蔣衛(wèi)霞 尹栩芳

上海交通大學(xué)蘇州九龍醫(yī)院檢驗科，蘇州 215000

生化標(biāo)志物聯(lián)合檢測在急性冠脈綜合征診斷中的臨床意義

蔣衛(wèi)霞 尹栩芳

上海交通大學(xué)蘇州九龍醫(yī)院檢驗科，蘇州 215000

目的 探討生化標(biāo)志物聯(lián)合檢測在急性冠脈綜合征診斷中的臨床意義。 方法 檢測50例急性冠脈綜合征患者、30例健康體檢者的CRP、IL-6、P-選擇素、ICAM-1、MMPs-1的水平。 結(jié)果觀察組的CRP、IL-6、P-選擇素、ICAM-1、MMPs-1陽性率均顯著高于對照組（P＜0.05）。CRP、IL-6、P-選擇素、ICAM-1、MMPs-1聯(lián)合檢測陽性率顯著高于各項單獨檢測陽性率 （P＜0.05）。 結(jié)論 生化標(biāo)志物的聯(lián)合檢測有助于急性冠脈綜合征患者的早期診斷，值得推廣應(yīng)用。

聯(lián)合檢測；生化標(biāo)志物；急性冠脈綜合征

急性冠脈綜合征（acute coronary syndrome，ACS）涵蓋了從不穩(wěn)定型心絞痛（unstable angina，UA）、急性非ST段抬高性心肌梗死到ST段抬高性心肌梗死等一系列臨床病理生理狀態(tài)[1]，病理生理基礎(chǔ)是冠狀動脈粥樣硬化斑塊的不穩(wěn)定及伴隨血小板聚集血栓的形成[2-7]，從而導(dǎo)致不同程度的心肌缺血。近年來，越來越多的研究表明，感染炎癥與斑塊形成及不穩(wěn)定密切相關(guān)，ACS可能是一個炎癥過程。冠狀動脈炎癥加重內(nèi)皮功能障礙，促進(jìn)粥樣斑塊進(jìn)展，最終粥樣斑塊破裂和栓塞。目前，對于冠狀動脈炎癥和斑塊破裂還缺乏有效的檢測手段。在一定程度上，局部和全身的炎癥因子水平能反映冠狀動脈炎癥的嚴(yán)重程度，但缺乏獲得公認(rèn)的診斷指標(biāo)。斑塊破裂越嚴(yán)重往往表現(xiàn)出炎癥標(biāo)志物上升越高。本文重點探討聯(lián)合檢測各項生化標(biāo)志物在ACS患者診斷中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年4月～2013年4月在本院住院的50例經(jīng)臨床表現(xiàn)、心電圖及超聲檢查確診為ACS的患者設(shè)為觀察組，將30例同期健康體檢者設(shè)為對照組。觀察組：男32例，女18例；年齡32～74歲，平均（56.87± 11.26）歲；UA 11例、急性心肌梗死17例、穩(wěn)定型心絞痛22例。對照組：男19例，女11例；年齡31～75歲，平均（58.01±12.74）歲。兩組的性別及年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

清晨空腹靜脈取血2～3 ml，待血塊收縮后（＜2 h）分離血清，采用ELISA檢測試劑盒測定C-反應(yīng)蛋白（CRP）（購自上海科興商貿(mào)有限公司）、白介素-6（IL-6）（購自上海前塵生物科技有限公司）、P-選擇素 （購自上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司）、細(xì)胞間黏附分子-1 （ICAM-1）（購自上海銳聰科技發(fā)展有限公司）、基質(zhì)金屬蛋白酶-1（MMPs-1）（購自上?；馍锟萍加邢薰荆┧?。操作方法：①使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，收集血液后，1000×g離心10 min，將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離；②使用前將所有試劑充分混勻，不要使液體產(chǎn)生大量泡沫，以免加樣時加入大量氣泡，產(chǎn)生加樣誤差；③根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔，每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔，標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1∶1稀釋后加入50 μl于反應(yīng)孔內(nèi)；④加入稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品50 μl于反應(yīng)孔，加入待測樣品50 μl于反應(yīng)孔內(nèi)，立即加入50 μl的生物素標(biāo)記抗體，蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1 h；⑤甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30 s，甩去洗滌液，用吸水紙拍干，重復(fù)此操作3次，如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加1次；⑥每孔加入80 μl的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30 min；⑦甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30 s，甩去洗滌液，用吸水紙拍干，重復(fù)此操作3次，如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加1次；⑧每孔加入底物A、B各50 μl，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10 min，避免光照；⑨取出酶標(biāo)板，迅速加入50 μl終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果；⑩在450 nm波長處測定各孔的OD值。

1.3 判定標(biāo)準(zhǔn)

當(dāng)CRP>10 mg/L，IL-6>10 ng/L，P-選擇素>75 ng/ml，ICAM-1>304 ng/ml，MMPS-1>1.5 ng/ml時可認(rèn)為各指標(biāo)呈陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析和處理，計量資料以±s表示，采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組5項生化標(biāo)志物陽性率的比較

觀察組的CRP、IL-6、P-選擇素、ICAM-1、MMPs-1陽性率均顯著高于對照組（P＜0.05）（表1）。

表1 兩組5項生化標(biāo)志物陽性率的比較[n（%）]

2.2 5項生化標(biāo)志物聯(lián)合檢測陽性率和單項檢測陽性率的比較

CRP、IL-6、P-選擇素、ICAM-1、MMPs-1單獨檢測時分別有28例（56.0%）、26例（52.0%）、29例（58.0%）、22例（44.0%）、23例（46.0%）表現(xiàn)出異常增高，上述5項生化標(biāo)志物聯(lián)合檢測時，確診例數(shù)為49例（98.0%），5項生化標(biāo)志物聯(lián)合檢測陽性率顯著高于每項指標(biāo)單獨檢測的陽性率 （χ2=24.9012、28.2133、23.3100、 35.4055、33.5317，P＜0.05）。

3 討論

3.1 CRP

大量炎癥因子已被闡明，其大部分被相關(guān)資料證實能起炎癥介質(zhì)的作用。CRP是研究最多的炎癥標(biāo)志物[8]，CRP濃度在UA和心肌梗死患者中是升高的，其是預(yù)測冠心病嚴(yán)重程度的重要指標(biāo)。在所有的已知炎癥因子中，只有高敏感性CRP適合于臨床的快速診斷和治療，特別在ACS中，其是一個很好的選擇。與非ST段抬高性心肌梗死相比，ST段升高伴高水平CRP患者的住院死亡率和3年心性死亡率更高。在非ST段抬高性心肌梗死的ACS患者中，高水平的CRP提示更高的死亡率，即使在肌鈣蛋白正常的患者也存在同樣情況。CRP預(yù)示更糟的預(yù)后，其中包括成功的PCI后的死亡，且CRP升高與猝死存在相關(guān)性，粥樣斑塊破潰或斑塊侵蝕作用所致的猝死患者，其血清及粥樣斑塊中均有較高的CRP水平。在動脈狹窄手術(shù)中，高水平的CRP可能與不穩(wěn)定粥樣斑塊相關(guān)，可能由斑塊中的巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞所致。細(xì)胞因子介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)之間的不平衡所激發(fā)的內(nèi)源性抗炎或促炎反應(yīng)是ACS結(jié)局的主要決定因素，反映循環(huán)CRP水平。CRP增高不僅與ACS的發(fā)生相關(guān)，而且直接關(guān)系到ACS短期和長期不良預(yù)后，還能獨立預(yù)測血管重建術(shù)后再狹窄以及包括死亡在內(nèi)的主要事件的發(fā)生，因此，CRP促進(jìn)了內(nèi)皮細(xì)胞功能的損傷、炎癥、粥樣斑塊不穩(wěn)定和血栓[9-10]，均是不利于或增加ACS的風(fēng)險。

3.2 白介素

白介素屬于一類細(xì)胞間功能調(diào)節(jié)因子，介導(dǎo)各種炎癥反應(yīng)，如動脈粥樣硬化、風(fēng)濕、自身免疫疾病、感染等。各類白介素作用不盡相同，可降低或促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生，其中IL-6屬于ACS患者病情惡化致死的典型炎性標(biāo)志物，可指導(dǎo)此病的診治，如在早期進(jìn)行IL-6水平的檢測有助于早期治療，降低病死率。在Fragmin和FRISC-2對ACS患者的分析中發(fā)現(xiàn)，IL-6可視為一個冠心病死亡風(fēng)險的獨立危險因素。如果將患者的IL-6水平控制在介入治療前水平，能顯著降低死亡率。即使是健康人群，在正常范圍內(nèi)有相對高的IL-6水平，也預(yù)示著將來發(fā)生心肌梗死的危險大大增加。IL-6水平和CRP水平相互影響，可以作為一個獨立因素來評價風(fēng)險。

3.3 選擇素

選擇素一般是指L-選擇素、E-選擇素、P-選擇素，分別是指白細(xì)胞選擇素、血小板選擇素及內(nèi)皮細(xì)胞選擇素。L-選擇素研究較少，活化的內(nèi)皮細(xì)胞常表達(dá)E-選擇素，內(nèi)皮細(xì)胞及多形核中性粒細(xì)胞的黏附經(jīng)由E-選擇素介導(dǎo)。P-選擇素主要包括兩類，即可溶性及跨膜性，前者可溶于血漿，無法跨膜，主要功能為可與白細(xì)胞表面的受體結(jié)合，從而阻礙跨膜選擇素與此受體結(jié)合，與跨膜選擇素存在競爭關(guān)系，最終使白細(xì)胞黏附、活化受到抑制；后者表達(dá)短暫，僅在內(nèi)皮細(xì)胞及血小板活化時在細(xì)胞膜上有所表達(dá)，迅速而短暫，主要功能為參與炎癥反應(yīng)，即內(nèi)皮細(xì)胞及白細(xì)胞黏附、移動、積聚、活化的介導(dǎo)及進(jìn)而參與炎癥因子的釋放，成為血小板活化有力的參考指標(biāo)。在臨床上，心肌梗死患者可表現(xiàn)P-選擇素的升高，特別是急性期及UA時，其表達(dá)水平明顯升高，但升高水平受發(fā)病時間的限制，據(jù)Hope等測定，發(fā)病時間在2.3～17.3 h的患者及發(fā)病24 h的患者P-選擇素升高均不明顯，而在另外一組研究中提到胸痛患者3個月內(nèi)發(fā)生嚴(yán)重心臟事件為終點進(jìn)行統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)P-選擇素顯著升高[11]。

3.4 免疫球蛋白

免疫球蛋白大體上可分為血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子-1、VCAM-1及ICAM，前兩者研究較后者少，均為炎癥表達(dá)因子，位于血管內(nèi)皮，后者進(jìn)一步分為3種及ICAM-1、ICAM-2及ICAM-3，可結(jié)合于整合素MAC-1及LFA-1，作為黏附分子作用于免疫系統(tǒng)，發(fā)揮重要的功能，尤其在淋巴細(xì)胞的特異抗原反應(yīng)中極其關(guān)鍵，同時參與內(nèi)皮細(xì)胞與白細(xì)胞相互作用介導(dǎo)炎癥的過程。以心肌細(xì)胞舉例說明，細(xì)胞因子刺激或低氧狀態(tài)，心肌細(xì)胞表面出現(xiàn)較多的ICAM-1，中性粒細(xì)胞表面分布的其配體LFA-1與之結(jié)合，最終使中性粒細(xì)胞與心肌細(xì)胞黏附增多，促進(jìn)心肌細(xì)胞壞死。

3.5 MMPs

已發(fā)現(xiàn)的MMPs共有16種之多，其中MMP-1、MMP-2、MMP-3、MMP-9及MMP-12表達(dá)于平滑肌細(xì)胞，均屬于內(nèi)肽酶家族，依賴于Zn2+。其中MMP-9是不穩(wěn)定性動脈粥樣硬化的高危因素，其屬于巨噬細(xì)胞分泌的激活巨噬細(xì)胞的關(guān)鍵因素之一，主要是經(jīng)降解細(xì)胞外基質(zhì)，出現(xiàn)粥樣斑塊的不穩(wěn)定。

全身和局部的動脈炎癥都是ACS的相關(guān)因素，促進(jìn)其發(fā)生和發(fā)展。通過檢測炎癥因子水平，結(jié)合臨床癥狀、心電圖和心肌標(biāo)志物變化，對ACS患者進(jìn)行危險分層比僅僅根據(jù)臨床危險因素更有價值。本研究結(jié)果提示，生化標(biāo)志物的聯(lián)合檢測對于ACS患者的早期診斷、高確診率具有重要的臨床意義?？寡字委熢贏CS治療中日趨重要，對目標(biāo)炎癥的靶向治療正在研制開發(fā)，隨著對炎癥相關(guān)基因的深入了解，炎癥在ACS中的作用將會更加明確。

[1]操明，呂彩霞，董璇，等.合并糖尿病的急性冠脈綜合征患者共刺激分子與炎癥指標(biāo)的研究[J].中華老年多器官疾病雜志，2013，12（2）：125-128.

[2]李道麟.急性冠脈綜合征患者血中CgA、BNP與NE水平變化的臨床觀察[J].中國實驗診斷學(xué)，2012，16（7）：1314-1316.

[3]王斌.NSTE-ACS患者的識別與處理[J].中國全科醫(yī)學(xué)·醫(yī)生讀者版，2012，15（4）：2-5.

[4]文衛(wèi)紅.急性冠脈綜合征冠狀動脈造影112例分析[J].中國現(xiàn)代醫(yī)藥雜志，2011，13（5）：89-90.

[5]劉漢華，晏凱利，胡曉軍，等.普羅布考對急性冠脈綜合征患者頸動脈粥樣硬化斑塊穩(wěn)定性及血清hs-CRP和MMP-9的影響[J].實用醫(yī)學(xué)雜志，2010，26（12）：2199-2201.

[6]趙文淑.急性冠脈綜合征[J].中國臨床醫(yī)生，2010，38（1）：15-18.

[7]王翠英，王宇朋，李敏.BNP水平在急性冠脈綜合癥危險分層中的意義[J].中國醫(yī)學(xué)工程，2010，9（4）：159-160.

[8]李春敬，左琳琳，陳暉，等.流行性腮腺炎患者血漿超敏C-反應(yīng)蛋白檢測的意義[J].中華實驗和臨床感染病雜志·電子版，2013，7（2）：105-106.

[9]張偉，楊銀利，吳潔瓊，等.潰瘍性結(jié)腸炎患者血清腫瘤壞死因子-α與C反應(yīng)蛋白水平變化及意義[J].中華實用診斷與治療雜志，2013，27（7）：681-682.

[10]王勃.CRP和D-二聚體水平對PCI術(shù)前不穩(wěn)定型心絞痛預(yù)后評價[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2013，19（10）：67-68.

[11]沈彩云.冠心病患者脂類代謝及炎癥因子與代謝綜合征關(guān)系探究[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2012，18（23）：43-44.

本刊醫(yī)學(xué)檢驗欄目介紹

以報道臨床醫(yī)學(xué)實驗診斷方法學(xué)為重點，主要報道檢驗醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的最新科研成果，實用技術(shù)的新進(jìn)展，各種檢驗的方法與試劑、儀器的性能和特點等內(nèi)容。稿件要求：資料準(zhǔn)確、數(shù)據(jù)真實、論據(jù)可靠、統(tǒng)計學(xué)方法正確。

地 址：北京市朝陽區(qū)通惠家園惠潤園5-3-602《中國當(dāng)代醫(yī)藥》雜志社 郵 編：100025

傳 真：010-59679056 投稿熱線：010-59679076/59679077 投稿信箱：zgddyy@163.com

Clinical value of combined detection of biochemical markers in the diagnosis of acute coronary syndrome

JIANG Wei-xia YIN Xu-fang
Department of Laboratory,Suzhou Jiulong Hospital of Shanghai Jiaotong University,Suzhou 215000,China

ObjectiveTo study the clinical value of combined detection of biochemical markers in the diagnosis of acute coronary syndrome.Methods50 patients with acute coronary syndrome and 30 healthy adults were recruited.CRP, IL-6,P-selection,ICAM-1,MMPs-1 in two groups was measured rspectively.ResultsCRP,IL-6,P-selection,ICAM-1, MMPs-1 in observation group was significantly higher than that in control group respectively(P＜0.05).The combined detection positive rate of CRP,IL-6,P-selection,ICAM-1 and MMPs-1 was significantly higher than that of single detection respectively(P＜0.05).ConclusionThe combined detection of biochemical markers might be helpful for the early diagnosis of acute coronary syndrome,it is worthy of promotion and application.

Combined detection;Biochemical markers;Acute coronary syndrome

R541.4

A

1674-4721（2014）03（c）-0093-03

2014-02-08本文編輯：李亞聰）