甄 禎 葉 芳 李國霞 任方剛 王宏偉 魏百合

山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院血液科，太原 030001

惡性血液病患者T淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)分析

甄 禎 葉 芳▲李國霞 任方剛 王宏偉 魏百合

山西醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院血液科，太原 030001

目的 探討惡性血液病患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群的特征及其臨床意義。 方法 應(yīng)用流式細(xì)胞儀對(duì)120例惡性血液病患者（急性白血病、慢性白血病、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤）及40例正常人外周血T淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測(cè)，并比較各組的差異。 結(jié)果 惡性血液病組的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD3+CD16+CD56+T淋巴細(xì)胞比例低于對(duì)照組，CD8+T淋巴細(xì)胞比例高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；AL組、CL組、LM組和MM組的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD3+CD16+CD56+T淋巴細(xì)胞比例低于對(duì)照組，CD8+T淋巴細(xì)胞比例高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 惡性血液病患者機(jī)體免疫功能失衡導(dǎo)致機(jī)體免疫力下降，抗腫瘤能力減弱，T淋巴細(xì)胞亞群的檢測(cè)可以為惡性血液病的診斷、治療及判斷預(yù)后提供依據(jù)。

T淋巴細(xì)胞亞群；惡性血液??；免疫功能

血液病是指原發(fā)于造血系統(tǒng)的一類疾病，其中惡性血液病在所有惡性腫瘤中的發(fā)病率排第6位[1]，包括急慢性白血病、惡性淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤（MM）、骨髓增生異常綜合征等，是嚴(yán)重威脅人類健康的一類重大疾病。T淋巴細(xì)胞是參與機(jī)體免疫應(yīng)答功能的重要細(xì)胞成分，其在體內(nèi)的數(shù)量和比例關(guān)系相對(duì)穩(wěn)定，一旦出現(xiàn)數(shù)量變化或比例失調(diào)可導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展多伴有T淋巴細(xì)胞亞群的改變，出現(xiàn)免疫功能紊亂，相關(guān)文獻(xiàn)研究了惡性實(shí)體瘤患者體內(nèi)的T淋巴細(xì)胞亞群變化[2-4]。目前對(duì)惡性血液病患者體內(nèi)T淋巴細(xì)胞亞群，特別是NKT淋巴細(xì)胞比例變化的報(bào)道相對(duì)較少。本研究對(duì)120例惡性血液病患者和40例正常對(duì)照組外周血T淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行比較分析，評(píng)估惡性血液病患者的免疫功能，明確其在血液病的發(fā)病機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年9月～2013年9月在本院血液科住院患者120例為研究對(duì)象，所有患者均依據(jù)張之南血液病診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]明確診斷，其中急性白血?。ˋL）53例，慢性白血?。–L）18例，MM 21例，淋巴瘤（LM）28例；男68例，女52例；年齡16～87歲，平均57歲。對(duì)照組40例，男19例，女21例；年齡21～52歲，平均41歲。兩組的性別、年齡、身體狀況等比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器和試劑

流式細(xì)胞儀型號(hào)為Beckman-Coulter公司的FC 500（Beckman Coulter，U.S.A）；試劑單克隆抗體（McAb）為Beckman-Coulter公司產(chǎn)品。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

空腹抽取患者及健康體檢者外周靜脈血2 ml，置于EDTA抗凝管內(nèi)，2 h內(nèi)送檢，于試管內(nèi)分別加入單克隆抗體CD3-FITC/（CD16+CD56）-PE及CD4-FITC/ CD8-PE/CD3-PC5，然后吸取樣本100 μl，PBS緩沖液1 ml，混勻，室溫避光孵育15 min后加入溶血素，混勻后避光反應(yīng)10 min，再于試管中加入PBS緩沖液2 ml進(jìn)行洗滌，離心后棄上清液，重復(fù)洗滌1次，最后加PBS緩沖液500 μl，置于流式細(xì)胞儀中進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，計(jì)量資料以±s表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組T淋巴細(xì)胞亞群變化的比較

惡性血液病組的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD3+CD16+CD56+T淋巴細(xì)胞比例低于對(duì)照組，CD8+T淋巴細(xì)胞比例高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。

表1 兩組T淋巴細(xì)胞亞群變化的比較（%，±s）

表1 兩組T淋巴細(xì)胞亞群變化的比較（%，±s）

與對(duì)照組比較，*P＜0.05

組別 n C D3+ C D4+ C D8+ C D4+/ C D8+C D3+C D16+C D56+惡性血液病組對(duì)照組1 2 0 6 5 . 1 2 ± 5 . 3 6*2 7 . 2 4 ± 9 . 1 2*3 1 . 7 ± 7 . 1 1*0 . 9 1 ± 0 . 6 7*3 . 5 1 ± 1 . 3 7*4 0 7 3 . 1 ± 1 2 . 1 4 3 3 . 1 5 ± 1 0 . 2 8 2 6 . 7 ± 6 . 0 6 1 . 5 3 ± 0 . 8 7 6 . 4 5 ± 4 . 2 8

2.2 不同惡性血液病與對(duì)照組T淋巴細(xì)胞亞群變化的比較

AL組、CL組、LM組和MM組的CD3+、CD4+、CD4+/ CD8+、CD3+CD16+CD56+T淋巴細(xì)胞比例低于對(duì)照組，CD8+T淋巴細(xì)胞比例高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表2）。

表2不同惡性血液病組與對(duì)照組T淋巴細(xì)胞亞群變化的比較（%，±s）

表2不同惡性血液病組與對(duì)照組T淋巴細(xì)胞亞群變化的比較（%，±s）

與對(duì)照組比較，*P＜0.05

組別 n C D3+ C D4+ C D8+ C D4+/ C D8+ C D3+C D16+C D56+A L 組C L 組L M 組M M組對(duì)照組5 3 1 8 2 8 2 1 4 0 6 5 . 3 3 ± 5 . 3 5*6 6 . 7 5 ± 5 . 4 8*6 5 . 0 9 ± 4 . 7 3*6 3 . 3 1 ± 4 . 2 3*7 3 . 1 ± 1 2 . 1 4 2 5 . 1 3 ± 8 . 2 3*2 7 . 3 3 ± 8 . 7 8*2 7 . 8 9 ± 9 . 0 3*2 8 . 6 1 ± 9 . 3 2*3 3 . 1 5 ± 1 0 . 2 8 3 2 . 1 ± 7 . 2 1*3 2 . 6 ± 7 . 4 3*3 0 . 9 ± 6 . 6 1*3 1 . 2 ± 8 . 2 4*2 6 . 7 ± 6 . 0 6 0 . 9 5 ± 0 . 5 8*0 . 9 2 ± 0 . 6 2*0 . 9 0 ± 0 . 5 6*0 . 8 7 ± 0 . 5 4*1 . 5 3 ± 0 . 8 7 3 . 4 4 ± 1 . 0 5*3 . 5 3 ± 1 . 4 1*3 . 5 1 ± 1 . 3 2*3 . 5 6 ± 1 . 4 3*6 . 4 5 ± 4 . 2 8

3 討論

T淋巴細(xì)胞是一組由胸腺生成，細(xì)胞表面含有特殊標(biāo)志的免疫細(xì)胞，是機(jī)體執(zhí)行細(xì)胞免疫功能及免疫調(diào)節(jié)功能的重要細(xì)胞成分，包括Th細(xì)胞、Tc細(xì)胞、NKT淋巴細(xì)胞等。Th細(xì)胞的主要細(xì)胞表面標(biāo)志是CD3+和CD4+，是輔助性T淋巴細(xì)胞，也是遲發(fā)性超敏反應(yīng)的啟動(dòng)者，可以促使B細(xì)胞產(chǎn)生抗體的輔助細(xì)胞，具有誘導(dǎo)抑制性T淋巴細(xì)胞（Ts細(xì)胞）、促進(jìn)效應(yīng)細(xì)胞發(fā)揮抗腫瘤作用的功能[6]。Tc細(xì)胞是細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)反應(yīng)的效應(yīng)細(xì)胞，具有特異性殺傷腫瘤細(xì)胞的功能，Th/Tc一般相對(duì)穩(wěn)定，是機(jī)體細(xì)胞免疫狀態(tài)的中心環(huán)節(jié)，一旦出現(xiàn)Th細(xì)胞數(shù)量減少和Tc細(xì)胞數(shù)量增多或者Th/Tc比值發(fā)生改變時(shí)，可以使機(jī)體免疫功能發(fā)生變化[7]。NKT淋巴細(xì)胞具有NK細(xì)胞特性的T淋巴細(xì)胞亞群[8]，既有T淋巴細(xì)胞的抗腫瘤免疫活性，又具有NK細(xì)胞非MHC限制性殺瘤特點(diǎn)[9]，雖然NKT淋巴細(xì)胞在人體中的數(shù)量相對(duì)較少，但是機(jī)體抵御感染、抵抗腫瘤、調(diào)節(jié)自身免疫平衡的重要細(xì)胞[10]。

惡性腫瘤患者普遍存在免疫功能下降，主要體現(xiàn)在細(xì)胞免疫功能方面，且腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與T淋巴細(xì)胞亞群有密切聯(lián)系，機(jī)體抗腫瘤細(xì)胞免疫功能紊亂是腫瘤發(fā)生的重要原因之一[11]。細(xì)胞免疫是人體特異性免疫功能的一部分，相關(guān)研究表明惡性血液腫瘤患者體內(nèi)執(zhí)行細(xì)胞免疫功能的淋巴細(xì)胞數(shù)量減少和功能缺陷，使機(jī)體抗腫瘤能力減弱，從而導(dǎo)致惡性腫瘤細(xì)胞的生成和發(fā)展[12]。外周血中的CD3+、CD4+、CD8+、CD3+CD16+CD56+T淋巴細(xì)胞是反映細(xì)胞免疫功能的主要細(xì)胞，檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群的變化可以評(píng)估疾病的進(jìn)展和預(yù)后，T淋巴細(xì)胞各亞群之間有截然不同的細(xì)胞生理功能，在數(shù)量和功能上出現(xiàn)異常時(shí)，可導(dǎo)致機(jī)體正常細(xì)胞一系列的病理生理變化。本研究結(jié)果顯示，惡性血液病組患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD3+CD16+CD56+T淋巴細(xì)胞比例較正常對(duì)照組明顯下降，其中AL、CL、LM和MM患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD3+CD16+CD56+T淋巴細(xì)胞比例低于對(duì)照組，而CD8+T淋巴細(xì)胞較對(duì)照組明顯升高，說明惡性血液病患者出現(xiàn)免疫功能失衡，其抗腫瘤細(xì)胞數(shù)量減少，導(dǎo)致機(jī)體抗腫瘤能力減弱，與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道基本一致[13-14]。

綜上所述，分析惡性血液病患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化情況，可以評(píng)估惡性血液病患者的免疫功能狀況，明確其在血液病發(fā)病機(jī)制和疾病診斷中的作用，為患者進(jìn)一步治療及判斷預(yù)后提供一定的理論依據(jù)。

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Detection and analysis of T lymphocyte subset in patient with hematologic malignancy

ZHEN Zhen YE Fang▲LI Guo-xia REN Fang-gang WANG Hong-weiWEI Bai-he
Department of Hematology，the Second Hospital of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China

ObjectiveTo explore the feature and clinical significance of T lymphocyte subset in patient with hematologic malignancy.MethodsThe peripheral blood T lymphocyte subset of 120 cases of patients with hematologic malignancy（acute leukemia，chronic leukemia，lymphoma，multiple myeloma）and 40 cases of normal people was detected by flow cytometry respectively，the difference between each group was analyzed.ResultsCD3+,CD4+,CD4+/CD8+,CD3+CD16+CD56+T lymphocyte cell in hematologic malignancy group was lower than that in control group respectively,CD8+T lymphocyte cell in hematologic malignancy group was higher than that in control group,with statistical difference(P＜0.05).CD3+,CD4+, CD4+/CD8+,CD3+CD16+CD56+T lymphocyte cell in AL group,CL group,LM group and MM group was lower than that in control group respectively,CD8+T lymphocyte cell in AL group,CL group,LM group and MM group was higher than that in control group respectively,with statistical difference(P＜0.05).ConclusionThe imbalanced immunity function of patients with hematologic malignancy leads to decreased organism immunity,weakens the ability of resisting tumor.The detection of T lymphocyte cell subset can provide evidence for diagnosis,treatment and prognosis judgment for hematologic malignancy.

T lymphocyte subset;Hematologic malignancy;Immunity function

R733

A

1674-4721（2014）03（c）-0101-03

2014-02-18本文編輯：李亞聰）

山西省國際科技合作項(xiàng)目（2012081044-1）；山西省留學(xué)基金（晉留管辦發(fā)[2009]9號(hào)106）；山西省人事廳歸國留學(xué)人員擇優(yōu)資助項(xiàng)目（晉財(cái)社[2011]172號(hào)）

▲通訊作者