趙彬+王玉芳+陳桂華+張晉霞+李世英+劉玉玲+張玉芹+劉斌

[摘要] 目的 探討依達(dá)拉奉對(duì)腦出血大鼠血腫周圍組織NF-κB p65蛋白表達(dá)的影響。 方法 108只健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、腦出血組和依達(dá)拉奉治療組，其中腦出血組和依達(dá)拉奉治療組又分為3 h、6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d、7 d 8個(gè)亞組，每組6只。采用大鼠尾動(dòng)脈自體不凝血50 μL注入尾狀核區(qū)建立腦出血模型。依達(dá)拉奉治療組于模型制作成功后2 h開始腹腔內(nèi)注射3 mg/kg依達(dá)拉奉，1次/d。免疫組化法檢測(cè)NF-κB p65蛋白表達(dá)變化。 結(jié)果 與腦出血組相比，依達(dá)拉奉治療組于出血后 6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d、7 d血腫周圍組織NF-κB p65蛋白表達(dá)均減少（P < 0.05或P < 0.01）。 結(jié)論 依達(dá)拉奉對(duì)腦出血后血腫周圍腦組織損傷有保護(hù)作用，可能與其抑制NF-κB p65蛋白表達(dá)有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 腦出血；NF-κB p65蛋白；依達(dá)拉奉

[中圖分類號(hào)] R743.34[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A[文章編號(hào)] 1673-7210（2014）05（c）-0017-03

Effect of Edaravone on NF-κB p65 protein expression in perihematoma of rats with intracerebral hemorrhage

ZHAO Bin1 WANG Yufang2 CHEN Guihua2 ZHANG Jinxia2 LI Shiying2 LIU Yuling2 ZHANG Yuqin2 LIU Bin2

1.School Infirmary, Hebei United University, Hebei Province, Tangshan 063000, China; 2.The First Department of Neurology, the Affiliated Hospital of Hebei United University, Hebei Province, Tangshan 063000, China

[Abstract] Objective To investigate the effect of Edaravone on the NF-κB p65 protein expression in perihematoma of rats with intracerebral hemorrhage (ICH). Methods 108 healthy adult Wistar rats were randomly divided into normal group, sham group, ICH group, Edaravon treatment group. The ICH group and Edaravon treatment group were randomly divided into 3 h, 6 h, 12 h, 1 d, 2 d, 3 d, 5 d, 7 d subgroups respectively after ICH, each group had 6 rats. ICH models were prepared by injecting 50 μL of autogenous blood into the right caudate nucleus of rats. Edaravon treatment group after ICH 2 h were given 3 mg/kg Edaravon by intraperitoneal injection, 1 time/d. The expression of NF-κB p65 protein was observed by immunohistochemistry. Results Compared with ICH group, the expression of NF-κB p65 protein in Edaravone treatment group were weakened at 6 h, 12 h, 1 d, 2 d, 3 d, 5 d and 7 d after ICH (P < 0.05 or P < 0.01). Conclusion Edaravon has a protective effect on perihematoma brain tissues after ICH, it may be related to the inhibition of NF-κB p65 protein expression.

[Key words] Cerebral hemorrhage; NF-κB p65 protein; Edaravone

腦出血（intracerebral hemorrhage，ICH）是神經(jīng)內(nèi)科常見病、多發(fā)病，嚴(yán)重威脅人類的生命和健康。腦出血后影響患者存活，且致殘率高，主要原因包括腦血腫對(duì)血腫周圍神經(jīng)組織的物理損傷以及血腫的占位效應(yīng)，另外還與血腫周圍神經(jīng)組織的繼發(fā)性損害有關(guān)[1]。腦出血后的繼發(fā)性損害機(jī)制較復(fù)雜，許多病理生理機(jī)制參與其中。有研究表明，炎性反應(yīng)在腦損傷的發(fā)展中具有重要作用[2]。核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB（nuclear factor kappa-B）是一種具有多種調(diào)節(jié)作用的免疫反應(yīng)蛋白，與機(jī)體的免疫應(yīng)答、細(xì)胞的增生和凋亡及炎性反應(yīng)等重要的病理生理過程密切相關(guān)，其中，NF-κB p65是重要的核轉(zhuǎn)錄因子，在腦出血后損傷中具有重要作用[3]。依達(dá)拉奉（Edaravone）是一種新型腦保護(hù)劑，可抑制脂質(zhì)過氧化，清除自由基，從而抑制神經(jīng)細(xì)胞的氧化損傷，具有抗細(xì)胞凋亡和神經(jīng)保護(hù)作用[4]。研究表明，依達(dá)拉奉在治療腦出血方面效果確切[5]。本研究通過制作腦出血大鼠模型，并給予依達(dá)拉奉藥物治療，觀察依達(dá)拉奉對(duì)腦出血大鼠血腫周圍組織NF-κB p65蛋白表達(dá)的影響，進(jìn)一步探討依達(dá)拉奉對(duì)腦出血后腦組織損害的保護(hù)機(jī)制，為依達(dá)拉奉臨床治療腦出血提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康雄性Wistar大鼠108只，體重250～300 g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，合格證號(hào)：Scxk（京）-2013-0001。

1.2 主要試劑

NF-κB p65多克隆抗體由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供。依達(dá)拉奉注射液由南京先聲藥業(yè)公司生產(chǎn)，批號(hào)：040181，規(guī)格10 mg/5 mL。

1.3 模型制作

按照李慧等[6]報(bào)道的方法制作腦出血大鼠模型。術(shù)前大鼠需禁食、水，腹腔注射100 g/L水合氯醛麻醉，然后俯臥位固定于立體定位儀上，消毒切皮暴露前囟后，以其中央為原點(diǎn)，取其后方1.4 mm，中線右側(cè)旁3.2 mm處鉆一小孔（直徑為1 mm）至顱骨下硬膜，鼠尾消毒后斷尾取自體血50 μL，用微量注射器沿鉆孔方向垂直進(jìn)針，深約5.6 mm，緩慢均速將自體血（50 μL）推注入腦，留針10 min后退出，并用醫(yī)用骨蠟封閉骨孔，縫合頭皮，加壓包扎尾部。假手術(shù)組除不注射自體血外，余操作同上。模型成功的標(biāo)準(zhǔn)：①大鼠爬行時(shí)向左側(cè)傾倒或按逆時(shí)針方向轉(zhuǎn)圈；②提尾時(shí)大鼠左側(cè)前肢內(nèi)收屈曲。

1.4 分組及給藥方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、腦出血模型組（腦出血組）和依達(dá)拉奉治療組，其中，腦出血組和依達(dá)拉奉治療組根據(jù)動(dòng)物處死時(shí)間分為3 h、6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d和7 d共8個(gè)亞組，每組6只。依達(dá)拉奉治療組于模型制作成功后2 h開始按3 mg/kg腹腔內(nèi)注射依達(dá)拉奉，1次/d，用藥到試驗(yàn)結(jié)束。假手術(shù)組和腦出血組腹腔內(nèi)注射等量生理鹽水。

1.5 標(biāo)本制備

各組取相應(yīng)時(shí)相點(diǎn)大鼠，以100 g/L水合氯醛（300 mg/kg）腹腔麻醉致死，仰臥固定于操作臺(tái)上，切皮打開胸腔，暴露心臟，灌注針從心尖插入至左心室，并剪開右心耳，快速滴入37℃生理鹽水液約300 mL，去除血污后滴入固定液（4℃多聚甲醛400 mL）。待鼠尾完全僵直，迅速斷頭后取出腦組織，于4%多聚甲醛溶液中固定12～24 h，進(jìn)行脫水透明及石蠟包埋。冠狀面連續(xù)切片（厚度約3 μm），用經(jīng)多聚賴氨酸處理的載玻片撈片，晾干后置于60℃的烤箱中烘烤備用。

1.6 NF-κB p65蛋白檢測(cè)

采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)NF-κB p65蛋白的表達(dá)情況，操作步驟嚴(yán)格按試劑說明書進(jìn)行。陽性標(biāo)準(zhǔn)：鏡下觀察，NF-κB p65因子染色呈棕黃色顆粒，位于胞漿內(nèi)。取血腫周圍腦組織不重疊的6個(gè)視野，于高倍鏡下觀察，用高清晰度彩色病理圖像分析系統(tǒng)計(jì)數(shù)NF-κB p65的陽性細(xì)胞數(shù)，取其平均值。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

以Excel數(shù)據(jù)庫(kù)整理后用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

正常組和假手術(shù)組只見少量的NF-κB p65蛋白陽性細(xì)胞表達(dá)，由于數(shù)量極少，故未進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。腦出血組在腦出血后3 h即有NF-κB p65陽性細(xì)胞表達(dá)，隨著出血時(shí)間的延長(zhǎng)陽性細(xì)胞表達(dá)逐漸增多，出血后12 h明顯增多，出血后2 d表達(dá)達(dá)高峰，出血后3 d陽性細(xì)胞表達(dá)逐漸減少。依達(dá)拉奉治療組于出血后3 h有NF-κB p65陽性細(xì)胞表達(dá)，出血后2 d表達(dá)最高，出血后3 d開始下降。與腦出血組相比，依達(dá)拉奉治療組NF-κB p65蛋白陽性細(xì)胞在腦出血后3 h未見減少（P > 0.05），在腦出血后6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d及7 d時(shí)表達(dá)均明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05或P < 0.01）。見表1。

3 討論

核因子NF-κB是從B細(xì)胞核提取物中發(fā)現(xiàn)的一種能與免疫球蛋白κ輕鏈基因的增強(qiáng)子κB序列特異結(jié)合的蛋白因子[7]，最為典型的NF-κB是由P50和P65（RelA）亞基組成，具有多種調(diào)節(jié)作用。通常情況下，NF-κB與抑制蛋白相結(jié)合以非活性形式存在于胞漿內(nèi)，在細(xì)胞接受胞外氧自由基等刺激信號(hào)后，NF-κB可被激活而迅速由胞漿移向胞核，與相應(yīng)DNA上的κB序列發(fā)生特異性結(jié)合，促進(jìn)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而在細(xì)胞的增殖、分化、細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)以及炎癥的發(fā)生等方面發(fā)揮重要作用[8-9]。NF-κB在多種疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要的作用。顧萍等[10]建立大鼠腦出血模型發(fā)現(xiàn)，NF-κB p65蛋白陽性細(xì)胞于術(shù)后6 h開始增多，48 h達(dá)高峰，持續(xù)到96 h仍有較多表達(dá)，與細(xì)胞凋亡呈正相關(guān)。本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，大鼠腦出血后3 h血腫周圍腦組織即有少量NF-κ B p65蛋白陽性表達(dá)，在術(shù)后6 h增多，2 d達(dá)高峰，3 d后逐漸下降。同時(shí)，本研究觀察到NF-κB p65蛋白陽性細(xì)胞主要表達(dá)于細(xì)胞凋亡較重的區(qū)域。本研究結(jié)果與顧萍等[10]的報(bào)道結(jié)果基本一致。說明NF-κB p65參與了腦出血后血腫周圍腦組織細(xì)胞損傷的病理過程。

依達(dá)拉奉是一親脂性基團(tuán)，其相對(duì)分子量為174.20，在體內(nèi)以陰離子形式存在，可轉(zhuǎn)移一個(gè)電子給自由基而產(chǎn)生依達(dá)拉奉基團(tuán)，切斷脂質(zhì)過氧化反應(yīng)鏈，對(duì)神經(jīng)細(xì)胞具有保護(hù)作用[11]。依達(dá)拉奉是目前臨床試驗(yàn)證明唯一有效的自由基清除劑，在包括腦血管疾病、顱腦外傷等在內(nèi)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中發(fā)揮重要的神經(jīng)保護(hù)作用[12-13]。依達(dá)拉奉可抑制腦出血后血腫周圍神經(jīng)細(xì)胞凋亡，對(duì)腦出血后腦組織起到神經(jīng)保護(hù)作用[14-15]。本研究通過對(duì)腦出血大鼠進(jìn)行依達(dá)拉奉干預(yù)，結(jié)果表明，依達(dá)拉奉治療組NF-κB p65蛋白陽性表達(dá)在腦出血后6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d及7 d均明顯減少。提示依達(dá)拉奉可通過抑制NF-κB p65蛋白的表達(dá)，對(duì)腦出血后腦組織損傷有保護(hù)作用。

[參考文獻(xiàn)]

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（收稿日期：2014-03-12本文編輯：程銘）

[基金項(xiàng)目] 河北省唐山市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃課題(編號(hào)10150204A-24)。

[通訊作者] 劉斌（1964.9-），男，碩士，主任醫(yī)師；研究方向：腦血管病基礎(chǔ)與臨床。

1.4 分組及給藥方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、腦出血模型組（腦出血組）和依達(dá)拉奉治療組，其中，腦出血組和依達(dá)拉奉治療組根據(jù)動(dòng)物處死時(shí)間分為3 h、6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d和7 d共8個(gè)亞組，每組6只。依達(dá)拉奉治療組于模型制作成功后2 h開始按3 mg/kg腹腔內(nèi)注射依達(dá)拉奉，1次/d，用藥到試驗(yàn)結(jié)束。假手術(shù)組和腦出血組腹腔內(nèi)注射等量生理鹽水。

1.5 標(biāo)本制備

各組取相應(yīng)時(shí)相點(diǎn)大鼠，以100 g/L水合氯醛（300 mg/kg）腹腔麻醉致死，仰臥固定于操作臺(tái)上，切皮打開胸腔，暴露心臟，灌注針從心尖插入至左心室，并剪開右心耳，快速滴入37℃生理鹽水液約300 mL，去除血污后滴入固定液（4℃多聚甲醛400 mL）。待鼠尾完全僵直，迅速斷頭后取出腦組織，于4%多聚甲醛溶液中固定12～24 h，進(jìn)行脫水透明及石蠟包埋。冠狀面連續(xù)切片（厚度約3 μm），用經(jīng)多聚賴氨酸處理的載玻片撈片，晾干后置于60℃的烤箱中烘烤備用。

1.6 NF-κB p65蛋白檢測(cè)

采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)NF-κB p65蛋白的表達(dá)情況，操作步驟嚴(yán)格按試劑說明書進(jìn)行。陽性標(biāo)準(zhǔn)：鏡下觀察，NF-κB p65因子染色呈棕黃色顆粒，位于胞漿內(nèi)。取血腫周圍腦組織不重疊的6個(gè)視野，于高倍鏡下觀察，用高清晰度彩色病理圖像分析系統(tǒng)計(jì)數(shù)NF-κB p65的陽性細(xì)胞數(shù)，取其平均值。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

以Excel數(shù)據(jù)庫(kù)整理后用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

正常組和假手術(shù)組只見少量的NF-κB p65蛋白陽性細(xì)胞表達(dá)，由于數(shù)量極少，故未進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。腦出血組在腦出血后3 h即有NF-κB p65陽性細(xì)胞表達(dá)，隨著出血時(shí)間的延長(zhǎng)陽性細(xì)胞表達(dá)逐漸增多，出血后12 h明顯增多，出血后2 d表達(dá)達(dá)高峰，出血后3 d陽性細(xì)胞表達(dá)逐漸減少。依達(dá)拉奉治療組于出血后3 h有NF-κB p65陽性細(xì)胞表達(dá)，出血后2 d表達(dá)最高，出血后3 d開始下降。與腦出血組相比，依達(dá)拉奉治療組NF-κB p65蛋白陽性細(xì)胞在腦出血后3 h未見減少（P > 0.05），在腦出血后6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d及7 d時(shí)表達(dá)均明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05或P < 0.01）。見表1。

3 討論

核因子NF-κB是從B細(xì)胞核提取物中發(fā)現(xiàn)的一種能與免疫球蛋白κ輕鏈基因的增強(qiáng)子κB序列特異結(jié)合的蛋白因子[7]，最為典型的NF-κB是由P50和P65（RelA）亞基組成，具有多種調(diào)節(jié)作用。通常情況下，NF-κB與抑制蛋白相結(jié)合以非活性形式存在于胞漿內(nèi)，在細(xì)胞接受胞外氧自由基等刺激信號(hào)后，NF-κB可被激活而迅速由胞漿移向胞核，與相應(yīng)DNA上的κB序列發(fā)生特異性結(jié)合，促進(jìn)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而在細(xì)胞的增殖、分化、細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)以及炎癥的發(fā)生等方面發(fā)揮重要作用[8-9]。NF-κB在多種疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要的作用。顧萍等[10]建立大鼠腦出血模型發(fā)現(xiàn)，NF-κB p65蛋白陽性細(xì)胞于術(shù)后6 h開始增多，48 h達(dá)高峰，持續(xù)到96 h仍有較多表達(dá)，與細(xì)胞凋亡呈正相關(guān)。本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，大鼠腦出血后3 h血腫周圍腦組織即有少量NF-κ B p65蛋白陽性表達(dá)，在術(shù)后6 h增多，2 d達(dá)高峰，3 d后逐漸下降。同時(shí)，本研究觀察到NF-κB p65蛋白陽性細(xì)胞主要表達(dá)于細(xì)胞凋亡較重的區(qū)域。本研究結(jié)果與顧萍等[10]的報(bào)道結(jié)果基本一致。說明NF-κB p65參與了腦出血后血腫周圍腦組織細(xì)胞損傷的病理過程。

依達(dá)拉奉是一親脂性基團(tuán)，其相對(duì)分子量為174.20，在體內(nèi)以陰離子形式存在，可轉(zhuǎn)移一個(gè)電子給自由基而產(chǎn)生依達(dá)拉奉基團(tuán)，切斷脂質(zhì)過氧化反應(yīng)鏈，對(duì)神經(jīng)細(xì)胞具有保護(hù)作用[11]。依達(dá)拉奉是目前臨床試驗(yàn)證明唯一有效的自由基清除劑，在包括腦血管疾病、顱腦外傷等在內(nèi)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中發(fā)揮重要的神經(jīng)保護(hù)作用[12-13]。依達(dá)拉奉可抑制腦出血后血腫周圍神經(jīng)細(xì)胞凋亡，對(duì)腦出血后腦組織起到神經(jīng)保護(hù)作用[14-15]。本研究通過對(duì)腦出血大鼠進(jìn)行依達(dá)拉奉干預(yù)，結(jié)果表明，依達(dá)拉奉治療組NF-κB p65蛋白陽性表達(dá)在腦出血后6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d及7 d均明顯減少。提示依達(dá)拉奉可通過抑制NF-κB p65蛋白的表達(dá)，對(duì)腦出血后腦組織損傷有保護(hù)作用。

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（收稿日期：2014-03-12本文編輯：程銘）

[基金項(xiàng)目] 河北省唐山市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃課題(編號(hào)10150204A-24)。

[通訊作者] 劉斌（1964.9-），男，碩士，主任醫(yī)師；研究方向：腦血管病基礎(chǔ)與臨床。

1.4 分組及給藥方法

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、腦出血模型組（腦出血組）和依達(dá)拉奉治療組，其中，腦出血組和依達(dá)拉奉治療組根據(jù)動(dòng)物處死時(shí)間分為3 h、6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d和7 d共8個(gè)亞組，每組6只。依達(dá)拉奉治療組于模型制作成功后2 h開始按3 mg/kg腹腔內(nèi)注射依達(dá)拉奉，1次/d，用藥到試驗(yàn)結(jié)束。假手術(shù)組和腦出血組腹腔內(nèi)注射等量生理鹽水。

1.5 標(biāo)本制備

各組取相應(yīng)時(shí)相點(diǎn)大鼠，以100 g/L水合氯醛（300 mg/kg）腹腔麻醉致死，仰臥固定于操作臺(tái)上，切皮打開胸腔，暴露心臟，灌注針從心尖插入至左心室，并剪開右心耳，快速滴入37℃生理鹽水液約300 mL，去除血污后滴入固定液（4℃多聚甲醛400 mL）。待鼠尾完全僵直，迅速斷頭后取出腦組織，于4%多聚甲醛溶液中固定12～24 h，進(jìn)行脫水透明及石蠟包埋。冠狀面連續(xù)切片（厚度約3 μm），用經(jīng)多聚賴氨酸處理的載玻片撈片，晾干后置于60℃的烤箱中烘烤備用。

1.6 NF-κB p65蛋白檢測(cè)

采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)NF-κB p65蛋白的表達(dá)情況，操作步驟嚴(yán)格按試劑說明書進(jìn)行。陽性標(biāo)準(zhǔn)：鏡下觀察，NF-κB p65因子染色呈棕黃色顆粒，位于胞漿內(nèi)。取血腫周圍腦組織不重疊的6個(gè)視野，于高倍鏡下觀察，用高清晰度彩色病理圖像分析系統(tǒng)計(jì)數(shù)NF-κB p65的陽性細(xì)胞數(shù)，取其平均值。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

以Excel數(shù)據(jù)庫(kù)整理后用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

正常組和假手術(shù)組只見少量的NF-κB p65蛋白陽性細(xì)胞表達(dá)，由于數(shù)量極少，故未進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。腦出血組在腦出血后3 h即有NF-κB p65陽性細(xì)胞表達(dá)，隨著出血時(shí)間的延長(zhǎng)陽性細(xì)胞表達(dá)逐漸增多，出血后12 h明顯增多，出血后2 d表達(dá)達(dá)高峰，出血后3 d陽性細(xì)胞表達(dá)逐漸減少。依達(dá)拉奉治療組于出血后3 h有NF-κB p65陽性細(xì)胞表達(dá)，出血后2 d表達(dá)最高，出血后3 d開始下降。與腦出血組相比，依達(dá)拉奉治療組NF-κB p65蛋白陽性細(xì)胞在腦出血后3 h未見減少（P > 0.05），在腦出血后6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d及7 d時(shí)表達(dá)均明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05或P < 0.01）。見表1。

3 討論

核因子NF-κB是從B細(xì)胞核提取物中發(fā)現(xiàn)的一種能與免疫球蛋白κ輕鏈基因的增強(qiáng)子κB序列特異結(jié)合的蛋白因子[7]，最為典型的NF-κB是由P50和P65（RelA）亞基組成，具有多種調(diào)節(jié)作用。通常情況下，NF-κB與抑制蛋白相結(jié)合以非活性形式存在于胞漿內(nèi)，在細(xì)胞接受胞外氧自由基等刺激信號(hào)后，NF-κB可被激活而迅速由胞漿移向胞核，與相應(yīng)DNA上的κB序列發(fā)生特異性結(jié)合，促進(jìn)相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而在細(xì)胞的增殖、分化、細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)以及炎癥的發(fā)生等方面發(fā)揮重要作用[8-9]。NF-κB在多種疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要的作用。顧萍等[10]建立大鼠腦出血模型發(fā)現(xiàn)，NF-κB p65蛋白陽性細(xì)胞于術(shù)后6 h開始增多，48 h達(dá)高峰，持續(xù)到96 h仍有較多表達(dá)，與細(xì)胞凋亡呈正相關(guān)。本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，大鼠腦出血后3 h血腫周圍腦組織即有少量NF-κ B p65蛋白陽性表達(dá)，在術(shù)后6 h增多，2 d達(dá)高峰，3 d后逐漸下降。同時(shí)，本研究觀察到NF-κB p65蛋白陽性細(xì)胞主要表達(dá)于細(xì)胞凋亡較重的區(qū)域。本研究結(jié)果與顧萍等[10]的報(bào)道結(jié)果基本一致。說明NF-κB p65參與了腦出血后血腫周圍腦組織細(xì)胞損傷的病理過程。

依達(dá)拉奉是一親脂性基團(tuán)，其相對(duì)分子量為174.20，在體內(nèi)以陰離子形式存在，可轉(zhuǎn)移一個(gè)電子給自由基而產(chǎn)生依達(dá)拉奉基團(tuán)，切斷脂質(zhì)過氧化反應(yīng)鏈，對(duì)神經(jīng)細(xì)胞具有保護(hù)作用[11]。依達(dá)拉奉是目前臨床試驗(yàn)證明唯一有效的自由基清除劑，在包括腦血管疾病、顱腦外傷等在內(nèi)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中發(fā)揮重要的神經(jīng)保護(hù)作用[12-13]。依達(dá)拉奉可抑制腦出血后血腫周圍神經(jīng)細(xì)胞凋亡，對(duì)腦出血后腦組織起到神經(jīng)保護(hù)作用[14-15]。本研究通過對(duì)腦出血大鼠進(jìn)行依達(dá)拉奉干預(yù)，結(jié)果表明，依達(dá)拉奉治療組NF-κB p65蛋白陽性表達(dá)在腦出血后6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d及7 d均明顯減少。提示依達(dá)拉奉可通過抑制NF-κB p65蛋白的表達(dá)，對(duì)腦出血后腦組織損傷有保護(hù)作用。

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