鄧新娜,趙淑芳,趙海靜,閆永龍,賀麗亞,張洪珍

(河北省人民醫(yī)院，河北 石家莊 050051)

康萊特注射液對晚期非小細胞肺癌化療患者免疫功能的影響

鄧新娜,趙淑芳,趙海靜,閆永龍,賀麗亞,張洪珍

(河北省人民醫(yī)院，河北 石家莊 050051)

目的 探討晚期非小細胞肺癌患者血中T細胞亞群、CD4+CD25+調(diào)解性T細胞(Treg)及免疫球蛋白的改變,觀察康萊特注射液(KLT)聯(lián)合化療對晚期非小細胞肺癌患者免疫功能的影響。方法 將68例晚期非小細胞肺癌患者隨機分為2組，對照組應(yīng)用多西他賽、順鉑聯(lián)合化療,不予康萊特及其他提高免疫力的治療措施；治療組同時給予康萊特注射液200 mL靜點,連用14 d。2組均以21 d為1個周期,2個周期后評價T細胞亞群及免疫球蛋白的變化情況。另選30例健康人作為正常對照組。結(jié)果 化療前對照組及治療組患者T細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+比例及CD4+CD25+Treg與正常對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。化療后對照組免疫球蛋白、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值及治療組CD4+CD25+Treg與化療前比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)?；熀髮φ战M與治療組CD3+、CD4+、CD8+及CD4+/CD8+比值、IgG比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。結(jié)論 康萊特注射液可保護晚期非小細胞肺癌患者的免疫功能,降低免疫耐受。

非小細胞肺癌；康萊特注射液；免疫功能；免疫耐受；化療

肺癌是我國及世界范圍內(nèi)最常見也是惡性程度最高的惡性腫瘤之一，在我國,每年有將近50萬的新發(fā)肺癌患者，其中非小細胞肺癌占肺癌的80%～85%。免疫功能低下和免疫耐受是惡性腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的重要原因之一，目前臨床上常規(guī)的治療手段如手術(shù)、化療或放療使多數(shù)患者治療后的免疫力下降，不能耐受繼續(xù)治療，影響生活質(zhì)量，因此晚期肺癌化療患者的免疫治療得到廣泛關(guān)注。筆者觀察了康萊特注射液聯(lián)合多西他賽、順鉑治療晚期非小細胞肺癌的療效，以及對患者免疫功能的影響，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇2009年6月—2012年6月入住我院的ⅢB～Ⅳ期非小細胞肺癌患者68例，均為不能手術(shù)或遠處轉(zhuǎn)移患者，均經(jīng)病理學(xué)證實，其中腺癌46例，鱗癌17例，其他5例；預(yù)計生存期≥3 個月，KPS評分≥80 分；血常規(guī)、肝腎功能和心電圖基本正常。將68例患者隨機分為2組：治療組34例，男20例，女14例；年齡(63.88±1.99)歲。對照組34例，男22例，女12例；年齡(64.29±2.07)歲。2組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。另選擇同期性別、年齡與患者匹配的30例正常健康人作為正常對照組，男18例，女12例；年齡(63.14±1.48)歲。

1.2 治療方法 對照組單純采用化療藥物治療：多西他賽85 mg/m2，第1天，順鉑25 mg/m2，第1—3天，21 d為1個周期，治療期間不應(yīng)用免疫藥物。治療組在化療的基礎(chǔ)上聯(lián)合應(yīng)用康萊特注射液200 mL靜點，1次/d，從化療前1 d開始連用2周，21 d為1個周期，共治療2個周期。

1.3 觀察指標(biāo) 治療前1 d及治療2個周期后1周使用流式細胞儀檢測淋巴細胞免疫分型(包括T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD4+CD25+Treg)，使用免疫比濁法檢測免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)；此外，還檢測血常規(guī)、生化等一般指標(biāo)。

1.4 檢測方法

1.4.1 外周血T淋巴細胞亞群及Treg檢測方法 采用免疫熒光標(biāo)記全血溶血法，將新鮮的肝素抗凝的待測血漿25 μL加入流式試管內(nèi)，加單抗5 μL，混勻后于室溫下避光15 min，加溶血素125 μL混勻后室溫避光10 min，上機檢測。流式細胞儀測定淋巴細胞表面各種熒光素的熒光強度，熒光強度以二維 dot-plot 散點圖儲存于電腦中。自動分析結(jié)合某一單抗的陽性細胞個數(shù)和百分比，得到T淋巴細胞各亞群的百分數(shù)，在FITC-CD4/PE-CD25雙參數(shù)圖上計算得到CD4+CD25+Treg的百分數(shù)。主要試劑及儀器：CD3-PC5單克隆抗體、CD4-FITC單克隆抗體、CD8-PE單克隆抗體、CD25-PE單克隆抗體均購自美國貝克曼庫爾特有限公司BeckmanCoulter，流式細胞儀型號：Beckman Coulter EpicsXL。

1.4.2 外周血免疫球蛋白檢測方法 應(yīng)用免疫比濁法，將抗人免疫球蛋白抗體與待測血中免疫球蛋白相結(jié)合，利用動力學(xué)原理觀察單位時間內(nèi)抗原與抗體結(jié)合的量來測定其濃度。應(yīng)用Beckman公司的Immage特種蛋白分析儀上機檢測，運行軟件進行樣品測定分析。IgG、IgA、IgM試劑均采用貝克曼公司專用試劑盒。

2 結(jié) 果

2.1 各組T淋巴細胞亞群比較 化療前對照組及治療組T細胞亞群CD3+、CD4+比例均低于正常對照組(P均<0.05)，CD4+/CD8+比值低于正常對照組但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，CD8+比例、CD4+CD25+Treg均高于正常對照組(P均<0.05)?；熀笾委熃M與對照組T細胞亞群CD3+、CD4+比例，CD4+/CD8+比值均較治療前降低(P均<0.05)，且2組化療后比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)?；熀髮φ战MCD8+比例較前明顯升高(P<0.05)，治療組升高不明顯(P>0.05)。化療后，治療組CD4+CD25+Treg明顯降低(P<0.05)，對照組雖有降低，但治療前后比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，且2組治療后比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.2 各組血清IgG、IgA、IgM比較 化療前治療組及對照組免疫球蛋白IgG水平較正常對照組略低，IgA較正常對照組略高，IgM對照組略高于正常對照組、治療組略低于正常對照組，但均無顯著性差異(P均>0.05)。化療后，對照組免疫球蛋白IgG、IgA、IgM較化療前均降低(P均<0.05)；治療組免疫球蛋白IgG、IgA、IgM水平較化療前均降低，但無顯著性差異(P均>0.05)?；熀髮φ战M免疫球蛋白IgG水平低于治療組(P<0.05)。見表2。

表1 各組外周血T淋巴細胞亞群測定結(jié)果比較±s)

注：①與正常對照組比較，P<0.05；②與化療前比較，P<0.05；③與治療組比較，P<0.05。

3 討 論

由于肺癌起病隱匿，大部分患者確診時已達晚期，失去手術(shù)機會，化療是晚期肺癌主要的治療手段之一。但化療在殺傷大量腫瘤細胞、減輕瘤負荷的同時又對機體免疫系統(tǒng)、骨髓造血系統(tǒng)等造成破壞，而免疫功能下降進一步影響肺癌的預(yù)后及患者的依從性，因此，在肺癌化療的同時，應(yīng)用具有抗癌、低毒、保護機體免疫功能的藥物意義重大。

表2 各組外周血免疫球蛋白測定結(jié)果比較±s，mg/L)

注：①與化療前比較，P<0.05；②與治療組比較，P<0.05。

薏苡仁是禾本科植物的成熟種仁，性甘、淡、微寒，歸脾、胃、肺經(jīng)，具有滲濕利水、健脾止瀉、舒筋、清熱排膿之功效。康萊特注射液(KLT)是薏苡仁提取物，主要成分為薏苡仁油，是抗腫瘤制劑?？等R特具有誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡，阻滯腫瘤細胞有絲分裂，逆轉(zhuǎn)腫瘤細胞多藥耐受性(MDR)，殺傷癌細胞，激活NK細胞和IL- 2的活性，促進巨噬細胞吞噬功能及脾淋巴細胞的增殖，顯著提高機體免疫力的功能[2]，配合放化療還可增效減毒，緩解疼痛，穩(wěn)定病情，抗癌癥惡病質(zhì)，提高癌癥患者的生活質(zhì)量[3]，并在預(yù)防腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移中具有重要的意義。張愛琴等[4]通過測定Lewis肺癌小鼠外周血中TNF-α、IL-1、IL-6 的活性，探討康萊特注射液在抗腫瘤的同時對機體免疫功能的影響，結(jié)果顯示康萊特注射液不僅有殺滅腫瘤細胞作用，而且對機體的免疫器官及免疫功能也具有保護作用。吳巖等[5]的研究也顯示康萊特注射液在抗腫瘤的同時能通過提高T細胞增殖活力，調(diào)節(jié)IL-2、NF-κB等因子的表達，達到增強機體免疫功能的目的。

隨著腫瘤免疫學(xué)及分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，人們逐漸認識到，惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)與機體的免疫功能缺陷有關(guān)，尤其與細胞免疫功能抑制有關(guān)[6]?？鼓[瘤免疫以細胞免疫為主，體液免疫起一定協(xié)同作用[7]。T 淋巴細胞來源于骨髓淋巴樣干細胞，在胸腺中發(fā)育成熟后進入外周血液循環(huán)，約占外周血淋巴細胞的70%，是免疫應(yīng)答最為重要的參與者，主要執(zhí)行細胞免疫的功能，在殺傷靶細胞、免疫調(diào)節(jié)及免疫監(jiān)視方面具有極其重要的作用[8]。T 細胞在發(fā)育的不同階段，細胞膜上均表達一些相對穩(wěn)定的分子標(biāo)記，從而成為鑒定及分離 T 淋巴細胞亞群的重要依據(jù)。依據(jù)白細胞分化抗原的表達可大致將外周血成熟的T淋巴細胞(CD3+T)分為 CD4+T 淋巴細胞和CD8+T淋巴細胞。CD4+T淋巴細胞識別MHCⅡ類分子所提呈的外源性抗原肽，活化后主要分化為輔助性T淋巴細胞(Th)，具有直接殺傷腫瘤細胞及免疫記憶功能，在細胞免疫中起重要作用；而CD8+T淋巴細胞，它識別MHCⅠ類分子所提呈的內(nèi)源性抗原肽，活化后主要分化為細胞毒性T淋巴細胞(CTL)等，主要介導(dǎo)體液免疫。兩者相互協(xié)調(diào)、相互制約而共同參與對免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用[9]。CD4+/CD8+比值反映宿主免疫調(diào)節(jié)的平衡，其比值降低表明細胞免疫功能低下[10]。CD4+CD25+Treg是目前已知的人體內(nèi)功能最為強大的具有免疫抑制功能的CD4+T細胞亞群，在誘導(dǎo)機體免疫耐受中發(fā)揮關(guān)鍵作用[11]，于1995年首次由Sakaguchi等[12]提出。CD4+CD25+Treg細胞主要通過抑制性調(diào)節(jié)CD8+T細胞和CD4+T細胞的輔助性作用，包括抗原提呈細胞(APC)和B細胞在內(nèi)的整個免疫系統(tǒng)的應(yīng)答；但是，其抑制作用只限于活化后的效應(yīng)細胞。Treg 抑制機體細胞免疫功能的機制主要包括4個途徑：①分泌TGF-β、IL-10等多種抑制性細胞因子的途徑。②通過顆粒蛋白酶A、B及穿孔素等殺死靶細胞。③破壞細胞代謝影響效應(yīng)細胞的功能:通過細胞間的縫隙連接將抑制性的第二信使 cAMP 導(dǎo)入效應(yīng)T細胞，干擾效應(yīng)T細胞的代謝；通過消耗 IL-2使效應(yīng)T細胞生長受抑制乃至凋亡；產(chǎn)生CD39及CD73引起細胞微環(huán)境中腺苷增加，繼而活化效應(yīng)T細胞表面的腺苷受體A2A，發(fā)揮抑制功能。④調(diào)節(jié)樹突狀細胞功能的途徑:Treg可通過自身表達的免疫抑制性分子影響樹突狀細胞的功能，而這些樹突狀細胞又能進一步促進Treg的分化和增殖[13]。因此，Treg在腫瘤的發(fā)生與發(fā)展中起了很重要的作用。

免疫球蛋白識別并特異性結(jié)合抗原發(fā)揮免疫效應(yīng)，對體液免疫應(yīng)答起主要作用。免疫球蛋白主要分布在體內(nèi)血清中或外分泌物中，測定其含量有助于了解人體的體液免疫功能，對臨床的診治有一定的指導(dǎo)意義。人類免疫球蛋白一般分為IgG、IgA、IgM、IgD、IgE 5種， 由于IgD、IgE含量甚微，故測定免疫球蛋白主要是以IgG、IgA、IgM為主。IgG約占血清免疫球蛋白總量的75%，是正常人血清中含量最多的一種免疫球蛋白，在特異性免疫中起重要作用；IgM主要分布在血液中，約占血清總免疫球蛋白的10%，也參與某些自身免疫病和Ⅱ、Ⅲ型超敏反應(yīng)的病理過程。IgM和IgA在抗感染中都有重要作用，通常免疫球蛋白含量過高或過低均對人體不利[14]。

本研究結(jié)果顯示，治療組及對照組化療前CD3+、CD4+比例，CD4+/CD8+比值均低于正常對照組，IgG、IgA、IgM含量較正常對照組無明顯變化，CD8+、CD4+CD25+Treg水平高于正常對照組。可能與晚期腫瘤患者本身存在的免疫抑制狀態(tài)有關(guān)。對照組化療后CD3+、CD4+比例，CD4+/CD8+比值，IgG、IgA、IgM含量均明顯低于化療前；而CD3+、CD4+比例，IgG、IgA、IgM等含量的變化在治療組不明顯，這與張斌等[15]的研究結(jié)果相近，即單純化療組化療后大部分的細胞免疫和體液免疫功能指標(biāo)明顯降低，康萊特聯(lián)合化療組化療后大部分的細胞免疫及體液免疫功能指標(biāo)無明顯變化。表明康萊特的聯(lián)合應(yīng)用減輕了化療對機體免疫系統(tǒng)的損傷，對晚期非小細胞肺癌化療患者細胞免疫及體液免疫功能均有保護作用。而CD4+CD25+Treg在治療組及對照組化療后均有下降趨勢，治療組降低趨勢更明顯，表明康萊特聯(lián)合應(yīng)用有降低免疫耐受的趨勢，其有關(guān)機制有待于基礎(chǔ)實驗進一步探討。

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Regulatory effect of Kanglaite Injection on immune function in patients with non small cell lung cancer treated with chemotherapy

Deng Xinna,Zhao Shufang,Zhao Haijing,Yan Yonglong, He Liya, Zhang Hongzhen

(Hebei General Hospital,Shijiazhuang 050051, Hebei, China)

Objective It is to explore the changes of T cell subsets and CD4+CD25+Treg cells and immunoglobulin in blood of patients with advanced non small cell lung cancer, and to observe the influence of Kanglaite injection (KLT)combined with chemotherapy on immune function of these patients. Methods 68 cases of patients with advanced non small cell lung cancer were randomly divided into 2 groups, the control group was treated with docetaxel combined with sisplatin, and was not given KLT or other therapy which could improve immune function, and the treatment group was treated with KLT 200 mL by drip intravenous infusion for 14 days on the basis of control group's treatment. 21 days was one treatment cycles, after two cycles, the changes of T cell subsets and immunoglobulin were observed. 30 cases of healthy people were selected as normal control group. Results Compared with that before chemotherapy in normal control group, the differences in the levels of T cell subsets CD3+, CD4+, CD8+, CD4+/CD8+and the levels of CD4+CD25+Treg cell were significant in treatment group and control group (Pall<0.05). After chemotherapy the differences in immunoglobulin and T cell subsets of CD3+, CD4+, CD8+, CD4+/CD8+in control group and CD4+CD25+Treg in treatment group after treatment were significant (Pall<0.05). There were significant differences in CD3+, CD4+, CD8+, CD4+/CD8+and IgG between control group and treatment group after chemotherapy(P<0.05). Conclusion Kanglaite injection can protect immune function in patients with advanced non small cell lung cancer and reduce the immune tolerance.

non small cell lung cancer;Kanglaite;immune function; immune tolerance; chemotherapy

鄧新娜,女,主治醫(yī)師,碩士，從事腫瘤的綜合治療。

張洪珍，E-mail：dengxinna@sina.com

河北省中醫(yī)藥管理局資助項目(2013031)

10.3969/j.issn.1008-8849.2014.34.002

R734.2

A

1008-8849(2014)34-3767-04

2014-03-05