范麗　王依健　蘇國

【摘要】目的本文研究并比較了高效液相色譜法和紫外分光光度法測定尼群地平片含量的方法。方法高效液相色譜法，C18（4.6×150nm 5um）色譜柱，甲醇-水（65：35）為流動相。流速：1.0ml/min，檢測波長為237nm，進(jìn)樣量為20ul；紫外分光光度計，測定波長為237nm。結(jié)果高效液相色譜法：尼群地平片在0.02000-0.1000mg/ml濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系r=0.9999，平均回收率為100.1%（RSD=0.13%）；紫外分光光度法：尼群地平片在2.00-10.00ug/ml范圍內(nèi)與吸收度呈線性關(guān)系（r=0.9993），平均回收率為102.5%（RSD=1.71%）。結(jié)論高效液相色譜是一種簡便、快速、精確、準(zhǔn)確的分析方法，有一定的實用意義。

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法；紫外分光光度法；尼群地平片；含量測定

文章編號：1004-7484（2014）-04-1801-04

1資料與方法

1.1選題背景與國內(nèi)外研究現(xiàn)狀尼群地平是新型鈣拮抗劑，國外已進(jìn)行了廣泛的研究，并做了初步的臨床試驗。由西德Bayer AG藥廠研究開發(fā)。1981年10月在美國紐約召開的國際性專題研討會上，美國、英國、西德、瑞典、瑞士、加拿大等15個國家105位專家經(jīng)過討論，確認(rèn)本品是一個有希望的、毒副作用較小的口服抗高血壓新藥。大量的藥理與臨床資料表明本品降壓作用溫和安全，療效穩(wěn)定持久，副作用也較少。1985年首次在西德上市，商品名Bayotensin；當(dāng)年銷售500萬美元。在美國市場由Miles公司開發(fā)上市，1986年銷售1000萬美元。國內(nèi)石家莊新華制藥廠與江蘇南京制藥廠已先后報批生產(chǎn)[1]。

尼群地平（nitrendipine）化學(xué)名為2，6-二甲基-4（3-硝基苯基）-1，4-二氫吡啶-3，5-二羧酸甲乙酯，是一種高效，低毒和藥效持久的抗心血管病和抗高血壓[2]，國內(nèi)外藥典尚未收載，有關(guān)尼群地平的藥理和臨床試驗國內(nèi)外實驗有許多研究，血清和血漿中痕量該藥的放射受體分析，HPLC和GC-MS分析已有報道。[3-4]

目前，尼群地平片的含量的測定方法有：鈰量法，氰離子選擇電極法，單掃描波極譜法，紫外分光光度法，高效液相色譜法，GC-MS，容量法[5]等。其片劑的含量測定一般采用紫外分光光度法[6]，該法線性范圍不夠?qū)?，專屬性差，且溶液的吸收度隨時間的放置時間有變化[7]，另外，氰離子選擇電極法單掃描波極譜法和鈰量法，這些方法存在精密度和專屬性差，線性關(guān)系難以確定等缺點[8]。國內(nèi)應(yīng)用高效液相色譜法測定尼群地平體內(nèi)藥物濃度曾有報道。但對尼群地平片進(jìn)行含量測定的方法研究還未成熟，為此我們建立了HPLC發(fā)和UV分析法，對尼群地平片的含量進(jìn)行比較的方法，進(jìn)而得出測定尼群地平片含量的最佳方法。

1.2尼群地平的化學(xué)結(jié)構(gòu)見表1。

表1尼群地平的簡介

通用名1尼群地平化學(xué)名12，6-二甲基-4-（3-硝基苯基）-1，

4-二氫-3，5-吡啶二甲酸甲乙酯拼音名1NIQUNDIPING英文名1NITRENDIPINECAS No139562-70-4結(jié)構(gòu)式1分子式1C18H20N2O6分子量1360.37規(guī)格110mg1.3尼群地平片的主要成分及藥理作用

1.3.1尼群地平片的主要成分尼群地平片主要成分：尼群地平

1.3.2尼群地平片的藥理作用①本品為二氫吡啶類鈣通道阻滯劑。②本品抑制血管平滑肌和心肌的跨膜鈣離子內(nèi)流，但以血管作用為主，故其血管選擇性較強。③本品引起冠狀動脈、腎小動脈等全身血管的擴張，產(chǎn)生降壓作用。

1.3.3尼群地平片的毒性致癌、致突變和生殖毒性：大鼠口服同類藥物硝苯地平兩年未見有致癌作用。體內(nèi)致突變研究結(jié)果陰性。給大鼠30倍于人類最大藥量可以致畸；交配后的大鼠給予30倍于人類最大藥量，可引起生殖率下降；給大鼠3-10倍于人類最大藥量，可引起大鼠、小鼠和兔子流產(chǎn)（胎兒的藥物吸收率增加、胎兒死亡率增加、新生兒存活率下降）；孕猴服用2倍于人類最大藥量，可導(dǎo)致小胎盤和絨毛發(fā)育不全?，F(xiàn)有的文獻(xiàn)表明，增加劑量能夠?qū)е逻^度的外周血管擴張，繼發(fā)或延長體循環(huán)低血壓狀態(tài)。由藥物過量導(dǎo)致臨床上出現(xiàn)顯著的低血壓反應(yīng)的患者，應(yīng)及時在心肺監(jiān)測的同時，給予積極的心血管支持治療。肝功能不全的患者藥物清除率下降。

1.3.4尼群地平片的代謝尼群地平片口服吸收良好，但存在明顯的首過效應(yīng)。蛋白結(jié)合率98%。早期研究報道T1/2為2小時，近期研究由于使用了更敏感的測定設(shè)備，報道T1/2在10-22小時。本品口服后約1.5小時血藥濃度達(dá)峰值。口服后30分鐘收縮壓開始下降，60分鐘后舒張壓開始下降，降壓作用在1-2小時最大，持續(xù)6-8小時。本品在肝內(nèi)廣泛代謝，其代謝產(chǎn)物70%經(jīng)腎排泄，8%隨糞便排出。肝病患者血藥濃度和消除半衰期增加。

1.3.5尼群地平片與其他藥物的相互作用①β-受體阻滯劑：絕大多數(shù)患者合用此藥可加強降壓作用，并可減輕本品降壓后發(fā)生的心動過速；然而，個別患者有可能誘發(fā)和加重體循環(huán)低血壓、心力衰竭和心絞痛。②血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑：合用耐受性較好，降壓作用加強。③長效硝酸鹽類：合用有較好的耐受性，但尚缺乏評價這種合用控制心絞痛的有效性文獻(xiàn)。④洋地黃：部分研究提示服用此藥，能夠增加合用的地高辛血漿濃度，平均增加45%。部分研究認(rèn)為不增加地高辛血漿濃度和毒性。提示我們在初次使用、調(diào)整劑量或停用尼群地平時應(yīng)監(jiān)測地高辛的血藥濃度，以防地高辛過量或不足。⑤雙香豆類抗凝藥：尚無報告表明合用尼群地平能夠增加香豆類抗凝藥物的凝血酶元時間。目前，還不能肯定他們之間的相互作用。⑥西咪替?。河捎谖鬟涮娑】山閷?dǎo)抑制肝臟細(xì)胞色素P450酶，使尼群地平的首過效應(yīng)發(fā)生改變，建議對正在服用西咪替丁治療的患者合用尼群地平時，注意藥物劑量的調(diào)整。

鈣通道阻滯劑藥物，鈣通道阻滯劑是在通道水平上選擇性阻滯鈣離子經(jīng)細(xì)胞膜上的鈣離子通道進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，減少細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的藥物。

1.4尼群地平的片作用機制

1.4.1鈣離子通道阻滯劑的作用機制鈣通道阻滯劑藥物，鈣通道阻滯劑是在通道水平上選擇性阻滯鈣離子經(jīng)細(xì)胞膜上的鈣離子通道進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，減少細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的藥物[17]。尼群地平片是一種二氫吡啶類鈣拮抗劑，可增加腦供血，是腦血管病治療藥物。對防治冠心病、高血壓及慢性充血性心律衰竭等具有顯著療效。從化學(xué)結(jié)構(gòu)上尼群地平屬于二氫吡啶類鈣通道阻滯劑藥物，鈣通道阻滯劑是在通道水平上選擇性阻滯鈣離子經(jīng)細(xì)胞膜上的鈣離子通道進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，減少細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的藥物。

尼群地平片與其它鈣拮抗劑比較，它能促使心肌細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)攝取并潴留鈣離子。尼群地平片對血壓和心率的影響開始較慢，而作用持續(xù)時間較長。

1.4.2尼群地平片的藥理和生理作用機制尼群地平片抑制血管平滑肌的跨膜鈣離子內(nèi)流，也抑制心肌的跨膜鈣離子內(nèi)流，但以血管作用為主，故其血管選擇性較強。本品引起周身血管，包括冠狀動脈、腎小動脈擴張，產(chǎn)生降壓作用。

藥理和臨床試驗證明尼群地平片能干擾體內(nèi)鈣離子的生理功能，包括心肌和平滑肌的興奮收縮偶聯(lián)作用，這是它擴張血管作用的基礎(chǔ)。藥理實驗還證明尼群地平片作為抗高血壓藥有許多優(yōu)點，對心肌、血管有強的選擇性，而對血管的親和力又比心肌漿網(wǎng)大10倍。它對不同部位的血管有不同的選擇性，對靜脈的擴張作用較弱，對腸系膜、皮膚和腦的血流影響很小。因而其毒副作用輕微，一般出現(xiàn)的與血管擴張有關(guān)的頭痛、面紅等，不需停藥。未發(fā)現(xiàn)耐受性，而且對正常血壓影響較小，比治療量大10倍時才影響正常血壓。

尼群地平片能干擾體內(nèi)鈣離子的生理作用，使心肌和平滑肌興奮收縮，導(dǎo)致外周血管阻力下降而降低血壓。還能顯著地擴張冠脈，并降低心肌耗氧量，對缺血心肌有保護(hù)作用。適用于輕、中度原發(fā)性高血壓的治療，并以降低舒張壓為主，對冠心病的高血壓患者更為適宜。由于本品還具有較強的利鈉作用，降低時較少引起鈉水潴留，所以長期服藥患者無需合并使用利尿劑

研究結(jié)果表明尼群地平片是一個很有希望、具有冠狀擴張作用的抗高血壓藥物。尤其適用于原發(fā)性高血壓。因原發(fā)性高血壓一般起因都是由于周圍血管阻力增大，目前還沒有理想的藥物，而尼群地平有較強的血管擴張作用，且對周圍血管選擇性最強，故可能成為治療原發(fā)性高血壓的理想藥物。

1.5尼群地平片含量的測定方法

1.5.1鈰量法中國藥典（2005版）[9]鈰量法測定尼群地平含量取本品30片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于尼群地平0.13g），照尼群地平項下的方法，自“加冰醋酸20ml”起，依法測定，即得。

1.5.2氰離子選擇電極法尼群地平結(jié)構(gòu)中含有二氫吡啶環(huán)，易氧化成吡啶環(huán)，即可設(shè)想氧化法測定。Christova等[10]研究了用碘離子選擇電極法測定一系列還原劑，在加熱條件下尼群地平與碘可發(fā)生定量氧化還原法應(yīng)，生成的碘離子可用氰離子選擇電極法測定。朱世民等[7]用氰離子選擇電極法測定了尼群地平片的含量。

1.5.3單掃描波極譜法尼群地平為一芳香族硝基化合物，通常硝基化合物可以在滴汞電極上還原，電極反應(yīng)為。在一定的濃度范圍內(nèi)，峰高與濃度呈線性關(guān)系，半波電位隨溶液中乙醇濃度中乙醇濃度的改變而改變。朱世民等[7]利用單掃描波極譜法測定尼群平片的含量。

1.5.4紫外分光光度法尼群地平含有硝基、苯基，在光譜的紫外區(qū)域應(yīng)有吸收峰。在紫外分光光度計上掃描，結(jié)果在237nm和356nm波長處有吸收值，但在237nm波長處的吸收值大于356處的吸收值，且在360nm左右吸收值不穩(wěn)定。故以237nm波長作為測定波長[11]，以10%乙醇作為溶劑。

1.5.5高效液相色譜法尼群地平化學(xué)結(jié)構(gòu)中含有二氫吡啶環(huán)，易氧化成無活性的吡啶環(huán)。高效液相色譜法可以克服紫外分光光度法的不足，能將樣品峰與雜質(zhì)峰分開，樣品峰經(jīng)峰純度檢出，說明高效液相色譜法專屬性良好，方法操作簡便，精密度好，測得值準(zhǔn)確可靠，尤其用于尼群地平新藥研究中穩(wěn)定性的含量測定[13-15]。

高效液相色譜法（HPLC）是現(xiàn)代分離分析的重要手段，它具有分離效果好，分辨率高，靈敏度高，分析速度快，重現(xiàn)性好，適用面廣，操作方便等優(yōu)點。2實驗部分

2.1儀器與試劑

2.1.1儀器Agilent1200高效液相色譜儀Eclipse XDB色譜工作站 C18（4.6×150nm，5um）色譜柱 Agilent1200紫外檢測儀 TU-1800型紫外分光光度法

2.1.2試劑尼群地平對照品（批號100585-200602中國藥品生物制品檢定所）尼群地平片（市售品，山東莒縣制藥廠，規(guī)格為10mg）甲醇為色譜醇10%乙醇乙醇為色譜純 水為蒸餾水

2.2HPLC法

2.2.1色譜條件與系統(tǒng)實用性試驗C18色譜柱 流動相：甲醇：水（65：35）；流速1.0ml/min；檢測波長：237nm；進(jìn)樣量20ul；柱溫：30℃。在該色譜條件下，尼群地平的保留時間為7.14min；理論塔板數(shù)為2318。

2.2.2樣品溶液的制備取本品20片，精密稱定為1.5465g，研細(xì)，精密稱取細(xì)粉0.3865g，（約相當(dāng)于尼群地平50mg），置100ml量瓶中，加甲醇使尼群地平溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液5ml，置50ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。2.2.3標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備精密稱取尼群地平對照品0.05010g，置25ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液①。

2.2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制在儲備液①中精密量取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml分別置100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。按“2.2.1”項下色譜條件進(jìn)樣，測定峰面積積分值，以尼群地平濃度對峰面積進(jìn)行回歸，得回歸方程（n=5）A=-10.7C+7.9×107，尼群地平在范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系r=0.99991，色譜圖見圖1。