陶 潔，廖金虎，張 倩，張信軍，朱國(guó)強(qiáng)*

(1.揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，江蘇 揚(yáng)州 225009；2.江蘇省動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇 揚(yáng)州 225009)

牛病毒性腹瀉病毒(Bovine viral diarrhea virus，BVDV)和豬瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)、綿羊邊界病毒(Border disease virus，BDV)同屬于黃病毒科(Flaviviridae)瘟病毒屬(Pestivirus)[1]，而且在血清學(xué)上具有一定的交叉反應(yīng)，它們所引起的傳染性疾病給各國(guó)養(yǎng)牛、養(yǎng)豬和養(yǎng)羊業(yè)造成了嚴(yán)重的危害。牛病毒性腹瀉病(BVD)呈世界性流行，給各國(guó)養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[2]。但直到2012年，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(Office International Des Epizooties，OIE)才將該病列為必須通報(bào)的疾病。BVDV的宿主譜非常廣，除了感染牛，還可以引起豬、羊、鹿、駱駝和多種野生動(dòng)物發(fā)病[3-6]。感染宿主的不同及病毒株遺傳背景的不同，可使BVDV感染引起相應(yīng)不同的臨床癥狀。CSFV僅感染本地豬和野豬，通常引起以高熱、昏睡、黃痢、耳部、腹部和腿部皮膚壞死等為特征癥狀的致死性疾病。而豬感染BVDV不表現(xiàn)出臨床癥狀，或出現(xiàn)類似于豬瘟的癥狀，因而不僅給豬瘟的預(yù)防和控制帶來(lái)了很大的困難，也使BVDV的防控難上加難。目前，很多國(guó)家已經(jīng)開(kāi)始重視這個(gè)問(wèn)題。

1 豬源BVDV的流行史

豬感染BVDV的歷史悠久，早在二十世紀(jì)六十年代，在澳大利亞進(jìn)行豬瘟檢疫時(shí)，從一些亞臨床癥狀的豬群內(nèi)檢測(cè)到CSFV瓊擴(kuò)抗體，當(dāng)時(shí)認(rèn)為可能是由于豬群感染低毒力CSFV引起的。但后來(lái)在其他地區(qū)不表現(xiàn)豬瘟癥狀及病理變化的豬體內(nèi)也能檢測(cè)到瓊擴(kuò)抗體，因此人們開(kāi)始懷疑利用瓊擴(kuò)試驗(yàn)進(jìn)行豬瘟檢疫的可靠性，并認(rèn)為可能是BVDV感染所致[7]。1968年，Snowdon等用不同的BVDV株實(shí)驗(yàn)性感染豬，結(jié)果發(fā)現(xiàn)部分豬體內(nèi)產(chǎn)生BVDV抗體，而有些豬體內(nèi)能同時(shí)產(chǎn)生BVDV和CSFV交叉抗體，并能夠抵抗CSFV強(qiáng)毒的攻擊[8]。由此推測(cè)，澳大利亞豬群中檢測(cè)到的CSFV抗體很有可能就是BVDV感染的結(jié)果。直到1973年，F(xiàn)ernelius等證實(shí)了這種推測(cè)，他們從自然感染發(fā)病的豬體內(nèi)分離到BVDV，首次證實(shí)BVDV可以自然感染豬[9]。隨后陸續(xù)有BVDV自然感染豬的報(bào)道，Terpstra等自1976年以來(lái)總共檢測(cè)出19起由BVDV自然感染豬引起的類似豬瘟的病例[10]。Wensvoort等(1988)報(bào)道了8例由于使用污染有BVDV疫苗而引起豬發(fā)病的病例[11]。1992年，Paton等通過(guò)血清學(xué)檢查，證實(shí)了英國(guó)的一起曾被診斷為“豬瘟”的疾病其實(shí)是由于BVDV自然感染豬而引起的。國(guó)內(nèi)也在1996年由王新平等通過(guò)RT-PCR手段從疑似豬瘟病料中擴(kuò)增出了BVDV的基因片段；將病料處理后接種細(xì)胞，出現(xiàn)BVDV典型的拉網(wǎng)狀病變，從而首次證實(shí)了BVDV可自然感染豬并引起類似豬瘟的臨床癥狀及病理變化[12]。近年來(lái)，各國(guó)豬群中感染BVDV的趨勢(shì)日益增加，澳大利亞、愛(ài)爾蘭和德國(guó)等地區(qū)豬群中BVDV的抗體陽(yáng)性率達(dá)3%～40%，荷蘭為15%～20%，挪威和丹麥分別約2.2%和6.4%，北美達(dá)2%～43%[5,13-14]。1997～1998年在新西蘭暴發(fā)的豬瘟，也由于BVDV抗體的存在很大程度上干擾了CSFV的血清學(xué)篩查[15]。

目前，國(guó)內(nèi)豬群中BVDV的感染現(xiàn)狀也相當(dāng)嚴(yán)重，已經(jīng)成為一個(gè)不容忽視的問(wèn)題。最早是1996年王新平等分離到的1型豬源BVDV分離株ZM-95。吳文輝等在2007年和2008年對(duì)上海奉賢地區(qū)疑似豬瘟樣品及不同批次的豬瘟弱毒苗進(jìn)行BVDV檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)兩者的陽(yáng)性率分別為35.1%和64.1%[16]；在2009年和2010年又對(duì)該地區(qū)及鄰近區(qū)域的疑似豬瘟送檢生豬樣品進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)BVDV陽(yáng)性率分別高達(dá) 80.39%和 80.72%[17]。2004～2007年，戴益民等報(bào)道江西省豬群中BVDV感染率為10%～15.8%[18]。宋永峰等在2006年利用RT-PCR對(duì)浙江等6個(gè)省市的43份豬病料進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果檢出BVDV陽(yáng)性率達(dá)16.3%，而且主要為BVDV-1a和BVDV-1b亞型[19]。在2005～2009年間，對(duì)國(guó)內(nèi)20多個(gè)省市300多個(gè)規(guī)模化養(yǎng)豬場(chǎng)進(jìn)行了BVDV的流行病學(xué)調(diào)查，發(fā)現(xiàn)各年度的BVDV陽(yáng)性率分別為22.2%、43.1%、46.4%、66.7%和80.8%[20-22]，呈逐年擴(kuò)增的趨勢(shì)且勢(shì)態(tài)嚴(yán)重。此外，利用套式RT-PCR在2007～2010年對(duì)國(guó)內(nèi)部分地區(qū)的臨床樣品進(jìn)行篩查，檢出BVDV的陽(yáng)性率分別為23.1%(2007年)、27.7%(2008 年)、33.6%(2009 年)和 23.6%(2010年)，并且主要?dú)w屬于BVDV-1a、BVDV-1b、BVDV-1m和BVDV-1o亞群[23]。梁晟等對(duì)2010～2012年廣西部分地區(qū)豬病進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果表明BVDV的檢出率為26.92%[24]。而2012年閩西地區(qū)部分豬場(chǎng)的BVDV陽(yáng)性率高達(dá)94.4%，其中種豬、育肥豬、保育豬和仔豬的陽(yáng)性率分別為38.5%、17.3%、2.1%和27.4%[25]。以上數(shù)據(jù)已表明目前各國(guó)豬群中BVDV感染程度相當(dāng)嚴(yán)重，應(yīng)引起廣足夠的重視，并及時(shí)做好防控工作。

2 豬感染BVDV的臨床癥狀

一般情況下，豬感染BVDV呈亞臨床感染，不表現(xiàn)出明顯癥狀，也有的豬出現(xiàn)輕微發(fā)熱癥狀。BVDV自然感染豬出現(xiàn)類似于豬瘟臨床癥狀。母豬自然感染BVDV可致受孕率降低、產(chǎn)仔數(shù)下降、流產(chǎn)和產(chǎn)死胎等癥狀。仔豬先天性感染BVDV可以產(chǎn)生抗體，也有的發(fā)展為持續(xù)性感染，持續(xù)性感染豬終身排毒并成為傳染源。一般2～4周齡仔豬對(duì)BVDV易感，多數(shù)于出生后4個(gè)月內(nèi)死亡，也有的在出生后數(shù)天內(nèi)便死亡。豬感染BVDV會(huì)出現(xiàn)的臨床癥狀主要包括被毛粗亂、生長(zhǎng)遲緩、貧血，有的還可見(jiàn)結(jié)膜炎、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎和腹瀉；病理變化主要以慢性胃腸炎和敗血癥為特征，類似于慢性豬瘟。實(shí)驗(yàn)性感染豬常出現(xiàn)一過(guò)性白細(xì)胞減少癥、充血、慢性胃腸炎和以淋巴結(jié)、心外膜和腎臟出血為特征的敗血癥。由于豬瘟感染也常見(jiàn)充血和白細(xì)胞減少癥癥狀，因此容易將豬群中得BVDV感染與CSFV感染相混淆。豬感染BVDV表現(xiàn)出的臨床癥狀和病例變化差異很大，主要取決于感染的BVDV株種類和懷孕母豬感染BVDV時(shí)所處的階段。在新西蘭和法國(guó)曾有一病例，母豬懷孕4個(gè)月內(nèi)接種了污染有瘟病毒的豬瘟疫苗，產(chǎn)下的仔豬表現(xiàn)出類似于低毒力CSFV感染引起的癥狀[26]。我國(guó)長(zhǎng)嶺地區(qū)曾發(fā)生過(guò)10日齡仔豬感染BVDV的病例，出生后5 d～6 d的仔豬發(fā)病，表現(xiàn)為震顫、站立不穩(wěn)和腹瀉；病理剖檢可見(jiàn)敗血癥變化，漿膜和皮下有出血點(diǎn)，腎皮質(zhì)有雀斑狀出血點(diǎn)，淋巴結(jié)腫大及周邊性出血[27]。

3 豬源BVDV的傳染源

一直以來(lái)人們都認(rèn)為牛是豬感染BVDV的主要傳染源，周邊地區(qū)有牛群存在的豬場(chǎng)中豬的BVDV血清陽(yáng)性率往往比較高[28]。Stewart等從與接種過(guò)BVDV疫苗的牛密切接觸的豬體內(nèi)檢測(cè)到BVDV抗體[29]。此外，通過(guò)飼喂污染BVDV的牛奶或牛內(nèi)臟等食料也可引起豬感染。值得重視的是污染BVDV的豬瘟疫苗也是一個(gè)非常重要的感染源。由于BVDV的篩查達(dá)不到100%，因此在豬瘟疫苗制作過(guò)程中極易使用一些污染BVDV的血清和細(xì)胞系而導(dǎo)致豬瘟疫苗污染[30-32]。范學(xué)政等對(duì)23批次的豬瘟疫苗進(jìn)行BVDV檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)BVDV污染率達(dá)21.74%[33]；葉兆美等對(duì)19份豬瘟和藍(lán)耳病活疫苗進(jìn)行BVDV檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)BVDV污染率為10.53%[34]。Vannier等報(bào)道法國(guó)一豬場(chǎng)由于使用了污染BVDV的假狂犬病疫苗而導(dǎo)致母豬低產(chǎn)仔率和高產(chǎn)畸形胎率[35]。Woods等從接種了污染BVDV的豬傳染性胃腸炎疫苗的小豬體內(nèi)分離到了一株BVDV-C[36]。Yang等報(bào)道某豬場(chǎng)接種過(guò)豬瘟疫苗后，在豬體內(nèi)檢測(cè)到較高的CSFV抗體，同時(shí)還可以檢測(cè)到BVDV抗體，表明使用的豬瘟疫苗內(nèi)肯定污染有BVDV[37]。這些數(shù)據(jù)足以證明，生物制品生產(chǎn)管理和安全的重要性，只有從源頭上控制了感染來(lái)源的可能性，才有可能預(yù)防和控制BVDV在牛群和豬群中的感染。

4 豬感染BVDV和CSFV的鑒別診斷

瘟病毒屬成員的抗原結(jié)構(gòu)具有一定的相似性，因此現(xiàn)有的血清學(xué)檢測(cè)不能有效的將它們區(qū)分開(kāi)。豬瘟檢疫時(shí)，常常會(huì)將BVDV感染誤認(rèn)為CSFV感染，從而給CSFV的流行病學(xué)調(diào)查及其防控帶來(lái)困難。但有報(bào)道根據(jù)血清中BVDV和CSFV中和抗體滴度的高低，可區(qū)別豬的這兩種病毒感染；通常同源病毒感染產(chǎn)生的抗體滴度會(huì)明顯高于異源病毒感染產(chǎn)生的抗體滴度，即豬感染BVDV后，其血清內(nèi)BVDV的抗體滴度明顯比CSFV的抗體滴度高。由于目前臨床上的豬瘟感染病例很少會(huì)出現(xiàn)典型癥狀，因此必須通過(guò)實(shí)驗(yàn)室手段進(jìn)行診斷。采用單克隆抗體技術(shù)可以將BVDV和CSFV進(jìn)行鑒別診斷，如病毒中和試驗(yàn)、間接免疫熒光(IFA)及ELISA等。

在眾多檢測(cè)方法中，病毒分離仍是靈敏度高、特異性較強(qiáng)的一種手段。組織勻漿物、血清、血漿、白細(xì)胞層和紅細(xì)胞等均可用于病毒的分離。扁桃體、脾臟、腎臟、回盲腸淋巴結(jié)和咽后淋巴結(jié)等組織中的病毒含量較高。但該方法費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，所以不適合用于臨床樣品的快速檢測(cè)診斷。相對(duì)而言，RT-PCR是一種快速、特異、敏感的手段。許多學(xué)者建立了套式PCR等方法來(lái)鑒別診斷BVDV和CSFV[38-40]。鄧宇等建立了豬源BVDV的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法[41]。最近，Zhang等建立了一種三重Taq-Man熒光定量RT-PCR，用于區(qū)分野毒CSFV、豬瘟兔化疫苗和BVDV-1[42]。這些分子生物學(xué)技術(shù)也可用于篩查處于病程早期的病豬。此外，由于持續(xù)性感染豬體內(nèi)缺乏相關(guān)中和抗體，因此用血清學(xué)方法檢測(cè)容易造成漏檢，而分子生物學(xué)技術(shù)可以避免這一問(wèn)題。但在實(shí)際診斷時(shí)，建議配合使用多種檢測(cè)方法。

5 小結(jié)與展望

近年來(lái)，BVDV在鹿群、羊群、豬群中感染率越來(lái)越高，特別是豬群中BVDV的感染。由于BVDV和CSFV在血清學(xué)上存在一定的交叉反應(yīng)，因此常?；煜素i瘟的監(jiān)測(cè)，給豬瘟的防控帶來(lái)了嚴(yán)重的困難。最近，陸續(xù)有從豬瘟疫苗中檢出BVDV的報(bào)道。這種生產(chǎn)制度上的管理缺陷，直接或間接地給養(yǎng)豬業(yè)帶來(lái)了不可計(jì)量的經(jīng)濟(jì)損失。由于牛血清和細(xì)胞系也極易污染BVDV，因此為了提高BVDV流行病學(xué)調(diào)查的可靠性，每次使用新批次的牛血清培養(yǎng)細(xì)胞前或用細(xì)胞進(jìn)行病毒分離時(shí)，都必須對(duì)血清和細(xì)胞進(jìn)行嚴(yán)格的BVDV篩查，以防由于實(shí)驗(yàn)室操作原因而誤報(bào)BVDV的檢出率。

一般認(rèn)為豬源BVDV主要來(lái)源于牛，周邊有BVDV流行的牛群存在時(shí)，豬群中BVDV的抗體陽(yáng)性率會(huì)偏高，但這種理論至今為止沒(méi)有足夠、確切的數(shù)據(jù)來(lái)證實(shí)。相反，大量調(diào)查研究數(shù)據(jù)表明生物試劑的污染特別是豬瘟疫苗、牛血清及細(xì)胞系的污染，造成了BVDV在牛群和豬群中的廣泛流行。因此，我們認(rèn)為豬源BVDV來(lái)源于污染的生物試劑的可能性要遠(yuǎn)大于來(lái)源于牛的可能性。所以，有效預(yù)防和控制BVDV在豬群和牛群中的感染，就要加強(qiáng)生物試劑的生產(chǎn)和安全管理，從源頭上遏制BVDV污染的可能性，這一點(diǎn)應(yīng)該引起廣大獸醫(yī)界人士的重視。

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