崔娟娟 陸慶革 王愛(ài)磊

（河北聯(lián)合大學(xué)附屬唐山市中醫(yī)醫(yī)院 河北唐山 064200）

結(jié)直腸癌（Colorectal carcinoma CRC）是常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤之一，對(duì)CRC病情進(jìn)行正確評(píng)估進(jìn)而指導(dǎo)臨床治療從而提高患者的預(yù)后有重要的臨床意義。結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展經(jīng)過(guò)研究被認(rèn)為是多基因、多因素共同作用的結(jié)果，其過(guò)程復(fù)雜。目前認(rèn)為結(jié)直腸癌生存和預(yù)后的主要調(diào)控因素是腫瘤的生長(zhǎng)分化及侵襲轉(zhuǎn)移。p53作為一種重要的抑癌基因，其缺失與突變是導(dǎo)致多種腫瘤發(fā)生的原因；nm23是腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，表達(dá)水平與腫瘤的轉(zhuǎn)移相關(guān)。本研究中研究CRC p53、nm23蛋白在不同臨床病理學(xué)參數(shù)中的表達(dá)特點(diǎn)及相互關(guān)系，來(lái)判斷腫瘤惡性程度，進(jìn)行預(yù)后評(píng)估并用于指導(dǎo)進(jìn)一步治療。

1 資料和方法

1.1 一般資料 選取2007年12月至2013年11月于我院肛腸科行手術(shù)并且臨床資料完整的196例結(jié)直腸癌病例，所有患者術(shù)前均未進(jìn)行過(guò)任何形式抗腫瘤治療。年齡最大81歲，最小34歲，平均（60.62±8.14）歲，中位年齡61歲；女124例，男72例；低分化62例，中分化78例，高分化56例；腺癌182例，黏液腺癌14例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移81例，無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移115例。

1.2 方法 標(biāo)本以10%甲醛固定、取材、石蠟包埋，連續(xù)4um厚度切片，采用免疫組化鏈霉菌抗生物素蛋白－過(guò)氧化物酶連結(jié)（Streptavidin－peroxi－dase SP）法，試劑購(gòu)買(mǎi)于福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司，Ⅰ抗為鼠抗人單克隆抗體，采用SP超敏免疫組化試劑盒，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作。石蠟切片，常規(guī)脫蠟水化，微波高壓酶行抗原修復(fù)，DBA顯色，復(fù)染、脫水、透明、封片。在顯微鏡下觀察，已知陽(yáng)性片做陽(yáng)性對(duì)照，磷酸鹽緩沖液代替行陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定 遵循雙盲原則，兩名病理科副主任醫(yī)師閱片，每例選取2張切片進(jìn)行觀察。p53陽(yáng)性定位于腫瘤細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒狀。nm23陽(yáng)性定位于腫瘤細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)，呈棕色。隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野，每個(gè)高倍視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，取表達(dá)的細(xì)胞數(shù)的平均值為陽(yáng)性數(shù)。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占比例＜5%為（－）；6%～10%為（＋－）；11%～25%為（＋）；26%～50%為（＋＋）；51%～75%為（＋＋＋）；＞76%為（＋＋＋＋）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0軟件包對(duì)計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；分類(lèi)變量關(guān)聯(lián)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 p53及nm23的表達(dá)情況 見(jiàn)表1、表2。

2.2 p53和nm23表達(dá)的相關(guān)性其spearman相關(guān)系數(shù)r＝－0.314，P＝0.000，二者表達(dá)指數(shù)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。

表1 結(jié)直腸癌中p53蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

表2 結(jié)直腸癌nm23蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

3 討 論

結(jié)直腸癌發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)，研究出具有較高準(zhǔn)確性的檢測(cè)方法及指標(biāo)來(lái)早期發(fā)現(xiàn)、科學(xué)評(píng)估腫瘤狀況、合理有效干預(yù)治療，達(dá)到減少腫瘤發(fā)生率、降低死亡率、延長(zhǎng)生存時(shí)間、提高生活質(zhì)量，是醫(yī)學(xué)科學(xué)工作者們的努力目標(biāo)。

p53基因是人體的抑癌基因之一，p53蛋白主要集中于核仁區(qū)。通過(guò)免疫組化方法檢測(cè)的是突變型p53蛋白的表達(dá)情況，即表明p53基因發(fā)生突變［1］。本研究中，p53的陽(yáng)性表達(dá)者為152例，陽(yáng)性率為76.0%，表達(dá)情況與性別、年齡、腫瘤部位無(wú)關(guān)；與腫瘤分化程度之間的差異性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，分化程度越高p53蛋白表達(dá)的強(qiáng)度越低；與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的差異性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的p53的表達(dá)強(qiáng)度要高于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。有文獻(xiàn)報(bào)道稱(chēng)p53在直腸癌中的過(guò)表達(dá)率明顯高于結(jié)腸癌，這可能與致癌物質(zhì)在遠(yuǎn)端腸管濃度增大、接觸時(shí)間長(zhǎng)有關(guān)，使腸黏膜中p53發(fā)生突變的概率增大［2、3］。但p53過(guò)度表達(dá)與腫瘤的分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)已得到證實(shí)，可認(rèn)為腫瘤組織中p53蛋白過(guò)度表達(dá)證明腫瘤有較強(qiáng)的侵襲力和轉(zhuǎn)移力，提示預(yù)后不佳。另外p53表達(dá)與放療敏感性顯著相關(guān)，被稱(chēng)為輻射敏感相關(guān)基因，它在調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞對(duì)細(xì)胞毒物質(zhì)（如放化療等）反應(yīng)中發(fā)揮著重要作用［4～6］。因此，檢測(cè)p53蛋白，可作為判斷結(jié)直腸癌嚴(yán)重度、預(yù)后及指導(dǎo)治療的一個(gè)重要指標(biāo)。

nm23，腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因之一，主要作用是抑制腫瘤轉(zhuǎn)移，其機(jī)制尚未完全清楚。有研究發(fā)現(xiàn)［7、8］nm23蛋白有與二磷酸核苷激酶（NDPK）相同的氨基酸序列和NDPK活性，因此認(rèn)為nm23抑制轉(zhuǎn)移能力可能與發(fā)揮NDPK樣功能有關(guān)。它能使GDP還原為GTP，而GTP有調(diào)節(jié)細(xì)胞膜蛋白的功能，參與跨膜信息的傳遞。另外，nm23還參與微管的聚合和分解，影響細(xì)胞骨架狀態(tài)，通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)微管系統(tǒng)的狀態(tài)和阻斷腫瘤信息的傳遞而抑制腫瘤的轉(zhuǎn)移［9］。本研究中nm23的陽(yáng)性表達(dá)者為158例，陽(yáng)性率為80.61%，其表達(dá)與性別、年齡、腫瘤位置差異性無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與腫瘤分化程度之間的差異性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，分化程度越高nm23蛋白表達(dá)的強(qiáng)度越高；與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的差異性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的nm23的表達(dá)強(qiáng)度低于未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。有文獻(xiàn)報(bào)道稱(chēng)，nm23基因的表達(dá)與腫瘤分化程度無(wú)關(guān)，但與腫瘤浸潤(rùn)深度和淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［10］。本研究與文獻(xiàn)報(bào)道相符。nm23可以作為判斷腫瘤有無(wú)轉(zhuǎn)移的一個(gè)重要指標(biāo)。

綜上所述，結(jié)直腸癌中p53和nm23表達(dá)上調(diào)，與結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。兩者在結(jié)直腸癌中的陽(yáng)性表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，p53高表達(dá)而nm23低表達(dá)的患者淋巴轉(zhuǎn)移率高，腫瘤分化程度低，提示預(yù)后不良。聯(lián)合檢測(cè)結(jié)直腸癌組織p53、nm23蛋白情況可幫助判斷腫瘤的嚴(yán)重程度、有效評(píng)價(jià)預(yù)后并輔助術(shù)后的基因靶向治療。

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