徐行仙

[摘要] 目的 探討蘆根多糖對(duì)高脂誘導(dǎo)大鼠腎損傷的保護(hù)作用。 方法 制備高脂誘導(dǎo)大鼠腎損傷模型，將高脂大鼠分成3組，每組各10只，分別為蘆根多糖高（300 mg/kg）、低劑量組（150 mg/kg）和對(duì)照組，其中高劑量組每日灌胃給予蘆根多糖300 mg/kg，低劑量組每日灌胃給予蘆根多糖150 mg/kg，對(duì)照組每日給予等量純凈水，連續(xù)灌胃13周，測(cè)定24 h尿蛋白定量、血清肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、腎臟丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、低密度脂蛋白（LDL-C）、氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）及腎小球內(nèi)徑。 結(jié)果 與對(duì)照組比較，蘆根多糖高劑量組2 h尿蛋白定量、血清BUN、血清Cr、TC、TG、腎組織MDA、LDL-C、Ox-LDL等明顯降低（P < 0.05或P < 0.01），腎組織SOD明顯升高（P < 0.01），顯微結(jié)構(gòu)腎小球內(nèi)徑明顯減?。≒ < 0.05）；而低劑量組雖有一定的改善，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。 結(jié)論 蘆根多糖具有降脂抗氧化作用，能減少脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物，減輕對(duì)腎臟的損傷，同時(shí)具有減輕尿蛋白排泄及減小腎小球內(nèi)徑的作用，因此其對(duì)高脂造成大鼠腎損害具有一定的保護(hù)作用。

[關(guān)鍵詞] 蘆根多糖；腎臟；抗氧化

[中圖分類號(hào)] R285.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2014）07（a）-0024-04

蘆根多糖是從禾本科植物蘆葦?shù)叵赂o中提取的一種多糖成分，具有清熱、利尿、鎮(zhèn)咳、解毒、消炎等功效。臨床上主要用于發(fā)熱，尿路感染、肺膿瘍、支氣管炎等病的治療[1]。有文獻(xiàn)報(bào)道蘆根多糖具有保護(hù)肝臟的作用，其主要作用是通過(guò)抗氧化作用來(lái)實(shí)現(xiàn)[2-4]，雖有報(bào)道稱其可改善糖尿病小鼠的糖脂代謝[5]，但對(duì)肥胖大鼠的腎臟保護(hù)未見(jiàn)報(bào)道?；趯?duì)蘆根多糖的開(kāi)發(fā)研究，筆者主要通過(guò)制備高脂誘導(dǎo)肥胖大鼠，探討蘆根多糖對(duì)肥胖大鼠腎臟的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物

健康雄性Wistar大鼠40只，體重180～220 g，購(gòu)自上海市西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司，許可證號(hào)：SCXK（滬）2008-0016。

1.1.2 藥物提取

參考相關(guān)文獻(xiàn)[3]提供的資料提取獲得蘆根多糖。

1.1.3 試劑與儀器

肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、低密度脂蛋白（LDL-C）、蛋白測(cè)定試劑盒均購(gòu)于南京建成生物公司；氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）試劑盒購(gòu)于ADL公司。酶標(biāo)儀：芬蘭雷博MK3，全自動(dòng)生化儀：日本希森美康JCA-BM6010/C。

1.2 方法

1.2.1 肥胖大鼠模型的制備

Wistar雄性大鼠體給予普通標(biāo)準(zhǔn)飼料，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后；取10只大鼠作為空白組給予普通標(biāo)準(zhǔn)飼料，其余大鼠給予高脂飼料（配方：基礎(chǔ)飼料中白糖10%、豬油10%、蛋黃粉10%，膽固醇2%），連續(xù)喂養(yǎng)13周。

1.2.2 分組及給藥方法

給予高脂飼料大鼠分成3組，每組各10只，分別為高劑量組、低劑量組及對(duì)照組，其中高劑量組每日灌胃給予蘆根多糖300 mg/kg，低劑量組每日灌胃給予蘆根多糖150 mg/kg，對(duì)照組每日給予等量純凈水，空白組同對(duì)照組干預(yù)。連續(xù)13周。

1.2.3 24 h尿蛋白定量

于12周末將大鼠放在洗凈的代謝籠里，收集24 h的尿液，留尿期間禁食，不禁水，記錄尿量后取5 mL，2500 r/min，離心10 min，考馬斯亮藍(lán)G-250法（CBB）測(cè)定24 h尿蛋白定量（24 h UAlb，mg/24 h）。

1.2.4 血清指標(biāo)測(cè)定

實(shí)驗(yàn)進(jìn)行至13周末，大鼠禁食12 h，麻醉后腹主動(dòng)脈取血，離心，取上清液，分采用比色法（除蛋白）測(cè)定血清Cr，二乙酰-肟比色法測(cè)定BUN，TC酶法測(cè)定TC，TG酶法測(cè)定TG。

1.2.5 腎組織MDA、SOD的測(cè)定

13周末，解剖大鼠，取出腎臟，放置液氮中。測(cè)定時(shí)取出約0.1 g的腎組織，加9倍體積生理鹽水，在冰浴中勻漿后，離心，取上清液，分別采用硫代巴比妥酸（TBA）法測(cè)定MDA與羥胺法測(cè)定SOD。

1.2.6 腎組織LDL-C與Ox-LDL的測(cè)定

1.2.6.1 腎組織LDL-C的測(cè)定 13周末，解剖大鼠，取出腎臟，放置液氮中。測(cè)定時(shí)取出約0.1 g的腎組織加入20倍體積的氯仿-甲醇（2∶1）勻漿液中，在冰浴中勻漿后，室溫下慢搖動(dòng)過(guò)夜，2000 r/min，離心10 min，取上清液，加入0.2倍體積的生理鹽水，充分混勻，2000 r/min，離心10 min，除去上層液相，下層有機(jī)相在真空抽干機(jī)中抽干后，加入1 mL氯仿充分溶解脂質(zhì)并采用比色法進(jìn)行測(cè)定。

1.2.6.2 腎組織Ox-LDL測(cè)定 取出0.1 g腎組織加入10倍體積的生理鹽水，于冰浴中制成10%勻漿，4000 r/min，離心10 min，取上清液，采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）法檢測(cè)。

1.2.7 腎小球內(nèi)徑的測(cè)定

腎組織常規(guī)處理后，經(jīng)過(guò)碘酸雪夫（PAS）染色，光鏡下觀察腎小球病變。隨機(jī)選取含血管極和（或）尿極的最大腎小球的區(qū)域拍攝圖像，用MIAS-2000圖像分析系統(tǒng)測(cè)量該腎小球相互垂直的兩個(gè)最大直徑，每張組織切片至少檢測(cè)5個(gè)腎小球，取平均值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 16.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 蘆根多糖對(duì)24 h尿蛋白定量的影響

從表1可知，與空白組比較，對(duì)照組24 h UALb明顯升高（P < 0.01）。與對(duì)照組比較，蘆根多糖高劑量24 h UALb顯著降低（P < 0.05）。表明蘆根多糖具有一定降低尿蛋白的作用。

2.2 蘆根多糖對(duì)血肌酐、尿素氮的影響

從表2可知，與空白組比較，對(duì)照組Scr、BUN均明顯升高（P < 0.01）。與對(duì)照組比較，蘆根多糖高劑量Scr、BUN均顯著降低（P < 0.01或P < 0.05），但蘆根多糖低劑量組無(wú)明顯變化。表明蘆根多糖具有一定的改善腎功能的作用。

2.3 蘆根多糖對(duì)血脂的影響

從表3可知，與空白組比較，對(duì)照組血清TC、TG均顯著升高（P < 0.01）。與對(duì)照組比較，蘆根多糖高劑量組血清TC、TG均顯著下降（P < 0.01）；而低劑量組對(duì)血清TC、TG有下降趨勢(shì)，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。表明蘆根多糖具有一定的降脂作用。

2.4 蘆根多糖對(duì)腎組織丙二醛與超氧化物歧化酶的影響

從表4可知，與空白組比較，對(duì)照組腎組織MDA明顯升高，SOD明顯下降（P < 0.01）。與對(duì)照組比較，蘆根多糖高劑量組腎組織MDA明顯下降，SOD明顯升高（P < 0.01），但蘆根多糖低劑量組無(wú)明顯變化。表明蘆根多糖具有一定的抗氧化作用。

2.5 蘆根多糖對(duì)腎組織低密度脂蛋白與氧化低密度脂蛋白的影響

從表5可知，與空白組比較，對(duì)照組腎臟LDL-C與Ox-LDL均顯著升高（P < 0.01）。與對(duì)照組比較，蘆根多糖高劑量組腎臟LDL-C與Ox-LDL顯著降低（P < 0.01），但蘆根多糖低劑量組無(wú)明顯變化。表明蘆根多糖具有一定的抗脂質(zhì)氧化作用。

2.6 蘆根多糖對(duì)腎小球內(nèi)徑的影響

從表6可知，與空白組比較，對(duì)照組腎小球內(nèi)徑明顯升高（P < 0.01）。與對(duì)照組比較，蘆根多糖高劑量對(duì)腎小球內(nèi)徑顯著降低（P < 0.05）。表明蘆根多糖具有一定的改善腎小球內(nèi)徑的作用。

3 討論

目前對(duì)高脂飼料誘導(dǎo)的動(dòng)物模型研究較多，同時(shí)也有很多報(bào)道中藥對(duì)肥胖大鼠的降脂作用及其臟器功能保護(hù)作用[6-8]。而肥胖引起的腎臟病被稱為肥胖相關(guān)性腎小球病（ORG），最早由Weisinger等[9]于1974年報(bào)道。近年來(lái)，腎臟疾病的降脂治療更被提到了一個(gè)很高的地位。然而，降脂治療是否可改善原有腎臟疾病，減少蛋白尿，減慢腎衰進(jìn)程，目前尚無(wú)統(tǒng)一認(rèn)識(shí)[10]。而且ORG的發(fā)病機(jī)制至今欠清，可能多因素參與致病。研究表明TC、TG、LDL血癥均有脂質(zhì)腎毒性， 可通過(guò)直接沉積在腎組織造成腎小球內(nèi)皮細(xì)胞損傷及腎小球硬化[11]，也可以通過(guò)損傷腎組織和動(dòng)脈壁的抗氧化能力、增加腎臟內(nèi)一些細(xì)胞因子間接參與腎臟疾病的發(fā)生、發(fā)展。Ox-LDL具有較強(qiáng)的內(nèi)皮細(xì)胞毒性作用，且氧化程度越高，其損傷作用越強(qiáng)[12]。在腎臟，Ox-LDL與細(xì)胞膜受體結(jié)合而沉積于腎臟固有細(xì)胞內(nèi)，促使其釋放各種因子，最終引起腎小球細(xì)胞增生和細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的沉積[13]。隨著疾病發(fā)展，毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生，腎小球內(nèi)出吞噬小泡?？傊?，增高的脂質(zhì)通過(guò)受體或受體后機(jī)制在腎小球內(nèi)聚集，直接或間接地影響細(xì)胞間信號(hào)傳遞、刺激MC和系膜外基質(zhì)增殖、分泌大量炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子、吸引炎癥細(xì)胞趨化和聚集，并形成惡性循環(huán)，導(dǎo)致腎小球破壞和硬化[10]。

一般認(rèn)為，24 h UALb是判定腎病有無(wú)的可靠指標(biāo)，血清Cr和BUN反映早期腎損害的相關(guān)性指標(biāo)，降脂、減輕脂質(zhì)氧化可有效減輕腎臟細(xì)胞的損害，顯微結(jié)構(gòu)腎小球內(nèi)徑的減小有利于減少尿蛋白的漏出。

筆者采用高脂誘導(dǎo)大鼠制備肥胖大鼠對(duì)照，其表現(xiàn)為血脂過(guò)高及腎臟損傷等[14-15]，運(yùn)用蘆根多糖每日灌胃治療，連續(xù)13周，測(cè)定血清指標(biāo)，與對(duì)照組比較，蘆根多糖高劑量組24 h UALb、血清BUN、血清Cr、TC、TG、腎組織MDA、LDL-C、Ox-LDL等明顯降低（P < 0.05或P < 0.01），腎組織SOD明顯升高（P < 0.01），顯微結(jié)構(gòu)腎小球內(nèi)徑明顯減?。≒ < 0.05）；低劑量組雖然有一定的改善作用，但未顯示出明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果表明，蘆根多糖具有減少尿蛋白排泄、改善腎功能、降脂、抗氧化、降低腎臟組織LDL-C與Ox-LDL、減小腎小球內(nèi)徑等作用。蘆根多糖具有降脂抗氧化作用，能減少脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物，減輕對(duì)腎臟的損傷[16]，同時(shí)具有減輕尿蛋白排泄及減小腎小球內(nèi)徑的作用，因此其對(duì)高脂造成的大鼠腎損害具有一定的保護(hù)作用。

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（收稿日期：2014-03-06 本文編輯：衛(wèi) 軻）

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（收稿日期：2014-03-06 本文編輯：衛(wèi) 軻）

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（收稿日期：2014-03-06 本文編輯：衛(wèi) 軻）