朱明恒

HPLC 法測(cè)定宮外孕 I號(hào)方中芍藥苷的含量

朱明恒

目的 采用高效液相色譜法 (HPLC)測(cè)定宮外孕 I號(hào)方中芍藥苷的含量。方法 采用Kromasil C18色 譜 柱 (250 mm×4.6 mm, 5 μm), 流 動(dòng) 相 乙 腈 -0.1% 磷 酸 (15 ：85), 流 速 0.8 ml/min, 柱 溫30℃。結(jié)果 芍藥苷在 0.01032～0.16512 mg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系 , 相關(guān)系數(shù)為 0.9999, 平均加樣回收率為 92.75%, RSD 為 1.03%。結(jié)論 本方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確 , 可用于宮外孕 I號(hào)方中芍藥苷的含量測(cè)定。

宮外孕 I號(hào)方 ；高效液相色譜法 ；芍藥苷 ；含量測(cè)定

宮外孕 I號(hào)方是中醫(yī)治療宮外孕的代表方劑 , 在本院的臨床應(yīng)用亦已有二十余年的歷史。原方由赤芍、丹參、桃仁三味藥材組成 , 具有活血祛瘀 , 消癥止痛的功效 , 臨床用于宮外孕破損期且未凝成血腫包塊者的治療。芍藥苷是方中主藥赤芍所含的主要有效成分之一 , 具有降低血液黏度、抗血小板聚集、擴(kuò)張血管等多種作用［1］。本文參考相關(guān)文獻(xiàn) , 采用高效液相色譜法 (HPLC)對(duì)提取液中的芍藥苷進(jìn)行含量測(cè)定 , 為該方的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

島津 LC-20AT 高效液相色譜儀 ；Sartorius CP224S 型電子分析天平。芍藥苷對(duì)照品 (中國(guó)藥品生物制品檢定所 , 批號(hào) 110736-200934)；宮外孕 I號(hào) (本院中藥煎藥室自制 , 批號(hào) 20120703, 20120710, 20120717)；甲醇 , 乙腈為色譜純 , 其余為分析純。

2 方法與結(jié)果

2. 1 色譜條件 色譜柱 ：Kromasil C18色譜柱 (250 mm×4.6 mm, 5 μm), 流 動(dòng) 相 ：乙 腈 -0.1% 磷 酸 (15 ：85), 檢 測(cè) 波 長(zhǎng) ：230 nm, 流速 0.8 ml/min, 柱溫 30℃ , 進(jìn)樣量 ：10 μl。

2. 2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷對(duì)照品 10.32 mg,置 50 ml容量瓶中 , 加甲醇溶解并稀釋至刻度 , 搖勻 , 得 1 ml含芍藥苷 0.2064 mg 的對(duì)照品溶液。

2. 3 供試品溶液的制備 精密量取本品 5 ml, 置 50 ml容量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 搖勻 , 濾過(guò) , 取續(xù)濾液即得。

2. 4 陰性樣品溶液的制備及空白試驗(yàn) 按處方組成除去赤芍 , 按工藝制成陰性樣品。取 5 ml按供試品溶液的制備方法制成陰性樣品溶液。吸取上述 3 種溶液 , 按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定 , 結(jié)果表明陰性樣品溶液在芍藥苷保留時(shí)間處無(wú)干擾峰。

2. 5 線性關(guān)系考察 精密吸取芍藥苷對(duì)照品溶液 0.5、1、2、4、8 ml, 置 10 ml量瓶中 , 加甲醇溶解并稀釋至刻度 , 搖勻。分別吸取上述溶液 10 μl, 注入液相色譜儀 , 按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定 , 以峰面積 Y 對(duì)進(jìn)樣量 X 進(jìn)行線性回歸分析 ,得 回 歸 方 程 Y=12772152X+65462, r=0.9999。表 明 芍 藥 苷在0.01032～0.16512 mg/ml范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2. 6 精密度試驗(yàn) 精密吸取濃度為 0.1032 mg/ml對(duì)照品溶液 10 μl, 重復(fù)進(jìn)樣 6 次 , 按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定 ,結(jié)果芍藥苷峰面積值的 RSD=0.62%, 表明儀器精密度良好。

2. 7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批樣品 6 份 , 照“2.3”項(xiàng)下方法制成供試品溶液 , 按“2.1”項(xiàng)下色譜條件平行測(cè)定 6 次。以芍藥苷的峰面積計(jì)算 , RSD=1.73%, 表明方法重復(fù)性良好。

2. 8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液 , 分別于 0、2、4、6、8、10 h 進(jìn)樣測(cè)定 , 結(jié)果芍藥苷峰面積的 RSD=1.86%, 表明供試品溶液在 10 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2. 9 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已知芍藥苷含量的樣品溶液 6 份 , 每份 2 ml, 分別加入對(duì)照品溶液各 3 ml, 照“2.3”項(xiàng)下方法制成供試品溶液 , 按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定 , 分別計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 (n=6)

2. 10 樣品含量測(cè) 定 分 別取批號(hào)為 20120703, 20120710, 20120717 的樣品 , 照“2.3”項(xiàng)下方法制成供試品溶液 , 按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定并計(jì)算含量 , 結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果 (n=3)

3 討論

［2-4］, 考察了不同比例乙腈 - 磷酸溶液作為流動(dòng)相時(shí)的分離效果 , 發(fā)現(xiàn)乙腈 -0.1% 磷酸溶液 (15:85)時(shí)分離效果最佳 , 峰形理想。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中 , 分別采用甲醇和乙醇作為提取溶劑［5,6］,結(jié)果表明以甲醇為溶劑時(shí)提取較完全 , 測(cè)得的芍藥苷含量較高 , 故選用甲醇作為提取溶劑。

本實(shí)驗(yàn)采用的處理方法簡(jiǎn)便 , 測(cè)定方法結(jié)果準(zhǔn)確 , 可用于宮外孕I號(hào)方的質(zhì)量控制。

參考文獻(xiàn)

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2014-04-29］

215002 南京醫(yī)科大學(xué)附屬蘇州醫(yī)院藥劑科