李紅專，高 潔，韓冰冰，趙海軍，王世軍

(1山東中醫(yī)藥大學(xué)，濟(jì)南250355;2濟(jì)南市第四人民醫(yī)院)

梔子是茜草科植物梔子的干燥成熟果實(shí)，性味苦寒，入心、肺、三焦經(jīng)，具有瀉火除煩、清熱利濕、涼血解毒的功效，臨床常用于治療熱病心煩、濕熱黃疸、血淋澀痛、血熱吐衄、目赤腫痛、火毒瘡瘍等證?！侗静菥V目》記載梔子具有解五種黃病、利五淋、通小便、解消渴及明目的功效［1］。近年研究發(fā)現(xiàn)，梔子提取物有降低血糖的作用［2］。但其作為藥食同源中藥長(zhǎng)時(shí)間應(yīng)用對(duì)胰島的影響鮮見報(bào)道。2012年5月～2013年5月，我們觀察了長(zhǎng)時(shí)間應(yīng)用梔子對(duì)大鼠血糖、胰島功能及結(jié)構(gòu)的影響?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 健康Wistar大鼠30只，雌雄各半，體質(zhì)量(200±20)g，購(gòu)自魯抗醫(yī)藥集團(tuán)股份有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(許可證編號(hào):SCXK20080002);大鼠糖化血紅蛋白(HbA1C)酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(批號(hào):BPE 10723R)、大鼠胰島素(INS)酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(批號(hào):BPE 10143R)、大鼠α-淀粉酶(AMY)酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(批號(hào):BPE 10280)、大鼠C肽(CP)酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(批號(hào):BPE 10552R)購(gòu)自北京博奧森生物科技有限公司;血糖儀購(gòu)自德國(guó)羅氏(Accu-chek Active型);血糖試紙購(gòu)自德國(guó)羅氏(批號(hào):23464621);AO切片機(jī)為美國(guó)光學(xué)儀器公司產(chǎn)品;梔子購(gòu)自濟(jì)南市建聯(lián)中藥店，經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)王世軍教授鑒定為藥典規(guī)定藥材。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 梔子水煎劑制備 按《中華人民共和國(guó)藥典》(2010年版)記載梔子臨床用量的最高劑量(10 g)10倍換算成大鼠給藥劑量。梔子水煎液制備，按傳統(tǒng)臨床用藥方法對(duì)梔子進(jìn)行處理，水煎濃縮，生藥濃縮濃度為0.9 g/mL，4℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 動(dòng)物分組及干預(yù) 30只大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，按體質(zhì)量隨機(jī)分為對(duì)照組、梔子組、模型組，每組各10只。模型組禁食12 h后，按65 mg/kg體質(zhì)量一次性腹腔注射1%鏈脲佐菌素(STZ)溶液制作糖尿病模型。梔子組為正常大鼠，按10 mL/(kg·d)體質(zhì)量給予梔子藥液連續(xù)灌胃40 d。對(duì)照組與模型組給予10 mL/(kg·d)生理鹽水灌胃，連續(xù)給藥40 d。

1.2.3 標(biāo)本取材 41 d后處死大鼠，腹主靜脈取血，分離血清。每組于末次給藥后禁食12 h，4%水合氯醛麻醉(0.1 mL/kg)，下腔靜脈取血，手術(shù)取出胰腺。血液于L-20A型全自動(dòng)高速冷凍離心機(jī)離心，4 ℃，3 500 r/min，15 min，取上清液，分裝后于－20℃冰箱保存。將胰腺固定于10%多聚甲醛中，經(jīng)脫水、石蠟包埋等步驟后，切片，行HE染色。

1.2.4 觀察指標(biāo) ①血糖及胰島功能指標(biāo):取血清，按照ELISA試劑盒方法步驟，采用全自動(dòng)酶標(biāo)儀法(RT-2100C型，深圳雷杜 Rayto公司)檢測(cè)HbA1C、INS、AMY及C-P水平。采用血糖檢測(cè)儀檢測(cè)下腔靜脈血血糖水平。②胰腺組織病理變化:采用HE染色，觀察胰腺組織病理變化。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件，計(jì)量數(shù)據(jù)以±s表示，采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血糖及胰島功能指標(biāo) 與對(duì)照組相比，梔子組HbA1C、INS、C-P、血糖均降低(P ＜0.05);與模型組相比，梔子組 HbA1C、C-P、血糖水平均降低(P＜0.05);與模型組相比，梔子組INS及C-P水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。見表1。

表1 三組血糖及胰島功能指標(biāo)變化(±s)

注:與對(duì)照組比較，*P ＜0.05;與模型組比較，#P ＜0.05

組別 n HbA1C(ng/mL) INS(mIU/L) AMY(U/L) C-P(pg/mL) 血糖(mmol/L)對(duì)照組 10 20.21 ±1.71 4.10 ±0.25 79.86 ±10.36 3 758.69±253.16 10.46 ±3.40梔子組 10 17.53 ±3.46*# 3.73 ±0.37* 72.46 ±13.24 3 068.47 ±719.03*# 4.95 ±1.47*#模型組 10 21.46 ±4.46 3.50 ±0.60* 75.59 ±11.14 3 575.21 ±516.53 33.98 ±7.37*

2.2 胰腺組織病理變化 對(duì)照組胰腺組織清晰，呈圓形或橢圓形，結(jié)構(gòu)完整，細(xì)胞數(shù)量較多，未見炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。梔子組胰腺組織較清晰，呈圓形或橢圓形，結(jié)構(gòu)較完整，但可見胰島組織肥大、細(xì)胞空泡樣變性、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等病理改變。模型組胰島萎縮，體積明顯縮小，細(xì)胞核呈固縮狀態(tài)。見圖1。

圖1 三組胰島組織病理變化(HE染色，40×)

3 討論

中醫(yī)將糖尿病病機(jī)歸納為陰虛為本，燥熱為標(biāo)［3］;將糖尿病分為燥熱傷津、胃熱津虧、氣陰兩虛、陰陽(yáng)兩虛、陰虛陽(yáng)浮諸證型［4］。梔子具有清熱瀉火的功效，是臨床常用的中藥之一?！端幮哉摗分杏涊d“梔子殺蟅蟲毒，去熱毒風(fēng)，利五淋，主中惡，通小便，解五種黃病，明目，治時(shí)疾除熱及消渴口干，目赤腫痛”?！毒霸廊珪分刑岬健皸d子，味苦，氣寒。味厚氣薄，氣浮味降，陰中有陽(yáng)。因其氣浮，故能清心肺之火，解消渴，療時(shí)疾躁煩，心中懊惱”。故在中醫(yī)臨床上梔子常用于糖尿病的治療。

現(xiàn)代藥理研究表明，梔子提取物能在一定程度上降低血糖。梔子中提取的梔子苷與梔子苷屬同類化合物的環(huán)烯萜苷均有降血糖的作用［5］。謝文利等［6］發(fā)現(xiàn)梔子中提取的京尼平苷可明顯降低糖尿病模型大鼠血糖、提高糖耐量。京尼平苷對(duì)降低血清胰島素、提高胰島素敏感指數(shù)和降低血脂也有明顯療效［7］。晉玉章等［8］發(fā)現(xiàn)，梔子中提取的西紅花苷可明顯降低血糖、膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平，升高蔗糖糖耐量和高密度脂蛋白水平。費(fèi)曜等［9］認(rèn)為梔子可能是通過(guò)保護(hù)胰島β細(xì)胞或促進(jìn)受損β細(xì)胞的修復(fù)促進(jìn)胰島素分泌，其有效作用可能是多靶點(diǎn)的。

梔子是一種藥食同源中藥，但其藥性苦寒，不宜久服。本研究的目的是觀察梔子對(duì)正常大鼠血糖及胰島的影響及長(zhǎng)期服用梔子是否存在對(duì)胰島的毒性作用，結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，梔子組HbA1C、INS、C-P、血糖均有降低趨勢(shì)。與模型組相比，梔子組HbA1c、C-P、血糖均降低，提示梔子具有降低大鼠血糖的作用，這與 Miura 等［5］、Kimura 等［10］、周瑞華等［11］的結(jié)論是一致的。而與模型組相比，梔子組血漿INS、C-P水平也出現(xiàn)下降，提示長(zhǎng)時(shí)間應(yīng)用寒性中藥梔子可以抑制正常大鼠胰島的胰島素的分泌能力。

本研究對(duì)胰島的鏡下觀察結(jié)果顯示，梔子組與模型組胰島存在明顯損傷，模型組胰島萎縮，體積明顯縮小，細(xì)胞核呈固縮狀態(tài);梔子組雖未達(dá)到模型組胰島的損傷程度，但切片顯示其胰島呈現(xiàn)水腫狀態(tài)，組織肥大、細(xì)胞空泡樣變性、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)等病理改變。

田義龍等［12］以梔子為主組成的梔子豉湯對(duì)糖尿病模型大鼠所進(jìn)行的干預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，梔子豉湯可以增加糖尿病大鼠的胰島素敏感。傅永錦等［13］利用梔子水提取物干預(yù)脂肪肝模型大鼠，結(jié)果顯示梔子可提高胰島素敏感指數(shù)。本研究發(fā)現(xiàn)梔子組灌服梔子40 d后胰島組織出現(xiàn)病理改變，結(jié)合INS、C-P水平下降，考慮長(zhǎng)期服用梔子可導(dǎo)致血液胰島素水平下降，但血糖降低的現(xiàn)象可能與機(jī)體對(duì)胰島素的敏感性提高有關(guān)。

以上研究結(jié)果說(shuō)明，長(zhǎng)時(shí)間應(yīng)用寒性中藥梔子可以導(dǎo)致胰島損傷及胰島素分泌水平下降，但由于梔子可以增加胰島素的敏感指數(shù)，因而血糖水平并未出現(xiàn)上升的趨勢(shì)。更長(zhǎng)時(shí)間的梔子用藥會(huì)不會(huì)因?yàn)橐葝u的損傷及胰島素分泌能力的下降，進(jìn)而導(dǎo)致血糖水平升高，從而引起更大的毒性作用還有待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。

綜上所述，苦寒中藥梔子可降低血糖水平，但長(zhǎng)期應(yīng)用會(huì)導(dǎo)致胰島結(jié)構(gòu)受損。如何通過(guò)配伍、炮制等手段，使其減毒增效，是今后值得深入研究的問(wèn)題。

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