孫穩(wěn)蓮

叉頭框C2和Vimentin蛋白在胃癌中的表達(dá)及意義

孫穩(wěn)蓮

目的 探討人叉頭框C2（FOXC2）和Vimentin蛋白在胃癌組織中的表達(dá)和意義。方法 采用免疫組化S-P法檢測(cè)65例胃癌組織及20例正常胃黏膜中FOXC2和Vimentin的表達(dá)，分析兩種蛋白與胃癌臨床特征之間關(guān)系的相關(guān)性。結(jié)果 胃癌組織中FOXC2和Vimentin均呈現(xiàn)高表達(dá)，F(xiàn)OXC2和Vimentin在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為41.53%(27/65)和35.38%(23/65)。FOXC2在中晚期胃癌的表達(dá)率為58.62%(17/29)，明顯高于早期胃癌表達(dá)率27.78%(10/36)（P＝0.012；FOXC2在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)率為55.88%(19/34)，明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組表達(dá)率29.03%(9/31)（P＝0.018）。Vimentin在中晚期胃癌的表達(dá)率為51.72%(15/29)，明顯高于早期胃癌表達(dá)率22.22%（8/36）（P＝0.013）；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)率為41.17%（14/34），高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組表達(dá)率 19.35%（6/31）（P＝0.014）。胃癌組織中FOXC2和Vimentin的表達(dá)成正相關(guān)（P＝0.037）。結(jié)論 FOXC2和Vimentin可能參與上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程，在胃癌轉(zhuǎn)移中扮演重要角色。

胃腫瘤；FOXC2；Vimentin；EMT

胃癌是全世界最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，居全球癌癥發(fā)病率和死亡率的第2位[1]，雖經(jīng)過(guò)多年的研究，胃癌的發(fā)病機(jī)制仍不清楚。叉頭框C2（forkhead box C2，F(xiàn)OXC2）屬forkhead轉(zhuǎn)錄因子家族的一員。有研究表明，F(xiàn)OXC2在上皮細(xì)胞-間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)變（epithlial-mesenchymal transition，EMT）過(guò)程中，促進(jìn)間質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，對(duì)EMT起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用[2-3]。而上皮性癌細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過(guò)程與EMT十分相似，擬通過(guò)免疫組化法檢測(cè)胃癌組織中FOXC2和Vimentin的表達(dá)情況，探索胃癌的高度惡性行為是否與EMT有關(guān)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2008年1月～2013年6月經(jīng)病理證實(shí)胃癌手術(shù)患者65例的標(biāo)本作為研究對(duì)象。其中，男48例，女17例；年齡30～81歲；有淋巴轉(zhuǎn)移34例，無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移為31例。另取20例健康者正常胃黏膜組織作為陰性對(duì)照。

1.2 方法

1.2.1 試劑 抗FOXC2多克隆抗體購(gòu)于Abcam公司，抗Vimentin單克隆抗體購(gòu)于福建邁新公司，SP(SP Kit Rabbit)免疫組化試劑盒和濃縮型DAB(Diaminobenzidine)試劑均購(gòu)自北京中杉試劑公司。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 按SP免疫組化試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。標(biāo)本常規(guī)10%中性甲醛溶液固定，石蠟包埋制片，4m切片脫蠟水化，于枸櫞酸鈉緩沖液（pH6.0）中微波抗原修復(fù)，過(guò)氧化物酶阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性，非免疫性動(dòng)物血清阻斷非特異性反應(yīng)，分別滴加山羊抗人FOXC2多抗和鼠抗人Vimentin單抗，4℃過(guò)夜，37℃復(fù)溫1h后滴加二抗，DAB (Diaminobenzidine)顯色，蘇木素復(fù)染，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片，鏡檢。

1.2.3 結(jié)果判定[1]FOXC2與Vimentin均主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)明顯著色及強(qiáng)著色為陽(yáng)性細(xì)胞，計(jì)數(shù)5個(gè)高倍鏡視野，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜5%為陰性，≥5%為陽(yáng)性，判定過(guò)程由2名經(jīng)驗(yàn)豐富的病理醫(yī)生負(fù)責(zé)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料采用率和百分比表示，兩組間計(jì)數(shù)資料比較采用χ2或Fisher確切概率法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05,以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 FOXC2和Vimentin的表達(dá)情況 FOXC2及Vimentin在胃癌組織中表達(dá)較強(qiáng)，胞內(nèi)顆粒粗大；在正常胃黏膜組織中表達(dá)較弱，顆粒細(xì)小。FOXC2在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為41.53%(27/65)，Vimentin在胃癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為35.38%(23/65)。

2.2 FOXC2和Vimentin的表達(dá)與臨床生物學(xué)行為的關(guān)系FOXC2在中晚期胃癌的表達(dá)率為58.62%(17/29)，明顯高于早期胃癌表達(dá)率27.78%(10/36)（P=0.012）；FOXC2在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中的表達(dá)率為55.88%(19/34)，明顯高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組表達(dá)率29.03%(9/31)（P=0.018）。FOXC2的過(guò)表達(dá)與年齡、性別、分化程度是否有關(guān)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（見(jiàn)表1)。

Vimentin在中晚期胃癌的表達(dá)率為51.72%(15/29)，明顯高于早期胃癌表達(dá)率22.22%(8/36)（P=0.013）；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)率為41.17%(14/34)，高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組表達(dá)率19.35%(6/31)（P=0.014），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而Vimentin的過(guò)度表達(dá)與年齡、性別、分化程度是否有關(guān)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見(jiàn)表 1)。

表1 FOXC2和Vimentin的表達(dá)與胃癌臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

2.3 FOXC2和Vimentin表達(dá)的關(guān)系 FOXC2陽(yáng)性表達(dá)的胃癌組織中，Vimentin的陽(yáng)性表達(dá)為66.67%，F(xiàn)OXC2陰性表達(dá)的胃癌組織中，Vimentin的陽(yáng)性表達(dá)為23.40%，兩者成正相關(guān)（P=0.405，P=0.037,見(jiàn)表 2）。

表2 FOXC2和Vimentin的相關(guān)性（例）

3 討論

雖然現(xiàn)階段的流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，不同地區(qū)胃癌的發(fā)病率均較前有所下降，但全球每年仍有超過(guò)93萬(wàn)的病例確診胃癌，盡管治療方案越來(lái)越多，每年仍至少有70萬(wàn)的胃癌患者死亡。在我國(guó)對(duì)胃癌進(jìn)行了多年的基礎(chǔ)和臨床研究，但其發(fā)病機(jī)制仍不完全清楚。有研究發(fā)現(xiàn)，EMT在各種上皮細(xì)胞來(lái)源的惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮了重要作用[1]。EMT為暫時(shí)而快速的細(xì)胞表型可逆性改變，上皮細(xì)胞之間的緊密連接消失或者減少，上皮細(xì)胞失去其極性并改變其細(xì)胞骨架（間質(zhì)成分增加），細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、遷延、抗凋亡能力提高[3]。EMT可以改變腫瘤細(xì)胞的表型，從而提高腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的能力[4]。參與EMT中的蛋白分子眾多，如β-Catenin、Paxillin、Vimentin、slug等[5]，其中代表間質(zhì)細(xì)胞的Vimentin由于其高度的選擇性表達(dá)受到廣泛的研究。

FOXC2屬于FOXC亞族，經(jīng)過(guò)多年研究發(fā)現(xiàn)，它不僅參與調(diào)節(jié)胚胎的發(fā)育，如血管、淋巴管的生成等[6]，還與肥胖、胰島素抵抗、糖尿病等代謝性疾病相關(guān)[7]。近年來(lái)的研究還發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)OXC2與腫瘤的浸潤(rùn)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，在乳腺基底細(xì)胞癌、子宮內(nèi)膜癌等腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)，其表達(dá)量與腫瘤分期及惡性程度呈正相關(guān)，這可能與FOXC2啟動(dòng)EMT促進(jìn)上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化并轉(zhuǎn)移有關(guān)[8]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，F(xiàn)OXC2在胃癌組織伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及晚期病例中呈高表達(dá)，提示其可能通過(guò)上述途徑參與胃癌的發(fā)展。

Vimentin是一種中間絲蛋白，是連接細(xì)胞膜與核膜之間的重要骨架蛋白。Vimentin主要表達(dá)于間葉組織細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等，是EMT中的一個(gè)重要因子。目前大量報(bào)道顯示，Vimentin在許多上皮性腫瘤，尤其是低分化癌中異常表達(dá)，可能與腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Vimentin在胃癌組織伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組及晚期病例中呈高表達(dá)，提示其可能參與胃癌的發(fā)展。又有報(bào)道稱，Vimentin的過(guò)度表達(dá)還與肝細(xì)胞癌、乳腺癌及結(jié)腸癌的高度惡性和不良預(yù)后有著明顯的聯(lián)系[9-11]；還在Vimentin在膀胱癌中表達(dá)異常增加。因此，Vimentin可能作為評(píng)估上皮性腫瘤有無(wú)轉(zhuǎn)移的指標(biāo)之一[12]。

本實(shí)驗(yàn)還表明，F(xiàn)OXC2和Vimentin的表達(dá)呈正相關(guān)，隨著胃癌的惡性程度增高，F(xiàn)OXC2及Vimentin表達(dá)均增加，促進(jìn)上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化。研究結(jié)果表明，EMT在結(jié)腸癌、乳腺癌、肺癌、肝癌等多種癌癥的浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移中起著重要作用[13]。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)OXC2及Vimentin參與胃癌的EMT過(guò)程，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，這可能為繼續(xù)探索胃癌發(fā)病機(jī)制提供了新的思路，也為胃癌的診斷及預(yù)后判斷提供了新的指標(biāo)。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2014.3.011

云南 655400 云南省宣威市中醫(yī)醫(yī)院（孫穩(wěn)蓮）