度具有較好的準(zhǔn)確性。

近年來，國(guó)家衛(wèi)生計(jì)生委和較多省市的衛(wèi)生部門均發(fā)文或試行了“醫(yī)療機(jī)構(gòu)間醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、醫(yī)學(xué)影像檢查的互認(rèn)”。就精液檢測(cè)而言，不同精子計(jì)數(shù)方法、不同計(jì)數(shù)板種類、操作的標(biāo)準(zhǔn)化程度均對(duì)精子計(jì)數(shù)檢測(cè)結(jié)果有著直接的影響。有學(xué)者比較了Cell－VU計(jì)數(shù)法、Makler計(jì)數(shù)法和血細(xì)胞計(jì)數(shù)板法精子密度檢測(cè)結(jié)果差異，認(rèn)為Cell－VU計(jì)數(shù)法明顯優(yōu)于血細(xì)胞計(jì)數(shù)板法和Makler計(jì)數(shù)法，因此推薦以Cell－VU計(jì)數(shù)法作為基礎(chǔ)建立精液分析質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)［10］。還有學(xué)者比較了Makler計(jì)數(shù)板、綜合精液分析系統(tǒng)（ISAS）和血細(xì)胞計(jì)數(shù)板法精子密度檢測(cè)結(jié)果的差異，認(rèn)為ISAS和Malker計(jì)數(shù)板能準(zhǔn)確計(jì)數(shù)精子且操作簡(jiǎn)便，是適用于精子密度檢測(cè)的較好的方法［11］。與此同時(shí)，鑒于男科實(shí)驗(yàn)室室間檢驗(yàn)?zāi)芰︱?yàn)證計(jì)劃還未被推廣，有學(xué)者建議通過以下措施獲得可靠的精液分析結(jié)果：所有實(shí)驗(yàn)室均采用普遍接受的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)和指標(biāo)；所有實(shí)驗(yàn)室均參加室間質(zhì)評(píng)計(jì)劃；所有實(shí)驗(yàn)室均執(zhí)行有效的室內(nèi)質(zhì)控和質(zhì)量保證計(jì)劃，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性；臨床醫(yī)生應(yīng)指定患者在嚴(yán)格執(zhí)行上述措施的實(shí)驗(yàn)室接受精液分析，或只認(rèn)可滿足上述要求的實(shí)驗(yàn)室所提供的精液分析結(jié)果［12］。檢驗(yàn)結(jié)果互認(rèn)的前提是采用新鮮標(biāo)本進(jìn)行不同實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果比對(duì)，并證實(shí)結(jié)果具有可比性和一致性。本研究對(duì)中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院檢驗(yàn)科和沈陽市生殖醫(yī)學(xué)中心精液檢測(cè)中心采用的同一型號(hào)CASA分析儀的精子密度檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了比較，結(jié)果證實(shí)檢測(cè)結(jié)果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說明CASA檢測(cè)精子密度具有較好的結(jié)果一致性。然而，在實(shí)際工作中仍有很多需要注意的問題，如不同實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)不同，檢測(cè)視野數(shù)選擇標(biāo)準(zhǔn)不一，檢測(cè)的精子總數(shù)不同，稀釋標(biāo)本的精子密度標(biāo)準(zhǔn)不同。此外，不同實(shí)驗(yàn)室采用的不同品牌分析系統(tǒng)相同項(xiàng)目檢測(cè)結(jié)果的比對(duì)也極為必要。

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