孟艷平　張生　曹興華

【摘 要】 目的 探討血清（1，3）-β-D葡聚糖（G試驗）在檢測侵襲性真菌病中的診斷價值。方法 采用MB-80微生物快速動態(tài)檢測系統(tǒng)及配套試劑盒，對2011年10月-2012年10月漯河市中心醫(yī)院臨床疑似侵襲性真菌住院患者進行血清（1，3）-β-D葡聚糖檢測，分析G試驗在侵襲性真菌病和非侵襲性真菌病間的診斷作用及G試驗的靈敏度，特異度，準確度，陽性預測者值和陰性預測值。結果 侵襲性真菌病組（1，3）-β-D葡聚糖均值為455±91.08 pg/ml，非侵襲性真菌病組（1，3）-β-D葡聚糖均值為46.88±15.97pg/ml，兩組結果有顯著差異。本試驗中G試驗靈敏度76.0%，特異度81.3%.準確性80.2%，陽性預測值52.8%，陰性預測值92.5%。結論 G試驗可作為侵襲性真菌病（IFI）的診斷指標，具有較高的靈敏度和特異性。

【關鍵詞】 （1，3）-β-D葡聚糖；G試驗；侵襲性真菌病

【中圖分類號】 R392.7 【文獻標識碼】 A

由于臨床大量應用廣譜抗生素、激素治療、腫瘤和免疫抑制治療、插管等侵襲性治療，使得深部真菌感染疾病日益常見，侵襲性真菌感染已成為嚴重的并發(fā)癥之一。侵襲性真菌病是指真菌侵入人體，在組織，器官或血液中生長或繁殖，并導致炎癥反應及組織損傷的疾病。實驗室傳統(tǒng)方法中，病理活檢可以確診，但取材困難，不易被病人接受。培養(yǎng)法受影響因素較多，且培養(yǎng)時間較長，不適宜做早期診斷。為能盡早診斷，近幾年真菌的抗原檢測受到極大關注，其中血清（1，3）-β-D葡聚糖應用最廣，已成為真菌感染的診斷標準之一[1]。為探討（1，3）-β-D葡聚糖在侵襲性真菌感染中的診斷價值，對2011年10月-2012年10月漯河市中心醫(yī)院疑似侵襲性真菌感染的116例住院病人進行回顧性研究。

1 資料和方法

1.1 對象 標本取自2011年10月-2012年10月漯河中心醫(yī)院疑似侵襲性真菌感染的116名住院患者，其中男性82例，女性34例，平均年齡62歲。送檢科室分別來自呼吸科，血液科，腫瘤科，ICU病房。根據(jù)歐洲癌癥研究治療組織/真菌病研究組（EORTC/MSG）的診斷標準[2]，將患者分為臨床診斷侵襲性真菌感染組（IFI組）和非侵襲性真菌感染組（非IFI組）兩組，其中IFI 25人，非IFI 91人。

1.2 儀器和方法 采用北京金山川科技發(fā)展有限公司生產的MB-80微生物快速動態(tài)檢測系統(tǒng)及配套真菌檢測動態(tài)試劑盒，T02恒溫儀。對兩組患者早上空腹采血3-4ml。采樣過程要求用專用的無熱原真空采血管無菌操作。采樣后在2小時內及時送檢。樣本采集后在3000轉/分的離心機上離心5分鐘，取血清0.1ml加入0.9ml處理液內，在70℃恒溫儀中干熱10分鐘后，放入恒溫儀的冷卻區(qū)冷卻5分鐘。樣本處理液經加熱冷卻后，切忌振蕩，取上清液0.2ml加入反應主劑，待充分溶解后，需快速轉移至無菌無熱原平底專用試管中，之后插入反應通道，采用G試驗比色法測定。試驗結束后由標準曲線自動計算出待測血清中（1，3）-β-D-葡聚糖的含量。

參考閾值：陰性<60pg/ml，中介60-100 pg/ml，屬臨床觀察期，建議動態(tài)采血檢測。陽性>100pg/ml，建議再次采血以確診。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SPSS12.0統(tǒng)計軟件進行處理，組間檢驗采用t檢驗，計數(shù)資料采用配對X2檢驗。P<0.01為統(tǒng)計學有差異。根據(jù)統(tǒng)計學公式，計算G試驗靈敏度，特異度，準確度，陽性預測值，陰性預測值。

2 結果

詳見表1。

25人（1，3）-β-D葡聚糖均值為455±91.08pg/ml，其中陽性結果>100pg/ml者19例，陰性結果<60pg/ml者6例。以假絲酵母菌感染者（1，3）-β-D葡聚糖含量最高。

2.1 非IFI組（91人）（1，3）-β-D葡聚糖均值為46.88±15.97pg/ml，其中陽性結果>100pg/ml者17人，陰性結果<60pg/ml者74人。

2.2 IFI組（1，3）-β-D葡聚糖值與非IFI組間進行t檢驗，t值為9.47，P<0.01，兩組結果有差異，具有統(tǒng)計學意義。

2.3 G試驗靈敏度=[真陽性/（真陽性+假陰性）]×100%=[19/（19+6）]×100%=76.0%，特異性=[真陰性/（真陰性+假陽性）]×100%=[74/（74+17）]×100%=81.3%.準確性=[（真陰性+真陽性）/總例數(shù)]×100%=[（74+17）/116]×100%=80.2%，陽性預測值=[真陽性/（真陽性+假陽性）]×100%=[19/（19+17）]×100%=52.8%，陰性預測值=[真陰性/（真陰性+假陰性）]×100%=[74/（74+6）] ×100%=92.5%。

3 討論

（1，3）-β-D-葡聚糖廣泛存在于真菌細胞壁中，占真菌壁成分50%以上，可特異性激活鱟（Limulus）變形細胞裂解物中的G因子，引起裂解物凝固，故稱G試驗。當真菌進入人體血液或深部組織后，經吞噬細胞處理后，（1，3）-β-D-葡聚糖可從胞壁中釋放出來，在血液及其他體液中的含量增高[3]。2009年，新修訂的歐洲癌癥一侵襲性真菌感染治療研究協(xié)作組和美國國立變態(tài)反應和感染病研究院真菌病研究組將（1，3）-β-D-葡聚糖納入侵襲性真菌感染擬診（probable）的標準之一[2]。

在臨床應用中，血清（1，3）-β-D葡聚糖（G試驗）除可以診斷常見的假絲酵母菌和曲霉菌感染外，還可以診斷少見真菌如鐮刀菌屬、鏈格孢、絲孢霉屬、肺孢子蟲等[4]的感染，是較好的IFI篩查指標。但毛霉菌細胞壁不含有（1，3）-β-D-葡聚糖，隱球菌具有較厚的莢膜，菌體裂解時（1，3）-β-D-葡聚糖釋放入血中的濃度很低，因此，該成分不能作為毛霉菌和隱球菌感染指標。在本次研究中，IFI組有6例假陰性。引起假陰性的主要原因有：①病原菌為隱球菌或毛霉菌。②標本采集后未及時送檢，導致（1，3）-β-D-葡聚糖分解代謝。③標本離心時間過長也會引起（1，3）-β-D-葡聚糖分解代謝。④定植菌幾乎不引起（1，3）-β-D一葡聚糖升高。在這6例假陰性患者中，2名是毛霉菌感染，3名假絲酵母菌感染者在檢測前用過抗真菌藥物，1名假絲酵母菌感染者標本放置時間過長，重新采血復查后G試驗變?yōu)殛栃?。其?9例IFI患者應用抗真菌藥物治療后有17例（1，3）-β-D-葡聚糖持續(xù)下降至正常值，與其臨床癥狀好轉相符合。在非IFI組，有17例G試驗陽性結果，出現(xiàn)假陽性的主要原因有①污染。②應用纖維素膜進行血液透析。③用過含白蛋白、凝血因子、免疫球蛋白等的靜脈制劑。④菌血癥特別是陽性球菌感染。⑤香菇多糖、裂殖菌多糖等抗腫瘤類藥物。本文17例假陽性原因分別為：5例是槍頭污染引起；3例是感染金黃色葡萄球菌菌血癥；2例是感染銅綠假單胞菌菌血癥；其他7例是腫瘤患者，檢測前用過白蛋白和香菇多糖等抗腫瘤藥物。連續(xù)多次檢測后有15例患者G試驗變?yōu)殛幮浴?/p>

本文研究中G試驗靈敏度（76.0%），特異性（81.3%），陽性預測值（52.8%），陰性預測值（92.5%），與趙醴[5]用同種方法研究G試驗的敏感度（81.8%），特異度（82.4%），陽性預測值（48.6%），陰性預測值（95.7%）結果相仿。目前認為，G試驗具有較高的陰性預測值，可以用來排除IFI。同時具有高靈敏度和高特異度的優(yōu)勢，但陽性預測值較低，可能與試驗方法和測試人群有關。在應用G試驗時我們要結合臨床癥狀和其他輔助檢查，最大限度排除其假陽性或假陰性，為患者的診斷提供更好的幫助。

參考文獻

[1] 黃曉軍，沈志祥，王愛霞，等.血液病/惡性腫瘤患者侵襲性真菌感染的診斷標準與治療原則（草案）[J].中華內科雜志，2005，44（7）：554-556.

[2] De Pauw B，Walsh TJ，Donneily JP，et a1.Revised definitions of invasive funsal disease from the European Organizationfor Research and Treatment of Cancer/InvasiveFungal Infections Cooperative Group and the NationalInstitute of Allergy and Infectious Diseases MycosesStudy Group（EORTC/MSG）Consensus Group[J].ClinInfect Dis，2008，46（12）：1813-1821.

[3] Mennink—Kersten MA，Donnelly JP，Verweij PE.De.Tection of circulating galactomannan for the diagnosisand management of invasive aspergiliosis[J].LancetInfect Dis，2004，4（6）：349-357.

[4] Cu6tara MS，Alhambra A，Moragues MD，et a1.De.tection of（1，3）-β-D-glucan as an adjunct tO diagnosis in a mixed population with uncommonproven invasive fungal diseases or with nn unusualclinical presentation[J].Clin Vaccine Immu-ml，2009，16（3）：423-426.

[5] 趙醴，湯靜燕，王瑩，等.血漿B-葡聚糖檢NJL童侵襲性真菌感染早期診斷價值探討[J].中國當代兒科雜志，2009，1l（11）：905，908.