肖 邦，潘貴書（1.遵義醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室，貴州遵義 563003 ；2.川北醫(yī)學(xué)院生理學(xué)教研室，四川南充 637000）

海洛因作為阿片類毒品，成癮性極大，對(duì)社會(huì)造成嚴(yán)重危害。長期使用海洛因可導(dǎo)致嚴(yán)重的繼發(fā)性疾病，同時(shí)也可損傷學(xué)習(xí)記憶功能。N－甲基－D－天門冬氨酸（NMDA）受體是谷氨酸受體之一，與學(xué)習(xí)記憶功能關(guān)系密切，激活NMDA受體對(duì)學(xué)習(xí)記憶功能具有促進(jìn)作用。地卓西平馬來酸鹽（MK－801）是一種高親和力的NMDA受體非競爭性拮抗劑。本研究分析了MK－801對(duì)海洛因成癮大鼠行為學(xué)和學(xué)習(xí)記憶功能影響?，F(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)健康SD大鼠30只，雄性，體質(zhì)量220～260g，購自第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院動(dòng)物中心［許可證號(hào)SCXK－（軍）2007017 ］。SD大鼠分籠飼養(yǎng)，自由飲水、進(jìn)食。按隨機(jī)分組的原則，將30只SD大鼠分為海洛因成癮組、MK801組和對(duì)照組，每組各10只。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品 海洛因由貴州省公安廳提供。鹽酸納洛酮注射液購自美國Sigma公司。MK－801購自瑞士ALEXIS公司。

1.3 方法

1.3.1 動(dòng)物模型建立 海洛因成癮組、MK－801組大鼠按逐日遞增海洛因3mg／kg的原則處理［1］。首日每次劑量3mg／kg，每日稱重，2次／日，上午9：00、下午5：00各給藥1次。連續(xù)皮下注射9d，第9天時(shí)的每次劑量達(dá)27mg／kg。MK－801組在每次海洛因給藥前15～30min給予 MK－801（0.1mg／kg）。第10天用5mg／kg納洛酮誘發(fā)戒斷癥狀，觀察30min并記錄戒斷癥狀出現(xiàn)次數(shù)，并進(jìn)行相關(guān)評(píng)分［2－4］。確定大鼠成癮后，每天注射1次維持劑量海洛因（27mg／kg），直至實(shí)驗(yàn)停止。按海洛因成癮組給藥方式注射等容積生理鹽水建立對(duì)照組。

1.3.2 Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)包活定位航行實(shí)驗(yàn)和空間探索實(shí)驗(yàn)。定位航行實(shí)驗(yàn)歷時(shí)4d，每天上、下午定時(shí)訓(xùn)練1次，確定大鼠找到安全島的時(shí)間（逃避潛伏期）。第5天撤除安全島，進(jìn)行空間探索實(shí)驗(yàn)。將大鼠在同一入水點(diǎn)放入水中，記錄120s內(nèi)大鼠在原安全島所在象限的搜索時(shí)間及原安全島所在象限游泳距離占總距離百分比，安全島位于水池第2象限。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。劑量資料以表示，組間比較采用單方差分析或t檢驗(yàn)。P＜0.05為比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 海洛因成癮大鼠模型的建立 在納洛酮處理并戒斷后，海洛因處理大鼠出現(xiàn)明顯戒斷癥狀，表現(xiàn)為扭體、清理皮毛、站立、異常姿勢等，部分大鼠表現(xiàn)舔陰動(dòng)作、前爪顫抖和高度激惹等現(xiàn)象。經(jīng)30min觀察，各組大鼠戒斷癥狀持續(xù)時(shí)間見表1。

2.2 定位航行實(shí)驗(yàn) 各組大鼠逃避潛伏期及搜索距離比較見表2～3。各組大鼠逃避潛伏期及搜索距離均隨訓(xùn)練進(jìn)程延長呈下降趨勢。海洛因成癮組大鼠逃避潛伏期及搜索距離長于MK－801組和對(duì)照組（P＜0.05），對(duì)照組與 MK－801比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.3 空間搜索實(shí)驗(yàn) 各組大鼠空間搜索實(shí)驗(yàn)成績比較見表4。海洛因成癮組大鼠對(duì)安全島所在象限的搜索時(shí)間及安全島所在象限游泳距離占總距離百分比低于對(duì)照組和MK801組（P＜0.05），對(duì)照組與 MK－801組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 各研究組納洛酮戒斷癥狀持續(xù)時(shí)間比較（，min）

表1 各研究組納洛酮戒斷癥狀持續(xù)時(shí)間比較（，min）

注：與對(duì)照組比較，＊P＜0.05；與 MK－801組比較，▲P＜0.05。

組別 n 濕狗樣抖 伸展 清理皮毛 站立 扭體 齒顫 上瞼下垂對(duì)照組 10 0.3±0.55 0.7±0.83 1.0±1.05 0.9±0.93 0.0±0.00 0.0±0.00 0.0±0.00海洛因成癮組 10 1.6±0.44＊▲ 4.0±1.02＊▲ 5.0±0.87＊▲ 6.4±1.33＊▲ 0.2±0.44＊ 1.1±0.33＊▲ 1.1±0.33＊▲MK－801組 10 0.8±0.76 1.4±0.55＊ 2.1±1.28＊ 2.1±0.52＊0.2±0.33 0.0±0.00 0.0±0.00

表2 各組大鼠定位航行實(shí)驗(yàn)逃避潛伏期比較（，s）

表2 各組大鼠定位航行實(shí)驗(yàn)逃避潛伏期比較（，s）

注：與對(duì)照組比較，＊P＜0.05；與 MK－801組比較，▲P＜0.05。

組別 n 第1天 第2天 第3天 第4天對(duì)照組 10 58.45±7.25 39.15±6.73 24.91±3.21 8.33±3.26海洛因成癮組 10 114.67±4.28＊▲ 101.32±7.34＊▲ 91.38±8.45＊▲ 71.85±9.67＊▲MK－801組 10 55.21±8.53 37.43±6.88 26.19±3.67 10.33±1.45

表3 各組大鼠定位航行實(shí)驗(yàn)平均搜索距離比較（，cm）

表3 各組大鼠定位航行實(shí)驗(yàn)平均搜索距離比較（，cm）

注：與對(duì)照組比較，＊P＜0.05；與 MK－801組比較，▲P＜0.05。

組別 n 第1天 第2天 第3天 第4天對(duì)照組 10 1 482 .34±247.72 1 152 .11±204.32 663.53±142.31 283.65±36.26海洛因成癮組 10 2 420 .04±210.25＊▲ 2 754 .22±87.29＊▲ 1 953 .72±183.14＊▲ 1 333 .26±134.51＊▲MK－801組 10 1 564 .43±203.31 1 343 .21±192.77 682.25±153.83 302.49±69.31

表4 各組大鼠空間探索實(shí)驗(yàn)成績比較（）

表4 各組大鼠空間探索實(shí)驗(yàn)成績比較（）

注：與對(duì)照組比較，＊P＜0.05；與 MK－801組比較，▲P＜0.05。

組別 n 安全島象限搜索時(shí)間（s）安全島象限游泳距離占總距離百分比（%）10 33.12±4.23 27.89±3.21海洛因成癮組 10 18.94±3.05＊▲ 15.83±3.90＊▲MK－801組對(duì)照組10 32.70±5.22 26.63±3.71

3 討 論

長期吸食阿片類藥物可引起不同程度的學(xué)習(xí)記憶功能減退，但藥物成癮對(duì)學(xué)習(xí)記憶功能的具體影響機(jī)制尚未明確。NMDA受體在學(xué)習(xí)記憶方面具有重要作用，特別在突觸傳遞長時(shí)程增強(qiáng)（LTP）誘導(dǎo)方面非常重要，而LTP是學(xué)習(xí)記憶的神經(jīng)生物學(xué)基礎(chǔ)之一。

MK－801是NMDA受體非競爭性拮抗劑。有研究證實(shí)，聯(lián)合應(yīng)用阿片類藥物和MK－801能減緩和（或）逆轉(zhuǎn)多種動(dòng)物對(duì)阿片類藥物的耐受程度和依賴性［5－6］，但具體作用機(jī)制尚不完全清楚。本研究中，MK－801組大鼠在每次海洛因處理前30 min給予MK－801，結(jié)果顯示該組大鼠戒斷癥狀與海洛因成癮組大鼠相比明顯減弱，抽搐、肌肉緊張、濕狗樣抖、舔陰等戒斷癥狀明顯減弱。

Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)適用于評(píng)估學(xué)習(xí)記憶功能的行為學(xué)方法［7］。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)主要用于評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的空間位置感覺和方向感覺的學(xué)習(xí)記憶能力。其原理是強(qiáng)迫實(shí)驗(yàn)動(dòng)物游泳，同時(shí)學(xué)習(xí)在水中尋找安全島，通過分析其尋找安全島所用時(shí)間和所走路徑，從而對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶功能進(jìn)行評(píng)價(jià)。本研究中的Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，海洛因成癮組大鼠與對(duì)照組、MK－801組大鼠相比，逃避潛伏期明顯延長，安全島搜索距離明顯增加，說明海洛因成癮組大鼠學(xué)習(xí)記憶功能已經(jīng)受損。對(duì)照組與MK－801組大鼠相比，Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)的各項(xiàng)數(shù)據(jù)比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說明 MK－801可減輕或抑制海洛因成癮對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶功能的損傷。MK－801的作用機(jī)制可能是海洛因激活NMDA受體，增強(qiáng)其活性，而MK－801可阻斷其活性，抑制與其相關(guān)的神經(jīng)可塑性變化，或是抑制海洛因等阿片類藥物的神經(jīng)敏化作用。其具體作用機(jī)制尚有待更深一步的研究。

［1］潘貴書，徐國強(qiáng)，李淑芳，等.海洛因成癮大鼠模型的建立［J］.貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1997，22（增刊）：46－47.

［2］張開鎬.藥物依賴性的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法（一）［J］.中國藥物依賴性雜志，1999，8（1）：23－26.

［3］Maldonado R，Negus S，Koob GF.Precipitation of morphine withdrawal syndrome in rats by administration of mu delta and kappa selective opioid antagonists［J］.Neuropharmacol，1992，26（12）：1231－1233.

［4］Wei E，Loh HH，Way EL.Quantitative aspects of precipitated abstinence in morphine dependent rats［J］.J Pharmacol Exp Ther，1973，184（2）：398－403.

［5］Gerasimov MR，Ashby CR，Gardner EL，et al.Gamma－vinyl GABA inhibits methamphetamine，heroin，or ethanolinduced increases in nucleus accumbens dopamine［J］.Synapse，1999，34（1）：11－19.

［6］Elliott K，Minami N，Kolesnikov YA，et al.The NMDA receptor antagonists，LY274614 and MK801，and the nitric oxide synthase inhibitor，NG－nitro－L－arginine，attenuate analgesic tolerance to the mu－opidid morphine but not to kappa opioids［J］.Pain，1994，56（1）：69－75.

［7］Morris RGM，Garrud P，Rawlins HNP，et al.Place navigation impaired in rats with hippocampal lesions［J］.Nature，1982，297（5868）：681－683.