李 明

（泰山學(xué)院體育學(xué)院，山東泰安271021）

柚皮為蕓香科植物柚（Citrus grandis L.）的果皮，其性味辛、甘、苦、溫，具有寬中理氣，化痰止咳之功效，用于氣滯腹脹，胃痛，咳嗽氣喘，疝氣痛。柚皮主要含黃酮類化合物、揮發(fā)油、礦物質(zhì)等，其中黃酮類化合物主要是柚皮苷，還有少量的新橙皮苷及其他黃酮類化合物[1-2]?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，柚皮提取物具有抗氧化、降血脂、抑菌抗炎、抑制血小板聚集及抑制腫瘤等作用[3-8]。只有少量外果皮用于涼果蜜餞加工、香精油提取以及中藥飲片加工，90%以上作為廢棄物而被丟棄，既污染環(huán)境，又不利于資源的綜合利用。目前關(guān)于柚皮的研究，主要集中在提取工藝及抗氧化、降脂抑菌等活性，關(guān)于抗疲勞及耐缺氧則鮮有報(bào)導(dǎo)。本實(shí)驗(yàn)擬以小鼠為研究對(duì)象，柚皮水提取液連續(xù)灌胃給藥，觀察柚皮水提液對(duì)缺氧和運(yùn)動(dòng)疲勞的作用，為進(jìn)一步開發(fā)柚皮的藥用價(jià)值提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

蜜柚 市售，果皮自然風(fēng)干即為柚皮；蒽酮、硫酸、亞硝酸鈉、鈉石灰、凡士林等 均為國(guó)產(chǎn)分析純；昆明種清潔級(jí)小鼠 體質(zhì)量l8～22g，雌雄各半，購(gòu)自山東泰邦生物制品有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（魯）2013-0006，在自由飲水、進(jìn)食環(huán)境中適應(yīng)性喂養(yǎng)5～7d后，用于實(shí)驗(yàn)。

RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器；T6型新世紀(jì)紫外分光光度計(jì) 北京普析通用儀器有限公司；游泳箱 自制。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 柚皮水提液的制備 精密稱取柚皮100g，加10倍量水置電爐上煎煮2次，每次1h，過濾，合并濾液，濾液濃縮至2g/mL水提液（相當(dāng)于每mL含生藥2g，加水稀釋成1、0.5g/mL，分別作為大、中、小三個(gè)劑量），置于4℃冰箱貯藏備用。

1.2.2 斷頭缺氧實(shí)驗(yàn) 取小鼠48只，隨機(jī)分為4組，即正常對(duì)照組（蒸餾水）、柚皮水提液小、中、大劑量組（0.5、1、2g/mL），分別灌胃給藥0.3mL/10g體重，每日1次，連續(xù)10d。末次給藥1h后，各組小鼠均在雙耳連線處快速斷頭，記錄小鼠斷頭后至張口喘氣停止時(shí)間（以小鼠張口呼吸停止且舌頭外露為標(biāo)志停止計(jì)時(shí)）[9]。

1.2.3 常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn) 取小鼠48只，分組及給藥方法同“1.2.2”。末次給藥1h后，將小鼠分別放入盛有15g鈉石灰的250mL廣口瓶?jī)?nèi)（每瓶1只），瓶口涂抹凡士林蓋嚴(yán)使之不漏氣，立即計(jì)時(shí)，以呼吸停止為指標(biāo)，記錄小鼠存活時(shí)間[9]。

1.2.4 負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn) 取小鼠48只，分組及給藥方法同“1.2.2”。末次給藥1h后，將小鼠尾部系以體重5%的鉛絲負(fù)重，置入溫度為25℃，水深30cm的游泳箱中負(fù)重游泳。記錄小鼠開始游泳到體力耗盡沉入水面8s不能浮出水面為止的時(shí)間，該時(shí)間為小鼠的力竭游泳時(shí)間[9]。此后迅速取出小鼠、斷頭處死，立即取出肝臟和大腿肌肉，加冰生理鹽水制備肝組織和肌肉組織勻漿，按照蒽酮-硫酸法測(cè)定肝糖原和肌糖原含量[10]。

2 結(jié)果與分析

2.1 柚皮水提液的耐缺氧作用

隨著現(xiàn)代競(jìng)技體育的迅猛發(fā)展，運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度也逐漸增大，高機(jī)體的耐缺氧和抗疲勞能力，是運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)和運(yùn)動(dòng)生理學(xué)關(guān)心和探討的問題，尋找安全有效的藥物也成為當(dāng)前領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。大強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)時(shí)機(jī)體內(nèi)需氧量增加而導(dǎo)致機(jī)體缺氧，糖酵解作用增強(qiáng)，乳酸生成增多并在體內(nèi)堆積。乳酸的還原可使體內(nèi)自由基消除酶受到破壞，導(dǎo)致自由基生成的底物增多，造成細(xì)胞過氧化損傷[11]。

表1 柚皮水提液的耐缺氧作用（n=12，±SD）Table 1 Effect of water extracts from pummel pericarp on hypoxia tolerance（n=12±SD）

表1 柚皮水提液的耐缺氧作用（n=12，±SD）Table 1 Effect of water extracts from pummel pericarp on hypoxia tolerance（n=12±SD）

注：與正常對(duì)照組比較*p<0.05，**p<0.01；與柚皮水提液小劑量組比較Δp<0.05，ΔΔp<0.01；表2同。

常壓缺氧存活時(shí)間（s）正常對(duì)照組 - 16.22±4.54 24.69±7.31柚皮水提液小劑量組 0.5 18.74±7.12 30.67±4.54*柚皮水提液中劑量組 1.0 25.08±5.77**Δ 38.22±8.57**Δ柚皮水提液大劑量組 2.0 28.65±6.58**ΔΔ 42.67±6.84**ΔΔ組別 劑量（g/mL）斷頭后張口呼吸時(shí)間（s）

表2 柚皮水提液的抗疲勞作用（n=12±SD）Table 2 Anti-fatigue Effect of water extracts from pummel pericarp in mice（n=12，±SD）

表2 柚皮水提液的抗疲勞作用（n=12±SD）Table 2 Anti-fatigue Effect of water extracts from pummel pericarp in mice（n=12，±SD）

組別 劑量（g/mL）力竭游泳時(shí)間（min）肝糖原含量（g/100g）肌糖原含量（g/100g）正常對(duì)照組 - 132.74±34.52 5.02±1.12 0.56±0.08柚皮水提液小劑量組 0.5 128.14±37.06 6.84±0.96 0.74±0.16柚皮水提液中劑量組 1.0 169.35±42.57*Δ 9.77±2.78**ΔΔ 1.17±0.39**ΔΔ柚皮水提液大劑量組 2.0 214.54±39.66**ΔΔ 12.55±3.11**ΔΔ 1.38±0.44**ΔΔ

本實(shí)驗(yàn)觀察了柚皮水提液的耐缺氧作用，結(jié)果見表1。柚皮水提液中、大劑量組小鼠斷頭后張口呼吸時(shí)間較正常對(duì)照組顯著延長(zhǎng)，差異極顯著（p＜0.01）；與柚皮水提液小劑量組相比有顯著性差異，其中中劑量差異顯著（p＜0.05），大劑量差異極顯著（p＜0.01）。小、中、大劑量柚皮水提液均可顯著延長(zhǎng)小鼠常壓缺氧狀態(tài)下的存活時(shí)間，與正常對(duì)照組比較，小劑量差異顯著（p＜0.05），中、大劑量具有極顯著差異（p＜0.01），且柚皮水提液中、大劑量組的存活時(shí)間顯著長(zhǎng)于小劑量組（分別是p＜0.05和p＜0.01）。

2.2 柚皮水提液的抗疲勞作用

疲勞最直接和客觀的表現(xiàn)是運(yùn)動(dòng)耐力下降，有時(shí)也是機(jī)體發(fā)展到傷病狀態(tài)的一個(gè)先兆。近年來，學(xué)者對(duì)運(yùn)動(dòng)疲勞的發(fā)生機(jī)制進(jìn)行了有益的探索，并提出了很多假說。能量耗竭學(xué)說提出，運(yùn)動(dòng)過程中大量能源物質(zhì)被消耗又不能及時(shí)補(bǔ)充，是產(chǎn)生運(yùn)動(dòng)疲勞的主要原因[12]。因此，體內(nèi)糖原含量可反映疲勞發(fā)生的快慢或程度。增加糖原儲(chǔ)備或減少運(yùn)動(dòng)時(shí)糖原的消耗，能夠給機(jī)體提供更多的能量，從而達(dá)到抗疲勞的目的[13]。小鼠游泳實(shí)驗(yàn)是評(píng)價(jià)藥物抗疲勞能力的主要方法，力竭游泳時(shí)間可作為評(píng)價(jià)疲勞時(shí)運(yùn)動(dòng)耐力的重要指標(biāo)。

本實(shí)驗(yàn)觀察了柚皮水提液的抗疲勞作用，結(jié)果見表2。從表2可以看出，與正常對(duì)照組比較，柚皮水提液中、大劑量組小鼠力竭游泳時(shí)間明顯延長(zhǎng)（分別為p＜0.05和p＜0.01），肝糖原和肌糖原含量極顯著增加（p＜0.01），而小劑量組的力竭游泳時(shí)間和肌糖原含量則無顯著變化（p＞0.05），提示中、大劑量的柚皮水提液可緩解負(fù)重游泳小鼠的疲勞發(fā)生。

3 結(jié)論

柚皮水提液能顯著延長(zhǎng)常壓下小鼠耐缺氧存活時(shí)間和斷頭后張口呼吸時(shí)間，明顯提高小鼠耐缺氧能力，表現(xiàn)出一定的量效關(guān)系。柚皮水提液還能顯著延長(zhǎng)負(fù)重游泳小鼠的力竭游泳時(shí)間，增加體內(nèi)肝糖原和肌糖原貯備，從而發(fā)揮延緩小鼠疲勞發(fā)生的作用，具有良好的開發(fā)應(yīng)用前景，但其確切的作用機(jī)制尚有待進(jìn)一步研究和探討。

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