張明帥， 朱麗萍， 齊 新， 趙 倩， 吐魯洪·沙比爾， 倪 多， 張國(guó)慶

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院乳腺外科， 烏魯木齊 830011)

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，發(fā)病率逐年上升，但其發(fā)病及侵襲、轉(zhuǎn)移機(jī)制還未完全闡明。有資料表明，超過50%的原癌基因和癌基因產(chǎn)物都具有蛋白酪氨酸激酶活性，它們的異常表達(dá)將導(dǎo)致細(xì)胞增殖調(diào)節(jié)發(fā)生紊亂，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生、侵襲及轉(zhuǎn)移，與腫瘤新生血管的生成及腫瘤的化療抗性密切相關(guān)[1]。TAM受體是最新的一個(gè)受體酪氨酸激酶家族，包括Tyro3、Axl和Mer 3個(gè)成員，它們具有共同的配體生長(zhǎng)停滯特異性基因6蛋白(Gas6)。研究提示Axl在肺癌、腦膠質(zhì)瘤、肝細(xì)胞癌等惡性腫瘤的形成、侵襲以及轉(zhuǎn)移過程中扮演著重要的角色。當(dāng)Axl與其配體Gas6 結(jié)合時(shí)，激活受體本身的酪氨酸蛋白激酶活性，進(jìn)而催化下游分子，起到信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用[2]。研究顯示新疆維、漢民族乳腺癌患者臨床和病理特征不同，與漢族乳腺癌患者相比維吾爾族女性乳腺癌患者生育次數(shù)較多、原發(fā)腫塊較大、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目較多[3-6]。近年來新疆維、漢民族女性乳腺癌的發(fā)病率逐年上升，但是目前還沒有維、漢民族乳腺癌發(fā)病率的流行病學(xué)調(diào)查。目前國(guó)內(nèi)還未見關(guān)于Axl和Gas6的表達(dá)情況在不同民族乳腺癌患者間的表達(dá)情況的研究。因此，對(duì)比分析和研究影響新疆維、漢民族乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的危險(xiǎn)因素在少數(shù)民族地區(qū)具有一定現(xiàn)實(shí)意義和價(jià)值。本研究采用PV-9000法免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)新疆維、漢民族乳腺癌、乳腺良性增生組織中Axl和Gas6表達(dá)水平，并探討其臨床病理意義。

1 資料與方法

1.1臨床資料選擇2006年1月-2007年1月新疆醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院乳腺外科收治的Ⅰ～Ⅲ期可手術(shù)且臨床資料完整的女性乳腺癌患者252例。收集患者的臨床和病理資料,內(nèi)容包括年齡、腫瘤大小、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、組織學(xué)分級(jí)、脈管浸潤(rùn)、分子分型(根據(jù)ER、PR、Her-2及Ki-67表達(dá)情況分型)[7]、Axl和Gas6蛋白表達(dá)情況。乳腺癌患者分期依據(jù)第六版AJCC標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行,其中維吾爾族88例(Ⅰ期22例，Ⅱ期50例，Ⅲ期16例)，平均年齡45.6歲；漢族164例(Ⅰ期38例，Ⅱ期108例，Ⅲ期18例)，平均年齡47歲；維吾爾族患者和漢族患者在臨床分期(χ2=1.515，P=0.469)及年齡(t=0.355，P=0.573)相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；所有患者均行手術(shù)治療，其中行根治術(shù)者66例，改良根治術(shù)者170例，保乳手術(shù)者16例。本組252例患者經(jīng)手術(shù)治療后腋窩淋巴結(jié)檢出數(shù)10～41枚，平均15枚。所有患者在行手術(shù)前均未行化療、放療及內(nèi)分泌治療。腋窩淋巴結(jié)清掃范圍為第1～3站水平，送檢淋巴結(jié)至少10枚。選取同期入院的21例乳腺良性增生患者的組織為對(duì)照組。

1.2方法采用免疫組織化學(xué)染色PV-9000法檢測(cè)ER、PR、Her-2、Ki67、Axl、Gas6的表達(dá)(ER、PR、Her-2、Ki67單克隆抗體均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)。兔抗人Axl、Gas6多克隆抗體購(gòu)自Santa Cruz公司。Axl及Gas6陽(yáng)性表達(dá)判斷標(biāo)準(zhǔn)參考文獻(xiàn)[8]。染色強(qiáng)度判定標(biāo)準(zhǔn)為：無染色記為0分，染色淺(即稍高于背景)記為1分，中等染色(明顯高于背景)記為2分，強(qiáng)染色記為3分，極強(qiáng)染色記為4分。光鏡下分別計(jì)數(shù)300個(gè)細(xì)胞，并計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)積分：≤10%記為0分，11%～25%記為1分，26%～50%記為2分，51%～75%記為3分，>75%記為4分。然后將兩項(xiàng)積分相加，7～8分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)，4～6分為陽(yáng)性(++)，2～3分為弱陽(yáng)性(+)，0～1分為陰性(-)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用SPPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件包對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，Axl和Gas6表達(dá)與病理學(xué)或臨床因素的關(guān)系采用卡方檢驗(yàn)或Fisher’s精確概率法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1Axl和Gas6在乳腺癌和正常組織中的表達(dá)情況在乳腺癌組織中Axl蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率為63.5%，明顯高于正常對(duì)照組織的28.6%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Gas6在癌組織的陽(yáng)性表達(dá)率為47.6%，明顯高于正常對(duì)照組的23.8%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。Axl陽(yáng)性信號(hào)為胞膜上及胞質(zhì)內(nèi)棕黃色顆粒，見圖1；Gas6陽(yáng)性信號(hào)為胞質(zhì)內(nèi)的棕黃色顆粒，見圖2。

表1 Axl和Gas6在乳腺癌和正常組織中的表達(dá)情況/例(%)

圖1 Axl在乳腺癌組織中陽(yáng)性表達(dá)(+++) (PV 9000×400) 圖 2 Gas6在乳腺癌組織中陽(yáng)性表達(dá) (+++) (PV 9000×400)

2.2Axl和Gas6的表達(dá)與乳腺癌臨床及病理特征的關(guān)系不同民族、不同年齡組、不同病理類型及不同分子分型組間Axl和Gas6蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；隨著腫瘤T分期的增高，Axl和Gas6蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率也逐漸增高，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；組織學(xué)分級(jí)在不同分級(jí)組間Axl和Gas6蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率差異均有統(tǒng)計(jì)意義(P<0.05) ，隨著組織學(xué)分級(jí)的增高Axl和Gas6蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率也逐漸增高；在淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移組的Axl和Gas6蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為70.4%、56.3%，明顯高于淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移組的50.9%和36.4%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在脈管有浸潤(rùn)組的Axl和Gas6蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于無浸潤(rùn)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

3 討論

乳腺癌是婦女最常見的惡性腫瘤之一，在歐美等國(guó)家，乳腺癌發(fā)病率已躍居女性惡性腫瘤的首位[9]。近10年來，我國(guó)乳腺癌的發(fā)病率與死亡率分別以每年2.4%和3%的速度上升，成為城市中增長(zhǎng)最快的惡性腫瘤。目前我國(guó)乳腺癌發(fā)病率已經(jīng)超過卵巢癌而躍居中國(guó)女性惡性腫瘤發(fā)病之榜首，嚴(yán)重影響著我國(guó)廣大婦女的身心健康。

Axl是近年來在與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系的領(lǐng)域中研究的較為熱點(diǎn)的指標(biāo)[10]。研究發(fā)現(xiàn)Axl在癌細(xì)胞中的高表達(dá)與細(xì)胞的惡性表型、腫瘤分期差、預(yù)后不良等相關(guān)[11-13]。本組資料顯示，在新疆維吾爾族女性乳腺癌中的Axl陽(yáng)性表達(dá)率為65.9%，高于漢族的59.8%，但兩組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，同樣維吾爾族女性乳腺癌中Gas6陽(yáng)性表達(dá)率為56.8%，高于漢族的42.7%，兩組比較差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。本組資料顯示T1期乳腺癌患者Axl的陽(yáng)性表達(dá)率為44.7%，而T2 和T3期分別為68.8%、75.0%，Gas6的陽(yáng)性表達(dá)率在T1、T2及T3期分別為32.6%、75%和52.5%，隨著腫瘤T分期的增高Axl和Gas6蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率也逐漸增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，此結(jié)果與文獻(xiàn)[13]報(bào)道的相同，說明Axl和Gas6蛋白的表達(dá)與乳腺原發(fā)病灶的大小有一定的關(guān)系。

本研究顯示，在良性增生組織中Axl和Gas6蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為28.6%和23.8%，明顯低于乳腺癌組織中的63.5%和47.6%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示Axl和Gas6的高表達(dá)與腫瘤惡性程度密切相關(guān)，可以為判斷乳腺腫瘤性質(zhì)及其預(yù)后提供參考意見。本組資料顯示在淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移組的Axl和Gas6蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為70.4%、56.3%，明顯高于淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移組的50.9%和36.4%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與文獻(xiàn)[13-15]報(bào)道相同。本組資料顯示Axl和Gas6蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率在不同組織學(xué)分級(jí)組間差異有統(tǒng)計(jì)意義(P<0.05)，隨著組織學(xué)分級(jí)的增高Axl和Gas6蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率也逐漸增高；本組資料顯示在脈管有浸潤(rùn)組Axl的陽(yáng)性表達(dá)率為75.6%，高于脈管無浸潤(rùn)組的54.3%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，Gas6蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率在脈管有浸潤(rùn)組和無浸潤(rùn)組分別為60.0%和40.7%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明Axl 和Gas6的表達(dá)與乳腺癌脈管浸潤(rùn)有一定的關(guān)系。因此，可以說Axl/Gas6表達(dá)程度的高低與乳腺癌細(xì)胞的侵襲能力、惡性程度及淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移能力有關(guān)。

表2 Axl和Gas6的表達(dá)與乳腺癌臨床及病理特征的關(guān)系/例(%)

本組資料顯示，在不同分子分型乳腺癌中Luminal A 型Axl的陽(yáng)性表達(dá)率為68.8%，Luminal B 型為68.8%，三陰性乳腺癌為46.9%，Her-2陽(yáng)性型為57.1%，組間比較Axl的陽(yáng)性表達(dá)率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。同樣，本研究也未發(fā)現(xiàn)各分子分型間Gas6蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。但是Bette等[16]報(bào)道Axl表達(dá)只出現(xiàn)在ER表達(dá)陽(yáng)性的患者中，在乳腺癌細(xì)胞系中ER的拮抗劑可以減少Axl的表達(dá)。但是本組資料并未發(fā)現(xiàn)這種結(jié)果，雖然在三陰性乳腺癌和Her-2陽(yáng)性型乳腺癌中Axl的陽(yáng)性表達(dá)率較Luminal A 型和Luminal B型明顯較低，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析各分子分型組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與文獻(xiàn)[16]報(bào)道不同。有關(guān)Axl的表達(dá)情況與ER狀況的研究較少，國(guó)內(nèi)外尚未見有關(guān)Axl的表達(dá)狀況與分子分型間的研究，因此關(guān)于Axl及Gas6與分子分型間的關(guān)系的研究尚需進(jìn)行深入的研究。

綜上所述，乳腺癌Axl及其配體蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于正常對(duì)照組織，隨著腫瘤組織的增大、組織學(xué)分級(jí)的增高及脈管浸潤(rùn)Axl及其配體蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率明顯增高。同時(shí)，在淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移組的Axl及其配體的陽(yáng)性表達(dá)率也較未轉(zhuǎn)移組明顯增高，提示Axl及其配體與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移有密切的關(guān)系?？紤]可將Axl和Gas6在乳腺腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)檢測(cè)作為判斷乳腺腫瘤性質(zhì)及判斷預(yù)后的一個(gè)指標(biāo)，為腫瘤早期發(fā)現(xiàn)、早期診斷提供依據(jù)。

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