王 爽 于洪泉 王瑋瑤 溫 娜 紀(jì)鵬艷 金 宏 曹志友

(吉林醫(yī)藥學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心,吉林 吉林 132013)

細(xì)胞中的主要抗氧化酶有超氧化物歧化酶( SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH)和過氧化氫酶(CAT)等〔1〕，這些酶通過氧化還原反應(yīng)將機(jī)體中過多的過氧化物轉(zhuǎn)換為毒害較低或無毒害的物質(zhì)?，F(xiàn)代中藥研究表明，很多中藥成分都具有抗氧化作用，這對抗腫瘤治療十分重要。核桃青皮是民間密方白桃湯劑中的主要成分，本實(shí)驗(yàn)擬研究核桃青皮提取物通過氧化應(yīng)激作用抑制Lewis肺癌細(xì)胞生長的作用抗制。

1 材料與方法

1.1主要試劑 DMEM培養(yǎng)基(Hyclone公司)，小牛血清和0.25%胰蛋白酶(Gibco公司)，核桃青皮粉劑(吉林醫(yī)藥學(xué)院自制)，四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)、二甲基亞砜(DMSO)和順鉑(美國Sigma公司)，GSH 、SOD 和CAT試劑盒(南京建成生物工程研究所)。

1.2Lewis肺癌細(xì)胞的培養(yǎng) 從液氮中取出凍存的小鼠Lewis肺癌細(xì)胞，37℃水浴振蕩至融解，然后將細(xì)胞接種于75 cm2培養(yǎng)瓶中，加入10 ml含10%小牛血清的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液，將其置入37℃、5%CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，隔日換液。

1.3氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測 將生長狀態(tài)良好的Lewis肺癌細(xì)胞以1×104/孔密度接種于24孔板中，培養(yǎng)過夜后加入不同濃度的核桃青皮提取物，空白對照組只加5%基礎(chǔ)培養(yǎng)基，培養(yǎng)48 h后離心取上清用于實(shí)驗(yàn)。按各試劑盒說明分別進(jìn)行測定，根據(jù)說明所給公式分別計(jì)算GSH 的含量、SOD 和CAT 的活力。

2 結(jié) 果

SHG-44細(xì)胞在核桃青皮提取物作用48 h后，各給藥組細(xì)胞培養(yǎng)上清中GSH 含量明顯升高；SOD和CAT的活力也明顯升高；與空白對照組比較，2、4 μg/L核桃青皮提取物組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，P<0.01)。見表1。

表1 核桃青皮提取物對小鼠Lewis肺癌細(xì)胞GSH含量、SOD和CAT活力的影響

3 討 論

核桃青皮含有多種化學(xué)成分，具有多種藥理學(xué)作用。研究表明，核桃屬植物含有萘醌類、黃酮類、二芳基庚烷類、萜類、有機(jī)酸類等化合物，這些化合物或多或少都具有一些抗氧化作用〔2〕。核桃青皮乙醇提取物及乙酸乙酯提取物對菜籽油都有一定的抗氧化作用，其抗氧化效果隨劑量的增加而增強(qiáng)；并且乙醇提取物與維生素C、維生素E和檸檬酸都有較明顯的協(xié)同作用，抗氧化效果均好于單獨(dú)使用〔3〕。

民間秘方白桃湯劑具有一定的抗腫瘤作用，研究表明，白桃湯劑通過上調(diào)動(dòng)物體內(nèi)腫瘤壞死因子(TNF)-α水平和降低白細(xì)胞介素(IL)-6水平，同時(shí)提高動(dòng)物的免疫功能而達(dá)到對Lewis肺癌小鼠的明顯抑瘤作用；也可以通過抑制小鼠Lewis肺癌的血管生成、生長和轉(zhuǎn)移來發(fā)揮其抗腫瘤作用〔4，5〕。在白桃湯劑方中，核桃青皮是主藥之一，在體外研究中，青核桃中的多種物質(zhì)對腫瘤細(xì)胞有誘導(dǎo)凋亡或直接殺死作用，其作用呈時(shí)間和劑量效應(yīng)〔6〕。體內(nèi)研究表明，核桃青皮水提浸膏對小鼠肉瘤180和小鼠實(shí)體型肝癌有明顯的抑制作用，抑制作用亦呈劑量依賴關(guān)系〔7〕，也可降低小鼠體內(nèi)脂質(zhì)過氧化程度〔8〕。

在此前的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，核桃青皮提取物在體內(nèi)外均可抑制腫瘤的生長〔9〕，結(jié)合本文結(jié)果認(rèn)為，這可能是藥物通過增加GSH 含量、SOD和CAT的活力，發(fā)揮抗氧化作用使腫瘤的生長受到抑制。

4 參考文獻(xiàn)

1姜宜成，沈成興.抗氧化酶基因轉(zhuǎn)染治療心血管疾病的研究進(jìn)展〔J〕．中國心血管雜志，2012;17(1)：70-2.

2姚煥英，唐靜成，張鞍靈，等.核桃屬植物化學(xué)成分及生物活性研究〔J〕.西北植物學(xué)報(bào)，2003;23(9)：1650-5.

3劉 艷，方 晨，曹 凱，等.新疆核桃青皮提取物抗氧化作用研究〔J〕.食品工業(yè)，2012;33(9)：114-6.

4曹志友，王 爽，歐陽瑾，等.白桃湯劑治療Lewis肺癌小鼠的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2009;20(4)：914-5.

5歐陽瑾，曹志友，王 爽，等.白桃湯劑抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤的生長及其血管生成的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2009;20(10)：2476-7.

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8蘭 英，趙 銳.核桃楸青果皮水提物對降低小鼠體內(nèi)丙二醛質(zhì)量濃度的研究〔J〕.北華大學(xué)學(xué)報(bào)，2000;6(1)：476-7.

9歐陽瑾，曹志友，王 爽，等.核桃青皮提取物抑制小鼠Lewis肺癌生長的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.時(shí)珍國醫(yī)國藥，2009;20(11)：2749-50.