趙江林 ，劉建紅 ，侯擁 ，楊曉君

（1.新疆維吾爾自治區(qū)克拉瑪依市中心醫(yī)院，新疆 克拉瑪依 834000； 2.新疆維吾爾自治區(qū)烏魯木齊市中醫(yī)醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830000； 3.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與藥學(xué)學(xué)院，新疆 烏魯木齊 830052）

苦杏仁為薔薇科植物杏 Prunus armeniaca L.的成熟果實(shí)苦味種仁，我國(guó)主產(chǎn)于新疆、黑龍江、遼寧、吉林、內(nèi)蒙古、寧夏、甘肅、河北、陜西、山西等省區(qū)，具有祛寒止咳、燥濕祛痰、除腐愈傷等功效，臨床用于寒性咳嗽、濕性痰多、支氣管炎及各種皮膚創(chuàng)傷[1]。巴旦杏為薔薇科植物巴旦杏 Amygdales communist L.的成熟果實(shí)，根據(jù)植物種子苦或甜分為苦巴旦杏 Amygdalus communist L.val.amara 和甜巴旦杏 Amygdalus communist L.var.dulcis 兩種，我國(guó)新疆、甘肅、陜西、內(nèi)蒙古等地有栽培，國(guó)外北非、地中海沿岸地區(qū)和歐洲其他地區(qū)等亦有栽培[2]，具有潤(rùn)肺止咳、潤(rùn)腸軟便、祛寒壯腰、熱膚生輝、身寒壯陽(yáng)、提高視力、填精固精等功效，臨床主治干寒性或黑膽質(zhì)性疾病，如干性肺虛咳嗽、身瘦體弱、記憶減退、大便不通、寒性腰膝酸軟[1]228-229，近年來(lái)的研究有所增加[3]。苦杏仁苷（amygdalim）屬芳香族氰苷，在植物界分布廣泛，其中以薔薇科植物（杏、桃、李）種子的含量最高[4]。其結(jié)構(gòu)式為苯羥基乙氰-β-D葡萄糖-6-β-D葡萄糖苷，是由1分子苯甲醛、1分子氫氰酸和2分子葡萄糖組成，本身無(wú)毒，遇熱易分解，生成的氫氰酸有劇毒。其主要生理功能有鎮(zhèn)咳、平喘、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、降血糖和抗?jié)僛5]。本試驗(yàn)中，對(duì)苦杏仁和苦巴旦杏仁進(jìn)行不同滅酶方法處理，采用紫外分光光度法測(cè)定苦杏仁苷的含量，并進(jìn)行含量比較分析[6]，旨在為建立適宜的苦杏仁苷加工方法提供基礎(chǔ)依據(jù)。

1 儀器與試藥

TU-1800SPC型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）；AL204型電子分析天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）；RE-52B型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；HH-S型數(shù)顯恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠)；SHB-Ⅲ型循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）?？嘈尤?、苦巴旦杏仁購(gòu)于新特藥醫(yī)藥公司（批號(hào)為20100925001），經(jīng)本院生藥室鑒定為杏 Prunus armeniaca L.和巴旦杏 Amygdales communist L.的成熟干燥種仁；苦杏仁苷對(duì)照品(C20H27NO11＝457.44，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為820-200002)；無(wú)水乙醇，石油醚，蒸餾水均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 苦杏仁苷對(duì)照品溶液配制

精密稱(chēng)取在105℃恒溫干燥至恒重的苦杏仁苷對(duì)照品2.5 mg，置5 mL容量瓶中，用蒸餾水溶解，定容至刻度，制成質(zhì)量濃度為0.5 g/L的苦杏仁苷對(duì)照品貯備溶液。

2.2 供試品溶液制備

2.2.1 藥材處理

分別稱(chēng)取4份藥材（苦杏仁3份、苦巴旦杏仁1份），均20 g，快速?zèng)_洗，去除灰塵，室溫下晾干，備用。

2.2.2 滅酶

將4份供試品分別用不同方法進(jìn)行滅酶處理，苦杏仁1號(hào)沸水煮5 min，苦杏仁 2號(hào)沸水煮 10 min，苦杏仁 3號(hào)蒸 30 min，苦巴旦杏沸水煮10 min。滅酶后，將供試藥材自然晾干后，平鋪烘箱中，于60℃下干燥1 h，取出，放冷至室溫，粉碎機(jī)粉碎，過(guò)20目篩。

2.2.3 脫脂

將粉碎過(guò)的4份供試品中分別加入40 mL的石油醚[7]，在70～80℃下，水浴攪拌脫脂40 min，抽濾，濾餅再重復(fù)提取2次，每次用石油醚20 mL和15 mL，得4份脫脂醚。

2.2.4 溶液制備

將4份脫脂醚中分別加入40 mL的無(wú)水乙醇[8]，在80～90℃下水浴攪拌提取40 min，趁熱過(guò)濾，濾餅再重復(fù)提取2次，每次用無(wú)水乙醇20 mL，合并3次濾液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸餾回收無(wú)水乙醇，至濃縮液約20 mL，倒入干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，水浴鍋上蒸干，用水溶解，移至100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，得苦杏仁1號(hào)、苦杏仁2號(hào)、苦杏仁3號(hào)、苦巴旦杏仁供試品溶液。

2.3 紫外吸收光譜測(cè)定

精密稱(chēng)取苦杏仁苷對(duì)照品2.5 mg，制成質(zhì)量濃度為0.5 g/L的苦杏仁苷對(duì)照品溶液，在220～300 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)測(cè)定吸光度 A值，并以蒸餾水作空白，記錄其紫外吸收光譜。結(jié)果見(jiàn)圖 1?？嘈尤受沼?58，264，275 nm 波長(zhǎng)處有3個(gè)吸收峰，前2個(gè)吸收峰顯示較大吸收強(qiáng)度，又以264 nm波長(zhǎng)處峰值最大。

圖1 苦杏仁苷的紫外光譜圖

2.4 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：精密稱(chēng)取在105℃度恒溫干燥至恒重的苦杏仁苷對(duì)照品50 mg，置50 mL容量瓶中，用蒸餾水溶解，定容至刻度，得1 g/L的苦杏仁苷對(duì)照品貯備溶液，置冰箱（4℃左右）保存，備用。分別取上述溶液 0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5，4.0 mL，用蒸餾水稀釋?zhuān)ㄈ葜? mL[9]。以蒸餾水作空白，在264 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度 A值。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 A＝0.644 6C-0.048 5，r＝0.999 2（n＝8）。結(jié)果表明，苦杏仁苷質(zhì)量濃度在0.1～0.8 g/L范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取苦杏仁2號(hào)供試品溶液5 mL，置50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，離心，取上清液，在264 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。結(jié)果 6 次試驗(yàn)吸光度 A值為 0.315，0.313，0.314，0.316，0.312，0.313，平均 0.313，RSD ＝ 0.47% （n ＝6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取苦杏仁2號(hào)供試品溶液5 mL，置50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，離心，取上清液在264 nm波長(zhǎng)處間隔一定時(shí)間測(cè)定吸光度。結(jié)果 0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，15.0，20.0，25.0，30.0，35.0，40.0，45.0 h 內(nèi) 的 平 均 吸 光 度 值 為 0.311，RSD＝0.57%（n＝12），表明供試品溶液在45 h內(nèi)吸光度基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取苦杏仁樣品約10 g，精密稱(chēng)定，依法操作，平行制備6份供試品溶液并測(cè)定吸光度。結(jié)果吸光度 A值分別 為 0.327，0.318，0.323，0.306，0.311，0.315， 平 均 0.317，RSD ＝2.44%（n＝6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取苦巴旦杏仁供試品溶液5 mL，置50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，離心，取等體積5 mL的5份上清液，分別加入0.5～2.5 mg的苦杏仁苷對(duì)照品，于264 nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.5 樣品含量測(cè)定

分別從上述4種供試品溶液中各取5 mL，置50 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，離心，取上清液在264 nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，并計(jì)算其中苦杏仁苷的含量。結(jié)果見(jiàn)表2。可見(jiàn)，苦杏仁中2號(hào)即沸水煮10 min滅酶效果最佳，苦杏仁苷含量最高位2.80%，苦杏仁中苦杏仁苷含量均高于苦巴旦杏仁。

表1 苦杏仁苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝5）

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

苦杏仁中含有苦杏仁酶，在提取苦杏仁苷過(guò)程中，酶會(huì)將苦杏仁苷水解[10]，降低提取率。因此，選擇合適的滅酶方法是決定提取率高低的影響因素之一。本試驗(yàn)中進(jìn)行了同一品種杏仁采用不同滅酶方法、不同品種杏仁采用同一滅酶方法對(duì)苦杏仁苷提取率的影響試驗(yàn)，結(jié)果顯示，不同的滅酶方法對(duì)杏仁中的苦杏仁苷含量有影響。

苦杏仁和苦巴旦杏中含有脂質(zhì)成分，在樣品處理過(guò)程中，若有脂質(zhì)成分的存在，會(huì)把苦杏仁苷包裹在內(nèi)，從而使得苦杏仁苷提取不完全。本試驗(yàn)中采用了石油醚進(jìn)行脫脂。大多文獻(xiàn)顯示用乙醚[11]或苯來(lái)脫脂，但乙醚和苯具有強(qiáng)的揮發(fā)性，且苯還具有毒性，二者對(duì)環(huán)境有污染作用且脫脂不完全，相比較而言，石油醚的脫脂效果較二者好。

在采用紫外分光光度法進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)，有文獻(xiàn)用甲醇作為溶劑。雖然苦杏仁苷在甲醇中溶解性較好，但在苦杏仁苷的最大吸收波長(zhǎng)處甲醇也顯示有吸收，會(huì)影響到苦杏仁苷的含量測(cè)定。為此，采用水作為溶劑?？嘈尤受赵谒械娜芙舛容^好，不會(huì)影響苦杏仁苷的含量測(cè)定。

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