姚曉賓,王 丹,馬衛(wèi)國,曹偉娟,盛家和

(河南省腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科,河南鄭州450008)

AVE-764B尿沉渣分析儀紅細(xì)胞、白細(xì)胞計(jì)數(shù)評價(jià)及影響因素

姚曉賓,王 丹,馬衛(wèi)國,曹偉娟,盛家和

(河南省腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科,河南鄭州450008)

目的 評價(jià)AVE-764B尿沉渣分析儀計(jì)數(shù)紅細(xì)胞、白細(xì)胞的準(zhǔn)確性及存在的干擾因素,從而為儀器檢測的結(jié)果審核提出參考建議。方法 選取抗凝全血倍比稀釋和臨床尿液標(biāo)本作為檢測對象,使用AVE-764B尿沉渣分析儀和Fuchs-Rosenthal血細(xì)胞計(jì)數(shù)盤對樣本中紅細(xì)胞、白細(xì)胞進(jìn)行定量計(jì)數(shù),分析結(jié)果差異及干擾因素。結(jié)果血液和尿液標(biāo)本紅、白細(xì)胞計(jì)數(shù),儀器和手工法差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,但是血液稀釋標(biāo)本未加冰醋酸破壞紅細(xì)胞時(shí),白細(xì)胞計(jì)數(shù)兩種方法差異顯著,儀器法計(jì)數(shù)結(jié)果偏高;當(dāng)尿液中其他顆粒成分鏡檢大于1+時(shí),兩種方法計(jì)數(shù)結(jié)果差異顯著,儀器法計(jì)數(shù)結(jié)果偏高。結(jié)論 AVE-764B尿沉渣分析儀對紅、白細(xì)胞計(jì)數(shù)準(zhǔn)確可靠,但是標(biāo)本中有大量其他顆粒成分存在時(shí)計(jì)數(shù)結(jié)果明顯偏高,此時(shí)結(jié)果審核可考慮手工計(jì)數(shù)或手工半定量計(jì)數(shù)。

AVE-764B;尿沉渣分析儀;紅細(xì)胞;白細(xì)胞;顆粒成分

隨著計(jì)算機(jī)和生物技術(shù)的發(fā)展和廣泛應(yīng)用,尿液有形成分分析儀的自動(dòng)化得到迅速發(fā)展。目前為止尿液有形成分分析儀大致分為兩種,一種是流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合電阻抗或化學(xué)染色等綜合技術(shù)進(jìn)行定量分析,以日本東亞醫(yī)療電子有限公司UF-100尿沉渣分析儀為代表[1];另一種是自動(dòng)化的顯微鏡檢取圖,計(jì)算機(jī)模擬分析,得出定量結(jié)果。具有代表性的儀器是2002年美國國際遙控影像系統(tǒng)有限公司(Interna-tional Remote imaging systems,IRIS)推出的IQ-200尿沉渣檢測工作站,在尿液有形成分定量分析方面得到國際認(rèn)可[2]。2002年8月,國內(nèi)長沙愛威公司將“機(jī)器視覺”技術(shù)應(yīng)用于臨床顯微鏡鏡檢,取得了尿液有形成分自動(dòng)化分析國內(nèi)自主研發(fā)的突破,尿液標(biāo)本經(jīng)自動(dòng)進(jìn)樣、初篩、低倍和高倍鏡檢,取圖后利用機(jī)器視覺的圖像處理系統(tǒng)進(jìn)行自動(dòng)判別和定量分析。

流式細(xì)胞術(shù)是對顆粒成分的直接計(jì)數(shù),實(shí)現(xiàn)了尿液有形成分真正意義上的定量計(jì)數(shù)。但是尿液存在成分復(fù)雜,缺乏穩(wěn)定的酸堿度和滲透壓,隨時(shí)間和周圍環(huán)境介質(zhì)的變化,有形成分形態(tài)多易發(fā)生改變,影響計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性[3]。圖像采集技術(shù)在這方面具有優(yōu)勢,AVE尿沉渣分析儀逐漸被推廣和應(yīng)用,其對于尿液中有形成分的定量分析價(jià)值得到了市場認(rèn)可。馬駿龍等[4]認(rèn)為AVE-763具有很高的臨床應(yīng)用價(jià)值。袁舟亮等[5]比較了AVE-763B尿沉渣分析儀對紅細(xì)胞、白細(xì)胞、上皮細(xì)胞、管型四種成分與手工鏡檢的檢出差異得出結(jié)論,AVE-764B對尿液有形成分的檢出率優(yōu)于人工直接顯微鏡鏡檢法。但是他們均認(rèn)為儀器鏡檢還不能完全替代人工識別,有時(shí)需與人工識別相結(jié)合以保證結(jié)果的準(zhǔn)確無誤。為探索由儀器分析和手工鏡檢引起差異的因素及糾正措施,作者對比了兩種檢測方法在稀釋全血和臨床尿液標(biāo)本檢測的差異,試圖找出存在的影響因素和可能的糾正措施,以更好的指導(dǎo)日常工作和結(jié)果的審核。

1 材料和方法

1.1 全血稀釋后AVE-764B和手工檢測

采集2 m L EDTA-K2抗凝全血,希森美康1800i血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù),選取紅細(xì)胞數(shù)值介于(3.5～4.5)×1012、白細(xì)胞值介于(4～10)×109之間的樣本?？鼓?jīng)生理鹽水倍比稀釋,稀釋管分兩排,微量移液器取100μL全血,加入到900μL稀釋液中,充分吹打、顛倒混勻稀釋到105倍。其中1排加2滴冰醋酸用于破壞紅細(xì)胞,放置5～10 min,顯微鏡觀察紅細(xì)胞破壞完全,白細(xì)胞未被破壞后用于白細(xì)胞計(jì)數(shù)。另一排未加冰醋酸用于紅細(xì)胞計(jì)數(shù)。

手工計(jì)數(shù)采用Fuchs-Rosenthal血細(xì)胞計(jì)數(shù)盤計(jì)數(shù)紅細(xì)胞和白細(xì)胞數(shù)值[6]。充池和計(jì)數(shù)方法為一次性塑料試管取少量稀釋后的血液充入計(jì)數(shù)池,靜置5 min,先用低倍鏡掃描整個(gè)計(jì)數(shù)盤,保證顆粒分布均勻,用高倍鏡計(jì)數(shù)顆粒數(shù)量。為了達(dá)到顆粒計(jì)數(shù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)精度,必須計(jì)算足夠的顆粒數(shù),白細(xì)胞和紅細(xì)胞至少計(jì)數(shù)200個(gè)。

1.2 臨床采集尿液標(biāo)本AVE-764B和手工定量檢測

連續(xù)兩周收集臨床各科送檢的尿常規(guī)標(biāo)本1 047份,留取后到檢測結(jié)束時(shí)間不超過2 h,留取量不少于10 m L,留取前女性患者避開經(jīng)期。AVE-764B尿液有形成分分析儀操作嚴(yán)格按照儀器SOP要求進(jìn)行,低倍鏡和高倍鏡顆粒成分均經(jīng)人工復(fù)判。手工檢測采用Fuchs-Rosenthal血細(xì)胞計(jì)數(shù)盤計(jì)數(shù),尿液標(biāo)本充分混勻,取底部少量充池,靜置5 min,管型和鱗狀上皮細(xì)胞低倍鏡觀察計(jì)數(shù),紅細(xì)胞和白細(xì)胞高倍鏡至少計(jì)數(shù)200個(gè),以保證計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確性。

1.3 手工鏡檢半定量檢測

因視野范圍廣,且較計(jì)數(shù)板更為清晰,傳統(tǒng)手工顯微鏡檢作為補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)。臨床收集的尿液標(biāo)本充分混勻,底部吸取少量,取1滴或半滴涂片,以細(xì)胞不分層為宜。紅、白細(xì)胞及上皮細(xì)胞以1/4視野為1+, 1/2視野為2+,3/4視野為3+,滿視野為4+。其他有形成分半定量分析報(bào)告方式見表1。

表1 顯微鏡觀察尿結(jié)晶、細(xì)菌、真菌、寄生蟲等的報(bào)告方式[7]

1.4 統(tǒng)計(jì)分析

所有數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。全血和尿液檢測,計(jì)算兩種方法的相關(guān)系數(shù)r和回歸方程,兩種方法結(jié)果的比較采用秩和檢驗(yàn)。多元回歸分析驗(yàn)證低倍顆粒數(shù)對結(jié)果換算的影響。

2 結(jié)果

2.1 全血稀釋后AVE-764B和手工檢測結(jié)果的比較

抗凝全血10倍稀釋后AVE-764B進(jìn)行檢測,進(jìn)樣后發(fā)現(xiàn)高倍視野堆滿紅細(xì)胞,細(xì)胞重疊無法精確計(jì)數(shù),105稀釋后,10副高倍圖可見數(shù)個(gè)紅細(xì)胞或未見,因此全血稀釋后用于驗(yàn)證AVE-764B計(jì)數(shù)紅細(xì)胞準(zhǔn)確性的稀釋范圍為102～105,在這一范圍內(nèi)紅細(xì)胞AVE-764B和手工檢測比較,儀器和手工檢測相關(guān)性強(qiáng),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表2),回歸方程為Y= 0.887X-2.976。加醋酸破壞紅細(xì)胞后,白細(xì)胞計(jì)數(shù)稀釋范圍為101～103,這一范圍內(nèi)白細(xì)胞儀器和手工檢測比較,差異仍無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,回歸方程為Y= 0.916X-0.534。

全血102～103稀釋后未滴加冰醋酸,視野內(nèi)紅細(xì)胞未被破壞,散在可分辨的白細(xì)胞,白細(xì)胞儀器和手工檢測比較,儀器計(jì)數(shù)明顯高于手工計(jì)數(shù)(表2),儀器和手工法仍存在相關(guān)性,但相關(guān)系數(shù)r=0.752,低于滴加冰醋酸組,回歸方程為Y= 0.415X-12.748。

表2 全血稀釋后AVE-764B和手工檢測結(jié)果

2.2 臨床采集尿液標(biāo)本AVE-764B和手工定量檢測

尿液中結(jié)晶、細(xì)菌、真菌、寄生蟲等其他非紅白細(xì)胞成分通過手工鏡檢小于1+時(shí),紅細(xì)胞儀器和手工檢測比較,相關(guān)性強(qiáng),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表3),回歸方程為Y=0.914X-2.461。白細(xì)胞儀器和手工檢測比較,差異仍無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,回歸方程Y= 0.906X-0.653。

尿液中其他顆粒成分手工鏡檢大于等于1+時(shí),紅細(xì)胞儀器和手工檢測比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,儀器法高于手工計(jì)數(shù)(P＜0.01),兩種方法相關(guān)系數(shù)減低,r=0.647,回歸方程Y=0.563X-16.615。白細(xì)胞儀器和手工檢測比較,差異同樣有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,儀器法高于手工計(jì)數(shù)(P＜0.01)(表2),兩種方法相關(guān)分析,相關(guān)系數(shù)減低,r=0.612,回歸方程Y= 0.484X-18.249。

表3 臨床尿液標(biāo)本AVE-764B和手工檢測結(jié)果

2.3 AVE-764B尿沉渣計(jì)數(shù)儀低倍顆粒數(shù)對紅白細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響

AVE-764B尿沉渣計(jì)數(shù)儀有3個(gè)通道,存在通道吸樣誤差,只選取通道1作為分析通道。參數(shù)設(shè)置為初篩10副圖、低倍鏡10副圖、高倍鏡10副圖。計(jì)數(shù)低倍顆粒數(shù),低倍10副圖用于計(jì)數(shù)上皮細(xì)胞、管型,高倍10副圖用于計(jì)數(shù)紅白細(xì)胞。選取并記錄低倍顆粒數(shù)X1、高倍10副圖中紅、白細(xì)胞數(shù)值X2和換算后的每微升紅、白細(xì)胞數(shù)值Y。SPSS多元回歸分析建立每微升紅、白細(xì)胞數(shù)值、低倍顆粒數(shù)和10副高倍圖紅、白細(xì)胞數(shù)值之間的多元回歸模型。相關(guān)系數(shù)r= 0.094,回歸模型的方差分析F值為4428.015,P= 0.000,回歸顯著?；貧w方程Y=-34.094+ 0.034X1+41.9X2。

3 討論

AVE尿液有形成分分析儀已在國內(nèi)各檢驗(yàn)科室得到廣泛應(yīng)用,其儀器的準(zhǔn)確性和性能也得到了專家和同行的認(rèn)可[8]。我們的實(shí)驗(yàn)收集的臨床尿液標(biāo)本儀器和手工法具有較高的相關(guān)系數(shù)和回歸系數(shù),并且用成分簡單的稀釋血液進(jìn)一步驗(yàn)證了儀器的準(zhǔn)確性和可靠性。但在有些情況下儀器和手工計(jì)數(shù)誤差較大,儀器法不能取代手工鏡檢,如標(biāo)本留取量少,儀器取樣不足時(shí)檢測結(jié)果可能會明顯低于標(biāo)本實(shí)際含量。尿液標(biāo)本可能含有手紙或內(nèi)衣面料混入的纖維堵孔或清洗不干凈,樣本間可能存在的交叉污染等因素,使得儀器計(jì)數(shù)結(jié)果和人工計(jì)數(shù)之間存在較大誤差,但這些誤差通過嚴(yán)格的樣本留取要求和謹(jǐn)慎的實(shí)驗(yàn)操作,能被識別和矯正。作者在日常操作中還發(fā)現(xiàn)另一影響因素,即兩個(gè)臨床標(biāo)本同樣是6副高倍圖計(jì)數(shù)到1個(gè)紅細(xì)胞或白細(xì)胞,儀器計(jì)數(shù)結(jié)果為2或43個(gè)/μL,差異較大。通過長期的觀察和實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的收集分析,發(fā)現(xiàn)初篩的低倍顆粒數(shù)對計(jì)數(shù)的換算影響較大,因此納入這一因素并對其進(jìn)行分析,得出了儀器定量換算的回歸方程Y=-34.094+0.034X1+ 41.9X2。低倍顆粒數(shù)的回歸系數(shù)明顯低于高倍圖細(xì)胞數(shù)值的回歸系數(shù),但是低倍顆粒數(shù)是初篩時(shí)取圖內(nèi)所有的顆粒數(shù),如果標(biāo)本中存在較多的結(jié)晶、真菌或污染纖維等顆粒成分時(shí),兩種方法計(jì)數(shù)誤差較大,儀器法的計(jì)數(shù)結(jié)果明顯高于手工計(jì)數(shù)。張志英等[9]的研究認(rèn)為尿液中結(jié)晶不干擾紅細(xì)胞的計(jì)數(shù)。我們認(rèn)為包括結(jié)晶等其他有形成分的量小于1+時(shí),對細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果影響不大,但是其他有形成分量大于1+時(shí),會造成計(jì)數(shù)結(jié)果偏高。

全血稀釋計(jì)數(shù)結(jié)果顯示,紅細(xì)胞較多白細(xì)胞較少時(shí)會影響白細(xì)胞計(jì)數(shù)。全血稀釋未加醋酸102～103稀釋,視野內(nèi)以紅細(xì)胞為主,散在可分辨的白細(xì)胞,白細(xì)胞儀器和手工檢測比較,Y=0.415X-12.748,r= 0.752,秩和檢驗(yàn)Z=-2.625,P=0.009,儀器和手工檢差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,儀器法高于手工計(jì)數(shù)。其中的一例對白細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),紅細(xì)胞未被破壞時(shí)高倍看到4個(gè)白細(xì)胞,換算成123個(gè)/μL。紅細(xì)胞被冰醋酸破壞后同樣看到4個(gè)白細(xì)胞,換算后為46個(gè)/μL。這些結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證說明初篩顆粒數(shù)參與了儀器結(jié)果的換算,雖然不作為結(jié)果報(bào)告。

遇到尿液中混有中等量及以上結(jié)晶、細(xì)菌、真菌、寄生蟲等非細(xì)胞有形成分時(shí),AVE-764B儀器法對紅細(xì)胞、白細(xì)胞的計(jì)數(shù)結(jié)果明顯偏高,這種情況下對檢測結(jié)果應(yīng)加以干預(yù),建議用以下幾種方法:①換人工計(jì)數(shù)。②手工鏡檢半定量計(jì)數(shù)。③對儀器法從圖中看到的細(xì)胞數(shù)到每微升細(xì)胞數(shù)的換算公式進(jìn)行糾正。低倍顆粒數(shù)的如何糾正,是否還存在其他影響計(jì)數(shù)換算的因素,是本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步的研究方向。

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[責(zé)任編輯 姬 荷]

Evaluation of the results and influencing factors with AVE-764B urine sediment analyzer

YAO Xiaobin，WANG Dan，MA Weiguo，CAO Weijuan，SHENG Jiahe
（Department of Clinical Laboratory，Henan Tumor Hospital|Affiliated Tumor Hospital of Zhengzhou University，Zhengzhou，Henan 450008，China）

Objective Accuracy evaluation of RBC，WBC count with interference factors on AVE-764B urinary sediment analyzer，thereby to make reference to the proposed audit.Methods Selected anticoagulated whole blood and clinical urine specimens as a detection object，while used AVE-764B urinary sediment analyzer and Fuchs-Rosenthal cytometer for quantitative counting of RBC，WBC.Analyzed the differences and confounding factors. Results Instruments and manual method showed no significant difference with blood and urine samples of RBC，WBC count，but WBC count significantly in two ways，instruments act count results high when hemodilution specimens without glacial acetic acid damage of RBC.Count results significantly in two ways，instrumental method count high when other particulate component of urine microscopy is greater than 1+.Conclusion AVE-764B urinalysis analyzer for RBC and WBC count is accurate and reliable，but count results were significantly higher than manual counting when there are a large number of other particle composition is present in the specimen.At this time suggest manual counting or semi-quantitative count by hand.

AVE-764B；urinary sediment analyzer；RBC；WBC；particle component

R446.12

A

1672-7606(2014)04-0270-04

2014-08-10

姚曉賓(1979-),男,河南靈寶人,碩士,主管技師,從事臨床檢驗(yàn)診斷的工作。