劉鳳偉

摘 要：大腸桿菌是腸道的正常寄生菌，能合成對人體有利的維生素B、維生素K，但當(dāng)機(jī)體抵抗力下降或大腸桿菌侵入腸外組織或器官時，則會成為條件致病菌，可引起腸外感染[1]。因而GB5749-2006《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定，每任意100mL水樣不得檢出總大腸菌群。本論文通過濾膜法實(shí)驗(yàn)檢測自來水中的總大腸菌群數(shù)是否符合國家飲用水標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞：濾膜法；品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基；大腸桿菌

引言

飲水水質(zhì)的好壞直接關(guān)系到人民的身體健康，也是反映一個國家文明程度的重要指標(biāo)之一[2]?！渡铒嬘盟l(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（TJ20-76）和《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB5749-85）中規(guī)定細(xì)菌總數(shù)不超過100個/mL，總大腸菌群不超過3個/L；而2001年《生活飲用水水質(zhì)衛(wèi)生規(guī)范》要求更加嚴(yán)格，規(guī)定飲用水中總大腸菌群每100mL水樣不得檢出。國內(nèi)檢測總大腸菌群的方法主要是多管發(fā)酵法和濾膜法。多管發(fā)酵法可適用于各種水樣，但操作繁瑣，所需時間較長，而濾膜法主要適用于雜質(zhì)較少的水樣，操作簡單快捷。本論文即采用濾膜法檢驗(yàn)自來水中總大腸菌群數(shù)，用濾膜過濾器過濾水樣，將水中含有的細(xì)菌截留在濾膜上，然后將濾膜放在品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)，計(jì)數(shù)大腸菌群菌落數(shù)，算出每100mL水樣中含有的大腸菌群數(shù)。從而判定自來水中的大腸菌群數(shù)是否符合國家標(biāo)準(zhǔn)。

1.材料與方法

1.1該實(shí)驗(yàn)于2013年7月2日、3日在大連經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)自來水公司水質(zhì)管理中心微生物室完成。

1.2材料

1.2.1實(shí)驗(yàn)材料 自來水（灣里高區(qū)水、灣里低區(qū)水）及其原水

1.2.2實(shí)驗(yàn)試劑 品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基

1.2.3實(shí)驗(yàn)儀器 培養(yǎng)箱：36℃±1℃、冰箱0℃-4℃、天平、藥匙、平皿：直徑90mm、刻度吸管、錐形瓶、量筒、玻璃棒、酒精燈、濾器、孔徑0.45μm濾膜、抽濾設(shè)備、無齒鑷子。

1.3檢驗(yàn)步驟

（1）將酒精棉球點(diǎn)燃，用其火焰滅菌抽濾器，用已在酒精燈上灼燒過并降至室溫的鑷子夾取已滅菌濾膜的邊緣部分，放在已用點(diǎn)燃的酒精棉火焰滅菌過，并已降至室溫的濾床上，將濾器固定好，并向?yàn)V器中注入100mL水樣，打開抽濾閥門，在-5.07×104Pa（負(fù)0.5大氣壓）下抽濾水樣。

（2）水樣濾完后，再繼續(xù)抽氣約5秒鐘，關(guān)上濾器閥門，將濾器取下來，用在酒精燈上灼燒過且溫度已降至室溫的鑷子夾取濾膜邊緣部分，移放到品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，使濾膜截留細(xì)菌面朝上，濾膜與培養(yǎng)基完全貼緊，中間沒有氣泡，然后倒置平皿，放入37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h±2h。

2.結(jié)果觀察與分析

2.1結(jié)果

水樣菌落照片及相應(yīng)數(shù)據(jù)表

（3）結(jié)果計(jì)算。100mL水樣中的總大腸菌群菌落數(shù)=數(shù)出的總大腸菌群菌落數(shù)×100/過濾的水樣體積（mL），即自來水中每100mL水樣中未檢出大腸菌群。

2.2分析。檢測結(jié)果表明，兩個原水樣中均存在大腸菌群，而數(shù)個自來水水樣中都沒有大腸菌群生長，說明對原水的處理效果很好，自來水沒有受到污染，符合國家飲用水水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)。

3、討論

因?yàn)閿?shù)個自來水水樣中沒有大腸菌群及其疑似菌生長，所以不需要做革蘭氏染色與鏡檢檢測。

試驗(yàn)中需要注意：①鑷子每次夾取濾膜前必須滅菌，以防感染雜菌。②培養(yǎng)基不能過久保存，若培養(yǎng)基由淡粉色變?yōu)樯罴t色，則不能再用。③將濾膜的細(xì)菌截留面朝上，放到品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，濾膜與培養(yǎng)基之間不要留有空隙。④配制品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基時要注意PH值的調(diào)節(jié)，一定要將其PH值調(diào)至7.2-7.4之間。⑤分裝品紅亞硫酸鈉儲備培養(yǎng)基時，應(yīng)每瓶裝入固定量的儲備培養(yǎng)基（例如200mL），因?yàn)殇伷矫髸r，要根據(jù)品紅亞硫酸鈉儲備培養(yǎng)基的量，計(jì)算出應(yīng)加入的無水亞硫酸鈉與堿性品紅乙醇溶液的量。⑥濾膜放入品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基后，必須先倒置平皿，再放入恒溫培養(yǎng)箱中。因?yàn)檫@樣可以防止冷凝水從蓋上滴落，引起菌落蔓延，使該處菌落生長不均，也可以防止水分蒸發(fā)，使得培養(yǎng)基內(nèi)水分過少而影響菌落生長。

4、結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)將自來水（灣里高區(qū)水、灣里低區(qū)水）分別進(jìn)行平行樣檢測（見圖一、表一與圖二、表二），均未檢出大腸菌群，而100mL原水中有平均29個大腸菌群生長（見圖三、表三與圖四、表四），且圖三、表三與圖四、表四是將原水與自來水（灣里高區(qū)水、灣里低區(qū)水）放在同一個品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，都只有原水長出大腸菌，說明培養(yǎng)基及操作手法均沒有問題，結(jié)果可信，自來水中的總大腸菌群數(shù)符合國家飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。（作者單位：大連經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)自來水公司水質(zhì)管理中心）

參考文獻(xiàn)：

[1] 李素玉 主編.環(huán)境微生物分類與檢測技術(shù).北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.8

[2] 彭文啟 張祥偉等.現(xiàn)代水環(huán)境質(zhì)量評價理論與方法.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005

[3] 金銀龍 鄂學(xué)禮等.GB5749-2006《生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》. 中國標(biāo)準(zhǔn)出版社出版，2007.5