王桂華 施 真 孫秀梅 王月華 孫 輝 杜冠華 馬春蕾

(濱州醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院生理學(xué)教研室，山東 煙臺(tái) 264003)

中藥注射液藥效迅速，適用搶救危重病癥，可皮內(nèi)，肌肉，靜脈等給藥，是中醫(yī)治療急癥也是中藥劑型發(fā)展的一個(gè)方向。但在中藥不良反應(yīng)統(tǒng)計(jì)中，注射液引起的不良反應(yīng)個(gè)案最多。中藥注射液的不良反應(yīng)常累及多系統(tǒng)、多器官，中藥注射液不良反應(yīng)的不可預(yù)知性，差異性以及中藥注射液成分復(fù)雜，其有效成分和結(jié)構(gòu)不完全明確給臨床中藥注射液安全合理的應(yīng)用帶來(lái)困難。在臨床實(shí)踐中，由于種種原因，中藥中毒的事件時(shí)有發(fā)生，為能更好地防止中藥中毒事件的發(fā)生，加強(qiáng)中藥注射液不良反應(yīng)的中藥基礎(chǔ)研究是十分重要和必要的〔1，2〕。本實(shí)驗(yàn)對(duì)臨床廣泛應(yīng)用的42種中藥注射液的心臟毒性作用進(jìn)行了初步的篩查，本文旨在觀察臨床中常用于心腦血管疾病治療的3種活血化淤類中藥注射液(冠心寧注射液、葛根素注射液、燈盞花素注射液)對(duì)麻醉大鼠心臟的影響，以了解其是否存在心臟的毒性作用及其作用的規(guī)律。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF級(jí)健康Wistar大鼠雄性64只，體質(zhì)量280～350 g，購(gòu)于山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供〔許可證號(hào)SCXK(魯20090001)〕。

1.2實(shí)驗(yàn)儀器和試劑 BL-420F生物信號(hào)采集系統(tǒng)和分析軟件，由成都泰盟科技有限公司提供。冠心寧注射液，河北神威藥業(yè)有限公司提供，規(guī)格：(國(guó)藥準(zhǔn)字Z13020779)；葛根素注射液由山東華信制藥集團(tuán)股份有限公司提供，規(guī)格：100 mg/2 ml,人臨床用藥劑量：200～400 mg/次(國(guó)藥準(zhǔn)字H20055928)；燈盞花素注射液，由山西銀湖制藥有限公司提供，規(guī)格：20 mg/5 ml，人臨床用量：10～20 mg/次(國(guó)藥準(zhǔn)字Z14021942)；戊巴比妥鈉，由上海新亞藥業(yè)有限公司提供(國(guó)藥準(zhǔn)字H31021724)，分析純。

1.3實(shí)驗(yàn)方案 每種中藥注射液設(shè)2個(gè)處理組(給藥劑量是參照3種藥物臨床用藥量，正常劑量為臨床常用劑量的6倍，10倍正常劑量為臨床用藥量的60倍)，分別為相當(dāng)于正常劑量組、10倍正常劑量組。中藥注射液均經(jīng)腹腔注射給予，給藥容量均調(diào)整到正常劑量組為0.2 ml/100 g，10倍正常劑量組2 ml/100 g。生理鹽水組處理過(guò)程同給藥組，腹腔注射等量的生理鹽水。64只大鼠隨機(jī)分為4組，每組16只，分別為生理鹽水組、冠心寧組、葛根素組和燈盞花素組(每組分為兩個(gè)劑量組即正常劑量組、10倍正常劑量組，每組8只)。大鼠稱重后，2%戊巴比妥鈉麻醉大鼠，仰臥固定，將5號(hào)金屬注射器針頭刺入左右前肢及左后肢皮下，BL-420F生物信號(hào)采集系統(tǒng)專用心電圖(ECG)導(dǎo)聯(lián)線的鱷魚(yú)夾與注射器針頭連接并作屏蔽處理，測(cè)量標(biāo)準(zhǔn)肢體Ⅱ?qū)?lián)ECG，記錄5 min后，腹腔注射給藥，同時(shí)連續(xù)記錄30 min的ECG變化。觀察比較給藥前后心率及ECG參數(shù)的變化。

1.4觀察指標(biāo) 分別計(jì)算第5、10、15、20、25、30 min各時(shí)間段平均心率，觀察給藥前后不同時(shí)相心率的變化；觀察并計(jì)算給藥后第10～20 min R波、ST段、T波幅度(mV)改變及室早發(fā)生有無(wú)，并比較ECG變化的差異。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 運(yùn)用SPSS11.0軟件進(jìn)行T檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1各組大鼠給藥前后心率變化趨勢(shì)比較 如圖1(A、C、E、G)所示：正常劑量各組心率隨著時(shí)間進(jìn)程呈逐漸減慢的趨勢(shì)，其中生理鹽水組、冠心寧組和燈盞花素組各時(shí)間點(diǎn)的心率與給藥前比較無(wú)顯著差異(P>0.05)；葛根素組于給藥后第25、30分鐘心率較給藥前降低明顯，差異顯著(P值分別為0.019、0.025)。如圖 1(B、D、F、H)所示：10倍正常劑量各組心率變化較正常劑量組更加明顯，尤其于給藥后第10～25分鐘變化較明顯，其中生理鹽水10倍正常劑量組大鼠各時(shí)間點(diǎn)的心率于給藥后第10分鐘開(kāi)始加快，第15分鐘明顯加快，與給藥前比較，差異顯著(P=0.001)，給藥后第20分鐘回降至近給藥前水平；冠心寧組大鼠各時(shí)間點(diǎn)的心率于給藥后第5分鐘開(kāi)始下降，第10、15、20、25、30分鐘明顯下降，與給藥前比較，差異顯著(P值分別為0.042、0.008、0.000、0.001、0.004)；葛根素組大鼠各時(shí)間點(diǎn)的心率于給藥后第5 min開(kāi)始略有下降，第10、15、20、25、30分鐘明顯下降，與給藥前比較，差異顯著(P值分別為0.001、0.001、0.002、0.002、0.003)；燈盞花素組大鼠各時(shí)間點(diǎn)的心率于給藥前后未見(jiàn)明顯變化。

2.2各組大鼠給藥后30 min內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)心率變化率的比較 表1、表2可見(jiàn)生理鹽水正常劑量組△HR%隨時(shí)間逐漸減小；生理鹽水10倍正常劑量組大鼠△HR%升高，與同時(shí)間點(diǎn)生理鹽水正常劑量組比較，給藥后第10、15分鐘明顯升高(P=0.009，P=0.000)。冠心寧正常劑量組大鼠各時(shí)間點(diǎn)△HR%于給藥后第10、15分鐘減小程度較同時(shí)間點(diǎn)生理鹽水正常劑量組小(P=0.005，P=0.000)；冠心寧10倍正常劑量組大鼠各時(shí)間點(diǎn)△HR%于給藥后第15、20、25、30分鐘減小明顯，與同時(shí)間點(diǎn)生理鹽水10倍正常劑量組比較(P值分別均為0.000)；冠心寧10倍正常劑量組大鼠各時(shí)間點(diǎn)△HR%與冠心寧正常劑量組同時(shí)間點(diǎn)△HR%比較，給藥后第15、20、30分鐘均明顯減小(P值分別為0.001、0.000、0.000)。葛根素正常劑量組大鼠各時(shí)間點(diǎn)△HR%于給藥后第5分鐘較生理鹽水正常劑量組增大(P=0.001)，第10分鐘減小的程度小于生理鹽水正常劑量組(P=0.034)，第25、30分鐘減小程度較同時(shí)間點(diǎn)生理鹽水正常劑量明顯增大(P=0.011，P=0.023)(圖2E)；葛根素10倍正常劑量組大鼠各時(shí)間點(diǎn)△HR%與生理鹽水10倍正常劑量組同時(shí)間點(diǎn)比較，給藥后第10、15、30分鐘均明顯減小(P值分別為0.031、0.006、0.005)；葛根素10倍正常劑量組大鼠各時(shí)間點(diǎn)△HR%與葛根素正常劑量組同時(shí)間點(diǎn)比較，給藥后第5、 10、15分鐘明顯降低(P值分別為0.000、0.002、0.033)。燈盞花素正常劑量組大鼠各時(shí)間點(diǎn)△HR%與生理鹽水正常劑量組同時(shí)間點(diǎn)比較，于給藥后第5、10分鐘升高明顯(P值均為0.000)；燈盞花素10倍正常劑量組各時(shí)間點(diǎn)△HR%與生理鹽水10倍正常劑量組同時(shí)間點(diǎn)比較，給藥后第5、10、15、20分鐘均明顯降低(P值分別為0.001、0.000、0.000、0.001)；燈盞花素10倍正常劑量組大鼠各時(shí)間點(diǎn)△HR%與燈盞花素正常劑量組同時(shí)間點(diǎn)比較，于給藥后第5、10分鐘減小明顯(P=0.002，P=0.000)。

2.3各組大鼠于給藥后第10～20分鐘心電圖R波及ST-T改變 給藥后，各組正常劑量心電圖R波及ST-T與給藥前比較，除葛根素組外(T波升高，P=0.017)，其余各組大鼠未見(jiàn)明顯的改變。各組大鼠10倍正常劑量均發(fā)生了不同程度R波及ST-T改變：與給藥前比較，冠心寧組心電圖R波升高、ST段上移和T波升高(P=0.013)；與給藥前比較，葛根素組心電圖ST段上移和T波升高(分別為P=0.047，P=0.017)，而R波無(wú)顯著變化(P=0.606)；與給藥前比較，燈盞花素組心電圖ST段上移(P=0.025)，而R波和T波無(wú)顯著變化(見(jiàn)表3、表4)?？梢?jiàn)10倍正常劑量各組大鼠心電圖ST-T改變較正常劑量改變程度大，存在一定得劑量依賴關(guān)系。

2.4各組大鼠給藥后第10～20分鐘時(shí)R波、ST段和T波的變化率的比較 見(jiàn)表5。與等量生理鹽水組比較，各藥物組正常劑量△ST%均有不同程度的改變(冠心寧組和燈盞花素組降低，葛根素組升高)(P值分別為0.036、0.000、0.016)；冠心寧組和燈盞花素組△R%，較等量生理鹽水組升高明顯(P=0.018，P=0.013)，而葛根素組無(wú)明顯改變(P=0.033)；各藥物組正常劑量△T%與等量生理鹽水組比較，均無(wú)明顯變化(P值依次為0.38、0.065、0.157)。各組大鼠10倍正常劑量組△R%、△ST%和△T%比較結(jié)果如下：與等量生理鹽水組比較，各藥物組10倍正常劑量△ST%均有不同程度改變均升高)(P值依次為0.012、0.000、0.011)；冠心寧組和葛根素組△T%均明顯增大(P值依次為0.002、0.000)，而燈盞花素組△T%變化不大，與等量生理鹽水組比較，無(wú)顯著差異(P=0.577)；葛根素組和燈盞花素組△R%均無(wú)明顯變化，與等量生理鹽水組比較，無(wú)顯著差異(P值依次為0.898、0.371)，而冠心寧組△R%升高，與等量生理鹽水組比較，差異顯著(P=0.015)。各藥物組10倍正常劑量與正常劑量比較： 冠心寧10倍正常劑量組△ST%和△T%較正常劑量組升高明顯(P值分別為0.000、0.006)；葛根素10倍正常劑量組△R%、△ST%和△T%較正常劑量組均無(wú)明顯變化(P值分別為0.228、0.497、0.79)；燈盞花素10倍正常劑量組△ST%較正常劑量組升高明顯(P=0.000)，而△R%和△T%與正常劑量組比較，無(wú)顯著差異(P值分別為0.058、0.128)。

2.5各組大鼠正常劑量ECG異常變化 見(jiàn)圖2。生理鹽水組未見(jiàn)室早和異常P波，T波升高1例；冠心寧組偶發(fā)單個(gè)室早，于給藥后約8 min出現(xiàn)，未見(jiàn)異常P波，T波升高2例；葛根素組未見(jiàn)室早， P波倒置1例和P波減小1例，于給藥后約第9分鐘P波倒置，持續(xù)約2 min后恢復(fù)(圖2葛根素組A)， 反復(fù)多次出現(xiàn)，T波升高3例，多見(jiàn)給藥后第10～20分鐘升高明顯(圖2葛根素組A)；燈盞花素組未見(jiàn)室早,于給藥后約8 min出現(xiàn)ST段降低2例，持續(xù)約10 min后ECG恢復(fù)給藥前水平，T波明顯升高1例。

2.6各組大鼠10倍正常劑量ECG異常變化 見(jiàn)圖3。生理鹽水組未見(jiàn)室早和異常P波，T波升高1例；冠心寧組未見(jiàn)室早和P波異常， T波升高6例于給藥后約第15分鐘明顯升高，持續(xù)到記錄結(jié)束，心率明顯減慢；葛根素組偶發(fā)單個(gè)室早2例，均于給藥后約1 min左右出現(xiàn)，偶發(fā)，持續(xù)約30～40 s恢復(fù)， P波倒置3例和P波減小消失1例，間斷多發(fā)，于給藥后約第15分鐘出現(xiàn)，持續(xù)約2 min后恢復(fù)，T波明顯升高7例，多見(jiàn)給藥后約第10～20分鐘升高明顯；燈盞花素組偶發(fā)單個(gè)室早2例，均于給藥后約1 min左右出現(xiàn)，持續(xù)約30～40 s恢復(fù)，T波明顯升高1例。

圖1 各組大鼠給藥前后心率變化趨勢(shì)比較

生理鹽水組圖②顯示給藥后15 min ECG ；葛根素組A 圖②給藥后9 min ECG P波倒置；葛根素組B圖②給藥后14 min ECG T波升高；冠心寧組圖②給藥后8 min ECG偶發(fā)單個(gè)室早，T波升高 ；燈盞花素組圖②給藥后8 min ECG ST段降低，T波略有升高

生理鹽水組圖②給藥后12 min ECG ；葛根素組A 圖②給藥后9 min ECG P波倒置，ST段降低；葛根素組B圖②給藥后14 min ECG P波倒置，T波升高，心率明顯減慢；燈盞花素組圖②給藥后1 min ECG 頻發(fā)室早；冠心寧組圖②給藥后15 min ECG T波升高，心率明顯減慢

組別5 min10 min15 min20 min25 min30 min生理鹽水組-3.524±0.422-5.671±0.781-5.984±0.88-7.310±2.361-8.062±1.034-10.09±1.98冠心寧組0.891±0.056-0.536±0.0432)-2.526±0.8972)-5.032±2.037-5.786±1.726-6.763±2.743葛根素組4.29±1.592)-2.463±0.0651)-8.737±3.014-10.177±2.150-14.954±3.0451)-14.06±2.1911)燈盞花素組1.045±1.0102)1.895±0.7572)0.726±0.033-1.253±0.483-3.211±0.893-1.77±0.516

表2 各組大鼠10倍正常劑量給藥后不同時(shí)間點(diǎn)心率變化率的比較±s,n=8)

表3 正常劑量各組大鼠R波和心電圖ST-T改變±s,n=8)

表4 10倍正常劑量各組大鼠R波和心電圖ST-T改變±s,n=8，mV)

表5 各組大鼠給藥后第10～20分鐘時(shí)R波、ST段和T波變化率的比較±s,n=8)

3 討 論

活血化瘀中藥注射液在血液流變學(xué)、血液黏度、抗血小板聚集、抗血栓形成、改善血管內(nèi)皮細(xì)胞功能、調(diào)節(jié)血脂等方面具有一定的作用，對(duì)治療心腦血管疾病，減少缺血性心腦血管疾病的發(fā)病率、病死率、致殘率方面具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)〔3，4〕。不合理的用藥或過(guò)量的應(yīng)用是否存在毒性作用目前備受關(guān)注和研究。本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的給藥劑量是參照3種藥物臨床用藥量，正常劑量為臨床常用劑量的6倍，10倍劑量為臨床用藥量的60倍，每種藥物分別設(shè)置2個(gè)給藥劑量即正常劑量組和10倍正常劑量組，旨在比較小劑量和大劑量對(duì)心肌是否有損傷及損傷程度的差異。ECG是心臟興奮的產(chǎn)生、傳導(dǎo)和恢復(fù)過(guò)程中生物電變化的記錄，心臟功能變化與生物電變化有著密切的關(guān)系〔5〕。

近年來(lái)，中藥注射劑的不良反應(yīng)報(bào)道越來(lái)越多〔6〕。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同活血化瘀中藥注射液所引起的ECG改變不同，同一藥物不同劑量所致ECG變化不完全一致。冠心寧注射液10倍正常劑量明顯減慢心率、R波和T波波幅升高及ST段抬高，正常劑量對(duì)ECG的影響較10倍正常劑量小，有報(bào)道冠心寧注射液致患者出現(xiàn)皮疹、瘙癢、頭痛、眩暈、惡心、嘔吐及心悸、心電圖異常改變等多器官系統(tǒng)的異常反應(yīng)〔7，8〕。葛根素注射液10倍正常劑量明顯減慢心率、ST段抬高和T波波幅升高，10倍正常劑量較正常劑量對(duì)ECG的影響大，多篇文獻(xiàn)曾報(bào)道葛根素注射液引起全身多個(gè)系統(tǒng)和器官癥狀，表現(xiàn)發(fā)熱、皮疹頭暈、頭痛、惡心嘔吐、溶血、肝功能異常、心悸、胸悶、竇房阻滯、心率下降、血液三系減少等〔9，10〕。燈盞花素注射液對(duì)心率的影響較前兩種藥物影響的程度小，正常劑量給藥后的15 min內(nèi)致心率升高，而10倍正常劑量給藥后的20 min內(nèi)心率明顯減慢，燈盞花素注射液正常劑量和10倍正常劑量對(duì)R波、T波均無(wú)顯著影響，而對(duì)ST段，正常劑量使其下降明顯，10倍正常劑量使其升高明顯。有臨床報(bào)道燈盞花素注射液有致心血管系統(tǒng)反應(yīng)臨床主要表現(xiàn)為胸悶，心慌，心悸，顏面潮紅，血壓下降等〔11〕。

實(shí)驗(yàn)中對(duì)藥物致ECG異常改變的觀察發(fā)現(xiàn)，冠心寧注射液主要使T波升高，正常劑量于給藥后8 min偶發(fā)室早1例，而10倍正常劑量則未見(jiàn)明顯異常，其機(jī)制不清，可能與動(dòng)物的個(gè)體差異有關(guān)；葛根素注射液所致ECG改變主要是P波出現(xiàn)倒置或減小消失和T波明顯升高，10倍正常劑量較正常劑量發(fā)生的例數(shù)多；燈盞花素注射液對(duì)T波無(wú)明顯異常影響，而對(duì)ST段，正常劑量使其下降明顯，10倍正常劑量則無(wú)明顯變化。另葛根素注射液和燈盞花素注射液10倍正常劑量于給藥后1 min左右均出現(xiàn)室早發(fā)生，偶發(fā)或多發(fā)，持續(xù)約1 min，ECG恢復(fù)能正常節(jié)律和波形，這可能與麻醉狀態(tài)及藥物注射時(shí)可能所致的疼痛反應(yīng)有一定的關(guān)系。

綜合3種中藥注射液對(duì)ECG的影響觀察發(fā)現(xiàn)，不同藥物所致ECG變化不同，這可能與不同藥物對(duì)心臟的損害部位及損害程度不同所致，其機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。 從劑量-效應(yīng)關(guān)系分析來(lái)看，不同藥物所致ECG的異常變化與給藥劑量在某些指標(biāo)有一定程度相關(guān)性，有些指標(biāo)未見(jiàn)明顯相關(guān)性。不同藥物所致ECG的異常變化與給藥時(shí)相的關(guān)系，3種活血化瘀中藥注射液的ECG的變化均有時(shí)相規(guī)律。冠心寧注射液于給藥后10～15 minECG變化明顯，葛根素注射液給藥后5 minECG變化明顯，燈盞花素注射液ECG改變多見(jiàn)給藥后約第3～5 min左右，2 min基本恢復(fù)正常ECG。如果只作1次斷面觀察，就不易發(fā)現(xiàn)這樣的規(guī)律，甚至?xí)牟煌瑫r(shí)間的不同表現(xiàn)作出不同的判斷。臨床觀察時(shí)ECG變化的多樣性，缺乏規(guī)律，均可能與之有關(guān)。時(shí)相的變化可能與不同藥物的作用機(jī)制有關(guān)，藥物對(duì)心臟的作用存在不同的時(shí)期〔12〕，故可在ECG上表現(xiàn)出一系列的相應(yīng)變化。此外，藥物所致ECG的變化可能還與個(gè)體差異有關(guān)，也常使藥物的作用復(fù)雜化。中藥注射液發(fā)生嚴(yán)重不良反應(yīng)，原因是多方面的。隨著中藥制劑的不斷增多，中藥制劑的安全性評(píng)價(jià)基礎(chǔ)研究和臨床觀察成為中藥發(fā)展應(yīng)用的關(guān)鍵。

因此，活血化瘀的心臟損害，及由此而致的ECG的改變，要根據(jù)藥物的種類、劑量的差異以及給藥過(guò)程中的時(shí)相變化來(lái)觀察分析，才有助于提供分析、討論、比較的基礎(chǔ)。但無(wú)論如何，在臨床處理中藥注射液應(yīng)用時(shí)應(yīng)給予心血管系統(tǒng)足夠的關(guān)注，減少和避免臨床副作用的發(fā)生。

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