趙東升， 耿 晶， 張海波， 李新霞， 陳 堅

(1新疆埃樂欣藥業(yè)有限公司, 烏魯木齊 830013； 2新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院， 烏魯木齊 830011)

蔥屬(Allium)植物舊屬百合科(Liliaceae)，現(xiàn)屬于蔥科(Alliaceae)[1]，主要以嫩葉、假莖、鱗莖、花為食用部位，其歷史悠久、藥食兩用。具有蔥蒜味的多年生草本植物，包括蒜(A.SativumL.)、蔥(A.FistulosumL.)和韭(A.TuberosumRottl.exSpreng.)類。

蔥屬植物含有硫化物[1]、甾體皂苷[2]、氨基酸類[3]、黃酮類化合物[4]和糖類[5]等豐富的生物活性物質(zhì)，具有抗菌[6]、抗血小板聚集[7]、抗腫瘤[8]、抗氧化[1]、降低膽固醇[9]、排鉛[10]等多種作用，其中含硫化合物多存在于該屬植物的揮發(fā)油中，是其具有特征性氣味的主要原因。蔥屬植物以其資源豐富及顯著的食用價值、藥用價值、保健作用，已成為目前和未來食品、保健品和藥品開發(fā)和利用的重點。目前多采用含硫氨基酸-蒜氨酸等氨基酸類成分來對蔥屬植物進(jìn)行質(zhì)量控制[3]，又因同屬植物具有很多相同的活性成分，所以本研究采用薄層色譜鑒別常見幾種不同蔥屬植物中氨基酸類成分，同時采用高效液相色譜法測定其中蒜氨酸含量，了解其各自的化學(xué)成分特征，以期為更科學(xué)地研究和開發(fā)蔥屬植物提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1儀器高效液相色譜儀(e2690，美國Waters公司)，紫外檢測器(2487，美國Waters公司)，色譜柱(Hypersil BDS C18，4.6 mm×250 mm，5 μm，大連依利特公司)，分析天平(BS110S，德國Sartorius公司)，分析天平(XS205，瑞士Mettler-Teledo公司)，微電腦微波化學(xué)反應(yīng)器(WBFY-205，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)。

1.2試藥蒜氨酸對照品(批號：AL080430，熔點：162℃，含量：98%，新疆埃樂欣藥業(yè))，三氟乙酸(吳江桃源試劑廠，分析純)。新疆(吉木薩爾)大蒜購自新疆吉木薩爾縣當(dāng)?shù)厥袌?，紅皮洋蔥、黃皮洋蔥、韭菜、韭苔、蒜苔、小蔥、山東大蒜和河南大蒜均購自烏魯木齊當(dāng)?shù)厥袌觯呈[、薤白采自烏魯木齊野外。

2 方法與結(jié)果

2.1薄層鑒別本課題組建立的蔥屬植物大蒜的薄層鑒別方法[3,11]對常見幾種蔥屬植物進(jìn)行薄層鑒別。

2.1.1 供試品溶液制備 分別精密稱取去皮大蒜樣品約10 g，去皮洋蔥、韭菜、沙蔥、小蔥、韭菜和薤白約20 g，置于100 mL錐形瓶，加水15 mL，微波(P 50 檔，200 W)1.5 min滅酶，轉(zhuǎn)移至勻漿杯，勻漿1 min，漿液轉(zhuǎn)移至錐形瓶，適量水(65 mL)潤洗勻漿杯，轉(zhuǎn)入錐形瓶，超聲(P 100，200 W)20 min，放冷至室溫，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶，水定容至刻度，10 000 r/min離心15 min，取上清液為供試品溶液。

2.1.2 對照品溶液制備 分別精密稱取精氨酸、蒜氨酸、谷氨酰胺、半胱氨酸和S-烯丙基-L-半胱氨酸對照品各適量，加水溶解并定容，制成 1 mg/mL 的溶液，作為對照品溶液。

2.1.3 不同蔥屬植物薄層鑒別 照《中國藥典》薄層色普法(附錄Ⅵ B)試驗，分別吸取不同蔥屬植物樣品溶液6 μL和混合對照品溶液8 μL，點于同一薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水(4∶1∶1 )為展開系統(tǒng)展開，取出，晾干，噴以顯色劑，105℃加熱5 min至斑點清晰，可見光下檢視(圖1)，經(jīng)軟件處理后得不同蔥屬植物可見光薄層色譜圖的反色效果圖(圖2)。不同蔥屬植物中氨基酸類成分薄層色譜圖存在較大差異，特別在蒜氨酸、精氨酸等幾個特征性成分位置差異明顯。

圖1 可見光下不同蔥屬植物薄層色譜圖

圖2 不同蔥屬植物可見光薄層色譜圖的反色效果圖

2.2含量測定

2.2.1 對照品儲備液制備 精密稱取98.0%蒜氨酸對照品10.15 mg，水溶解并定容于25 mL容量瓶中，搖勻，即得蒜氨酸對照品儲備液。

2.2.2 供試品溶液的制備 分別精密稱取去皮大蒜樣品約10 g，去皮洋蔥、韭菜、沙蔥、小蔥、韭菜和薤白約20 g，置于100 mL錐形瓶，加水15 mL，微波(P 50 檔，200 W)1.5 min滅酶，轉(zhuǎn)移至勻漿杯，勻漿1 min，漿液轉(zhuǎn)移至錐形瓶，適量水(65 mL)潤洗勻漿杯，轉(zhuǎn)入錐形瓶，超聲(P 100，200 W)20 min，放冷至室溫，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶，水定容至刻度，10 000 r/min離心20 min，取上清液2 mL置于10 mL容量瓶中，水稀釋并定容至刻度，即得供試品溶液。

2.2.3 色譜條件 色譜柱：Hypersil BDS C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動相：0.04 %三氟乙酸水溶液；流速：0.5 mL/min；柱溫：35 ℃；檢測波長：UV 214 nm；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2.4 方法專屬性及系統(tǒng)適用性 在上述色譜條件下進(jìn)樣分析，蒜氨酸對照品溶液、大蒜樣品溶液HPLC色譜圖(圖3、4)，以蒜氨酸峰計算理論塔板數(shù)，以蒜氨酸峰與相鄰峰計算分離度。結(jié)果，以蒜氨酸峰計算理論塔板數(shù)為10 023，蒜氨酸峰與相鄰峰的分離度為3.46，蒜氨酸峰的拖尾因子為1.01。

圖3 蒜氨酸對照品HPLC色譜圖

圖4 新疆大蒜樣品HPLC色譜圖

2.2.5 線性與范圍 分別移取蒜氨酸對照品貯備液0.50、1.00、3.00、4.00、5.00 mL置10 mL容量瓶中，流動相稀釋并定容至刻度，搖勻即得蒜氨酸濃度為19.91、39.83、119.49、159.32、199.15 μg/mL系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，微孔濾膜過濾，進(jìn)樣。以蒜氨酸濃度C為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線得：A=16 699C-1 911(r=0.999 9)。結(jié)果表明蒜氨酸在19.91～199.15 μg/mL濃度范圍內(nèi)，與測定峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.2.6 方法學(xué)驗證

2.2.6.1 精密度試驗 分別移取蒜氨酸對照品貯備液0.50、3.00 、5.00 mL置10 mL容量瓶中，流動相稀釋并定容至刻度，搖勻，即得高、中、低3個濃度樣品。每隔1小時進(jìn)樣1次，共重復(fù)5次，日內(nèi)精密度RSD分別為0.90%、0.31%、0.63%，表明日內(nèi)精密度良好。每天進(jìn)樣1次，共重復(fù)5 d，日間精密度的RSD分別為1.16%、0.30%、0.24%。

2.2.6.2 加樣回收率試驗 精密移取河南大蒜樣品0.50 mL，共9份，置10 mL容量瓶中，加入蒜氨酸對照品貯備液0.50、2.00、4.00 mL，各3份。流動相稀釋并定容至刻度，搖勻，配制成高、中、低濃度樣品。微孔濾膜過濾，進(jìn)樣，記錄色譜圖，計算回收率。結(jié)果，平均加樣回收率為99.23%，RSD為2.01%。

2.2.6.3 重復(fù)性試驗 取同一批河南大蒜樣品，按“2.2.2”項下方法平行制備6份供試品溶液，分別測定其含量。結(jié)果，以鮮重計算蒜氨酸含量的RSD為5.9%(n=6)。

2.2.6.4 穩(wěn)定性試驗 取1份河南大蒜供試品溶液，室溫放置，分別于0、2、4、8、12 、24 h進(jìn)行測定。結(jié)果，蒜氨酸峰面積的RSD為1.31%(n=6)，表明大蒜供試品溶液在室溫下24 h內(nèi)保持穩(wěn)定。

2.2.7 樣品測定 按“2.2.2”項下方法制備樣品溶液，分別測定其含量。同時參照文獻(xiàn)[3,12-13]方法測定不同蔥屬植物中水分含量，并以干重計算蒜氨酸含量，結(jié)果不同蔥屬植物中的蒜氨酸含量存在較大差異，洋蔥、小蔥和薤白未檢測到蒜氨酸，新疆大蒜中蒜氨酸含量最高(4.74%)，見表1。

蒜氨酸含量的計算公式如下：

蒜氨酸含量

注：“-”表示未檢測到。

3 結(jié)論

蔥屬植物是國際上不同地區(qū)、不同民族喜歡的藥食兩用植物，通過調(diào)查新疆不同民族人群日常生活中喜歡食用大蒜、洋蔥、沙蔥、大蔥、韭菜等幾種不同蔥屬植物。

參照文獻(xiàn)報道的大蒜薄層鑒別方法和大蒜中蒜氨酸的含量測定方法對新疆常見的幾種不同蔥屬植物進(jìn)行薄層鑒別和含量測定研究。從結(jié)果中可以看出不同蔥屬植物的薄層色譜圖存在較大差異，特別是在蒜氨酸斑點位置；不同蔥屬植物中的蒜氨酸含量也存在較大差異，特別是洋蔥、小蔥和薤白在高效液相色譜條件下未檢測到蒜氨酸。

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