郭軍鵬 于蘭英 徐 婷 劉震坤

(長春中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,吉林 長春 130117)

卵巢早衰(POF)是指40歲之前卵巢功能衰竭所導(dǎo)致的閉經(jīng)現(xiàn)象。臨床統(tǒng)計(jì)其發(fā)病率為1%左右。因此，該病的防治已引起一些科研人員的關(guān)注。中醫(yī)認(rèn)為POF的主要機(jī)制是腎虛精虧，所以治療以補(bǔ)腎填精為主〔1〕。本實(shí)驗(yàn)以滋陰補(bǔ)腎代表方劑六味地黃湯治療POF，為該藥臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1藥品與試劑 雷公藤多甙：上海復(fù)旦復(fù)華藥業(yè)有限公司；戊酸雌二醇(補(bǔ)佳樂)：拜耳醫(yī)藥保健有限公司廣州分公司；雌二醇(E2)、黃體生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)放免試劑盒：購買于北京北方生物技術(shù)研究所。六味地黃湯：熟地黃15 g、山萸肉12 g、山藥12 g、澤瀉10 g、丹皮10 g、茯苓10 g，購自長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院。取10倍體積清水浸泡30 min，煎煮2次后混合藥液，濃縮，置冰箱備用。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥 雌性SD大鼠，(180±20)g，30只，吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。大鼠經(jīng)適應(yīng)性飼養(yǎng)后，行陰道脫落細(xì)胞學(xué)檢查，篩選出動(dòng)情周期正常者為受試大鼠。隨機(jī)選出9只為空白對照組，給予生理鹽水(含0.05%羧甲基纖維素鈉)。其余大鼠參照文獻(xiàn)方法〔2〕以雷公藤多甙復(fù)制卵巢早衰大鼠病理模型，每日給予50 mg/kg 雷公藤多甙片懸浮液(含0.05%羧甲基纖維素鈉)連續(xù)灌胃14 d造模。將造模成功后的大鼠隨機(jī)分為模型組、六味地黃湯組。對照組和模型組灌胃給予生理鹽水2 ml/d，六味地黃組給予六味地黃湯6.75 g(生藥)·kg-1·d-1(相當(dāng)于人用劑量的10倍)，連續(xù)灌胃給藥持續(xù)21 d。

1.3檢測指標(biāo)

1.3.1POF大鼠卵巢、子宮和腎上腺臟器系數(shù)的檢測 采用乙醚麻醉，稱重，眼球取血。剖腹取雙側(cè)卵巢、子宮和腎上腺，稱取臟器濕重，計(jì)算臟器系數(shù)。臟器系數(shù)=臟器濕重(mg)/體重(g)×100%

1.3.2POF大鼠血清性激素的檢測 血液室溫靜置30 min后，3 000 r/min離心15 min，取血清，-20℃保存待測。采用放射免疫法測定血清中E2、LH和FSH的水平。

2 結(jié) 果

2.1六味地黃湯對POF大鼠卵巢、子宮、腎上腺臟器系數(shù)的影響 與空白對照組比較，模型組大鼠卵巢和腎上腺臟器系數(shù)明顯下降(P<0.05)，子宮臟器系數(shù)有下降趨勢；六味地黃湯組卵巢和腎上腺臟器系數(shù)略有增加，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表1。

表1 六味地黃湯對POF大鼠卵巢、子宮、腎上腺臟器系數(shù)的影響

2.2六味地黃湯對POF大鼠血清性激素的影響 與空白對照組比較，模型組雌激素明顯升高，卵泡刺激素顯著下降(P<0.05)；與模型組比較，六味地黃湯組能夠升高恢復(fù)卵巢早衰大鼠黃體生成素水平(P<0.05)，而對雌激素和卵泡刺激素沒有顯著影響。見表2。

表2 經(jīng)驗(yàn)方對POF大鼠血清性激素的影響

3 討 論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為POF屬“血枯”、“血隔”、“閉經(jīng)”等范疇，其主要病機(jī)為腎虛，與肝郁血瘀等也密切相關(guān)。根據(jù)病機(jī)治療常以滋陰補(bǔ)腎為主兼有活血、健脾、益氣等〔3〕，單味中藥有熟地、菟絲子、淫羊藿、肉蓯蓉、黃芪、當(dāng)歸、川芎、山藥、山茱萸等，常用的中藥方劑有六味地黃丸、左歸丸等〔4，5〕。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明六味地黃湯能夠升高黃體生成素。黃體生成素在有卵泡刺激素存在下，與其協(xié)同作用刺激卵巢雌激素分泌，使卵泡成熟與排卵、破裂卵泡形成黃體并分泌雌激素和孕激素。本實(shí)驗(yàn)中六味地黃湯組大鼠雌激素升高的并不明顯，且子宮臟器系數(shù)下降推測可能與雷公藤所致POF大鼠病理模型的卵巢損傷較重，或六味地黃湯給藥時(shí)間和(或)給藥劑量有一定關(guān)系。

綜上，滋陰補(bǔ)腎對POF具有一定治療效果，但臨床上為達(dá)最佳治療效果須根據(jù)病情給予方藥加減和劑量的調(diào)整。

4 參考文獻(xiàn)

1金 影，劉震坤.六味地黃湯治療更年期綜合征〔J〕.長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010;26(5)：738-9.

2諶 婕，吳克明，王家葵，等.雷公藤多甙致雌性小鼠腎虛生殖功能低下動(dòng)物模型的研究〔J〕.中藥新藥與臨床藥理，2007;18(3)：208-11.

3蔡品均，金 哲，黃文玲，等.補(bǔ)腎調(diào)肝法對治療自身免疫性卵巢早衰小鼠的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.天津中醫(yī)藥，2010;7(1)：56-8.

4陶仕英，牛建昭，趙丕文，等.二仙湯及其組方中藥對幼年大鼠子宮作用的研究〔J〕.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010;16(18)：118-21.

5朱 玲，羅頌平，許麗綿，等.左歸丸對免疫性卵巢早衰小鼠卵巢Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)的影響〔J〕.中藥新藥與臨床藥理，2012;23(4)：381-6.