李新莉等

摘 要： 本文采用HPLC測(cè)定板藍(lán)根提取物腺苷含量，以提高板藍(lán)根的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，方法為將板藍(lán)根醇提液揮去乙醇，經(jīng)氯仿萃取，然后用HPLC測(cè)定，得出色譜柱：Diamonsil C18，250mm×4.6mm，5μm，流動(dòng)相：甲醇-水（10∶90），流速：1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：260nm，柱溫：45℃。結(jié)果表明腺苷含量在0.188～0.940μg范圍內(nèi)，r=0.9998，平均回收率為96.45%，RSD為3.05%（n=5），線性關(guān)系良好?？梢姳痉椒ê?jiǎn)單靈敏，準(zhǔn)確可靠，重現(xiàn)性好，可完善現(xiàn)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為提高板藍(lán)根的質(zhì)量控制方法提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，對(duì)于保證其質(zhì)量和臨床療效具有重要意義。

關(guān)鍵詞： 板藍(lán)根 腺苷 高效液相色譜法 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

板藍(lán)根為常用中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，在《中國(guó)藥典》中收載始于1985年版，2005年版規(guī)定板藍(lán)根為十字花科菘藍(lán)屬植物菘藍(lán)Isatis indigotica Fort.的干燥根[1]，性寒味苦，有清熱解毒、涼血消腫的功效，用于溫毒發(fā)斑、舌絳紫暗、丹毒、癰腫等，臨床應(yīng)用極其廣泛。而1985年版《中國(guó)藥典》到現(xiàn)行版，均無專屬性指標(biāo)成分作為板藍(lán)根的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。腺苷是板藍(lán)根所含的一種天然成分，具有抗凝血、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、松弛支氣管平滑肌、鎮(zhèn)靜中樞神經(jīng)和抗心律不齊的作用[2]。本文以腺苷作為指標(biāo)成分，選取定量分析方法，對(duì)完善現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，對(duì)保證板藍(lán)根中藥質(zhì)量有重要意義。

1.儀器與試劑

1.1儀器。SPD-LC10A型高效液相色譜儀（日本島津）；BP210S 電子天平（德國(guó)Sartorius 公司）；SPD—10A型紫外檢測(cè)器（日本島津）；N2000（浙大智達(dá)）數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。

1.2材料及試劑。板藍(lán)根（陜西省老百姓大藥房，產(chǎn)自甘肅，經(jīng)鑒定均為正品板藍(lán)根）；腺苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)896-200909，質(zhì)量分?jǐn)?shù)>98%），色譜純甲醇，水為重蒸水，其他試劑為分析純和色譜純（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

2.方法與結(jié)果

2.2腺苷對(duì)照品溶液的配制。精密稱取腺苷對(duì)照品3.2mg，置50 mL量瓶中，加10%甲醇適量使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.064mg/mL的腺苷對(duì)照品溶液。

2.3供試品溶液的配制。取板藍(lán)根藥材粉末1g（過3號(hào)篩），精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入10%的甲醇20mL，超聲提?。üβ剩?00～250W，頻率：60～100Hz）30min，冷卻后過濾，濾液揮干，殘?jiān)?0%甲醇溶解并移入5mL的量瓶中用10%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液[3]。

2.4線性關(guān)系考察。精密稱取腺苷對(duì)照品4.7mg，用流動(dòng)相溶解并定容至50mL；精密吸取1，2，3，4，5 mL至10mL量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，20μm進(jìn)樣測(cè)定[4]。以峰面積（X）對(duì)進(jìn)樣量（Y）進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程：X=2531490.23Y-13966.25，相關(guān)系數(shù)：r=0.9998（n=5）。結(jié)果表明腺苷含量在0.188～0.940μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.5精密度實(shí)驗(yàn)。腺苷對(duì)照品溶液20μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，按上述實(shí)驗(yàn)方法項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，測(cè)得的峰面積如下：35.5775，35.5549，35.6545，35，4060，35.7038，RSD%=0.482%。

2.6重復(fù)性實(shí)驗(yàn)。同一試樣精密稱取5份，分別按供試品溶液制備方法制備，測(cè)定腺苷含量[5]。測(cè)得供試品溶液含量的平均值為0.3786mg/g，RSD為1.26%。

2.7加樣回收率實(shí)驗(yàn)。分別稱取已知含量的樣品6份，各精密加入一定量的腺苷對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制備，測(cè)定腺苷含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

從表1可得平均回收率為96.45%，RSD為3.05%。

2.8樣品含量測(cè)定。取甘肅產(chǎn)板藍(lán)根3批，粉碎，按供試品溶液制備方法制備，20μl進(jìn)樣，測(cè)定腺苷含量[16]，結(jié)果見表2，色譜圖見圖1和2。

3.結(jié)果

通過以上實(shí)驗(yàn)方法可以看出，高效液相色譜法對(duì)腺苷含量測(cè)定0.188～0.940μg范圍內(nèi)，r=0.9998，平均回收率為96.45%，RSD為3.05%（n=5），線性關(guān)系良好。該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可靠，可作為婦女痛經(jīng)丸的質(zhì)量控制方法。

4.討論與結(jié)論

板藍(lán)根經(jīng)現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)具有多方面作用。板藍(lán)根及其制劑的質(zhì)量控制目前多以靛藍(lán)、靛玉紅的含量測(cè)定（高效液相色譜法）為指標(biāo)，但是板藍(lán)根中靛藍(lán)、靛玉紅的含量?jī)H為百萬分之幾（μg/g），且樣品溶液的制備需用氯仿回流提取很長(zhǎng)時(shí)間（回流提取一次8h或回流提取3次，每次2h），因而不利于板藍(lán)根成品質(zhì)量控制。2010年版《中國(guó)藥典》板藍(lán)根鑒別項(xiàng)下以精氨酸對(duì)照品作為TLC鑒別依據(jù)[7]，無定量測(cè)定方法。精氨酸雖然可作為指標(biāo)建立定性方法，但并非板藍(lán)根的特征性成分，缺乏專屬性。腺苷為板藍(lán)根的特征性成分，用高效液相色譜法便于測(cè)定其含量，操作簡(jiǎn)便、易行。專屬性強(qiáng)，可與南板藍(lán)根相區(qū)別，為活性成分，具有抗凝血、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、松弛支氣管平滑肌、鎮(zhèn)靜中樞神經(jīng)和抗心律不齊的作用，在板藍(lán)根中含量較高（約0.2mg/g），且化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，因此本研究選擇腺苷作為指標(biāo)成分建立板藍(lán)根藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為板藍(lán)根新質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

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[2]趙軍.板藍(lán)根的藥理作用及其臨床應(yīng)用[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2003，14（4）：241.743.

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[7]國(guó)家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國(guó)藥典（一部）[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：142-143，487-488.1985，2000，2005，2010.