張士君

臨床生化檢驗中改良終點法和原終點法的應用比較

張士君

目的比較改良終點法和原終點法在臨床生化檢驗中的應用。方法以氧化酶法對血清葡萄糖進行測定為例, 依據(jù)美國國家臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)制定的評價方案, 比較分析改良終點法和原終點法的相關性, 并評價二者的精密度。結(jié)果改良終點法和原終點法的檢測結(jié)果差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；與終點法比較, 正常濃度下改良終點法測定的批內(nèi)CV和總CV明顯更高, 異常濃度下明顯更低, 差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結(jié)論臨床生化檢驗中改良終點法的精密度明顯高于原終點法, 臨床推廣應用價值顯著。

生化檢驗；改良終點法；原終點法

終點法是臨床生化檢驗中最常用的一種檢測方法, 它計算待測物濃度的方法為混合樣品和試劑, 反應一定時間后達到平衡點(終點)。一點終點法和兩點終點法是終點法的兩個主要類型［1］, 依據(jù)方法學理論, 作者在對程序進行測定的過程中將改良一點終點法設計了出來, 同時以氧化酶法對血清葡萄糖進行測定為例, 依據(jù)NCCLS制定的評價方案, 比較分析了改良終點法和原終點法的相關性, 并評價了二者的精密度, 現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1檢驗材料 所用儀器為MODULAR DPP 全自動生化分析儀, 在測定時保證儀器的工作狀態(tài)良好；所用試劑為Lot No.522 UN/2標準血清和Level2-780UN、Level 3-597UE質(zhì)控血清, 所用試劑盒為液體單試劑型(氧化酶法)葡萄糖測定試劑盒；所用標本為血清標本, 這些標本均沒有溶血、脂濁等, 1 h內(nèi)完成所有檢測；葡萄糖標準液的精確規(guī)格［2.00 g/dl (111.00 mmol/L)］。

1.2檢驗方法

1.2.1相關性比較 定標時運用RANDOX標準血清, 室內(nèi)質(zhì)控在每次測定中必不可少。依據(jù)NCCLS 制定的評價方案,每天將10份臨床標本收集起來, 這些標本的葡萄糖濃度有高、中、低三個類型, 按1-10號順序分別運用改良終點法與原終點法測定, 然后按10-1的順序分別運用改良終點法與原終點法測定, 取兩次測量結(jié)果的均值。進行10 d的連續(xù)測量, 標本數(shù)為200份, 運用配對t檢驗及直線回歸分析兩種方法所得結(jié)果。改良終點法和原終點法的測光點、波長、樣品量、試劑量R1、反應方向、單點定標參數(shù)具體見表1。

表1 改良終點法與原終點法的程序參數(shù)設置(葡萄糖測定)

1.2.2精密度 在對精密度進行測算時嚴格依據(jù)NCCLS制定的評價方案, 將2份質(zhì)控血清選取出來, 其中一份具有正常的濃度, 另一份具有異常的濃度, 對其進行復溶, 復溶時嚴格依據(jù)說明書, 然后將其在塑料管中分裝, 每管250 μl,在-20℃的溫度下將封閉管口的兩種液體冷凍保存, 每次使用前和使用后分別讓其融化到室溫和丟棄, 每次使用過程中雙份測定每份濃度的質(zhì)控血清, 試驗做到定時定點, 2批/d,上、下午各1次, 共進行20 d的測定, 同時進行室內(nèi)質(zhì)控,計算出批內(nèi)的不精密度, 然后計算出總不精密度。

1.3統(tǒng)計學方法 采用統(tǒng)計學軟件SPSS17.0處理本次研究中各項臨床指標。計量資料以均數(shù)±標準差表示,均采用配對t檢驗。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1相關性 回歸方程為Y=1.0112 X-0.0381, r=0.9992(n=100),改良終點法與原終點法測定結(jié)果之間的差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

2.2精密度 正常濃度下改良終點法測定的批內(nèi)CV和總CV均明顯比原終點法高, 差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05), 異常濃度下改良終點法測定的批內(nèi)CV和總CV均明顯比原終點法低, 差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。具體見表2。

表2 改良終點法與原終點法測定的精密度結(jié)果比較

3 討論

近年來, 在生化檢驗中, 終點法得到了日益廣泛的應用,總蛋白雙縮脲法、葡萄糖氧化酶法等是臨床生化檢驗中的常用實驗, 極具代表性［2］。通常情況下, 臨床手工操作完成終點法。在對終點法進行改良的過程中嚴格依據(jù)了其檢測原理,即減半混合樣品和試劑量, 前提是樣品和試劑的比例保持不變, 在終點前(儀器測光前)將等量的水加入其中均勻稀釋,然后對其吸光度進行測定。在將水加入第二試劑的情況下,在全自動生化分析儀上, 可以使單試劑終點法和雙試劑終點法相互轉(zhuǎn)換；在第三試劑中注水的情況下, 雙試劑終點法和三試劑終點法也可以相互轉(zhuǎn)換。

隨著全自動生化分析儀的日益廣泛的應用, 生化分析的智能化、微量化日益突出, 目前廣大檢驗工作者的一個工作和研究重點就是在對檢測方法進行有效改良的過程中運用先進的檢測設備, 從而將試劑成本減少到最低限度［3］。作者在臨床生化檢驗工作中對終點法進行了改良, 經(jīng)室內(nèi)質(zhì)控及室間質(zhì)量評價所獲取的臨床效果是令人極為滿意的, 通常情況下不需要稀釋高濃度標本, 這是因為測定線性范圍較寬, 同時可以將原終點法中所使用的試劑量減半, 從而達到了將實際成本減少到最低限度的目的。

綜上所述, 在臨床生化檢驗中高濃度時改良終點法的精密度比原終點法優(yōu), 極大節(jié)約了成本, 值得在臨床廣為推廣。

［1］ 高小文, 孔花娟, 李筱, 等.葡萄糖氧化酶雙試劑終點法測量模式的系統(tǒng)分析.檢驗醫(yī)學與臨床 , 2014(1):49-51.

［2］ 魯鴻昊, 高靜, 董振南, 等.終點法測定缺血修飾白蛋白(IMA)的評價及其應用研究.標記免疫分析與臨床, 2012, 19(1):44-46.

［3］ 黃健, 張劉冬.改良終點法在臨床生化檢驗中的應用探討.海南醫(yī)學, 2010, 21(22):46-47.

2014-06-04］

256410 山東省淄博市桓臺縣果里醫(yī)院檢驗科