王良才 姜黎明 康子騰 柳陳堅(jiān) 李曉然 羅義勇

摘 要：植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum）是發(fā)酵食品中常見的一種益生菌，群體感應(yīng)（quorum sensing，Qs）是細(xì)菌進(jìn)行信號(hào)交流的一種普遍方式，Lb.plantarum是否通過(guò)QS介導(dǎo)著其益生特性尚不清楚。為了探索Lb.plantarum AY01是否通過(guò)AI-2/LuxS QS系統(tǒng)介導(dǎo)其對(duì)常見食源性病原菌的抑制，首先運(yùn)用半定量PCR方法，研究了AY01在不同生長(zhǎng)階段luxS基因（合成Qs信號(hào)分子AI-2的關(guān)鍵基因）的表達(dá)情況；然后，利用牛津杯抑菌法研究了AY01對(duì)食源性病原菌腸出血性大腸桿菌（enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）0157：H7、單核細(xì)胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）和金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的抑菌效果。研究發(fā)現(xiàn)：1）Lb.plantarum AY01 luxS基因在指數(shù)早期沒有表達(dá)，指數(shù)中期出現(xiàn)表達(dá)，指數(shù)末期表達(dá)量明顯增加，并于穩(wěn)定中期達(dá)到最大值；2）AY01培養(yǎng)上清液對(duì)EHEC 0157：H7、L.monocytogenes、S.aureus均有抑茵效果，抑菌效果與；luxS基因表達(dá)趨勢(shì)一致，即隨AY01生長(zhǎng)時(shí)間的增加抑菌呈現(xiàn)增加變化，到穩(wěn)定期達(dá)到最大抑茵效果。結(jié)果表明，Lb.plantarum AY01可能通過(guò)AI-2/LuxS QS系統(tǒng)介導(dǎo)其對(duì)常見食源性病原菌的抑制。

關(guān)鍵詞：植物乳桿菌；luxS基因；表達(dá)；抑茵；群體感應(yīng)

中圖分類號(hào)：Q786

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1007-7847（2014）03-0199-06

乳桿菌（Lactobacillus）是乳酸菌（lactic acidbacteria，LAB）最大的一個(gè)屬，因其形態(tài)呈桿狀或球狀以及能發(fā)酵碳水化合物（主要為葡萄糖）并產(chǎn)生大量乳酸而得名[1]。作為乳桿菌一個(gè)主要的種，植物乳桿菌（Lb.plantarum）具有很多益生功能[2]，其中對(duì)病原菌的抑制功能得到了最廣泛的研究。2011年Moslehi-Jenabian等[3]將病原菌單核細(xì)胞增生李斯特菌（Listeria mono-cytogenes）與嗜酸乳桿菌（Lb.acidophilus）NCFM共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)L.monocy-togenes生長(zhǎng)明顯受到影響，而Lb.acidophilusNCFM的生長(zhǎng)幾乎沒有變化，說(shuō)明Lb.acidophilusNCFM對(duì)病原菌L.monocytogenes具有很好的抑菌效果。Kim等[4]研究發(fā)現(xiàn)，Lb. acidophilus A4除了能抑制L.monocyogenes的生長(zhǎng)外，對(duì)腸出血性大腸桿菌（enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）0157：H7同樣具有抑制功能。此外，本實(shí)驗(yàn)室之前的研究顯示，Lb.plantarum，是一種具有廣譜抑菌性的乳酸菌，不僅能抑制同種或近親源關(guān)系的細(xì)菌，還能抑制大多數(shù)病原菌如E.coli、L.mono-cytogenes、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）和鼠傷寒沙門氏菌（Sal-monella typhimurium）等菌株[5，6]。

群體感應(yīng)（quorum sensing，QS）是細(xì)菌間通過(guò)化學(xué)信號(hào)分子進(jìn)行信息傳遞的一種形式。根據(jù)細(xì)菌信號(hào)分子種類的不同，QS系統(tǒng)可分為4種代表性的類型：1）革蘭氏陽(yáng)性（G+）細(xì)菌中的種內(nèi)信號(hào)通訊使用的語(yǔ)言是寡肽；2）革蘭氏陰性fG）細(xì)菌利用?；呓z氨酸內(nèi)酯作為信號(hào)分子實(shí)現(xiàn)種內(nèi)細(xì)胞通訊；3）許多革蘭氏陰性菌還可以使用擴(kuò)散信號(hào)因子系統(tǒng)來(lái)調(diào)節(jié)多種生物學(xué)功能，例如毒力和生物膜形成等[7]；4）不同種的細(xì)菌之間也能進(jìn)行交流，交流所用的語(yǔ)言是AI-2，這種信號(hào)分子存在于大多數(shù)細(xì)菌中，是許多細(xì)菌進(jìn)行種內(nèi)和種間交流的通用語(yǔ)言[8.9]。AI-2在細(xì)菌體內(nèi)由LuxS催化合成，LuxS基因廣泛存在于G+和G-細(xì)菌中，且具有很高的保守性[10]。代謝學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，LuxS是細(xì)菌硫代謝中甲基循環(huán)中一個(gè)代謝酶，在代謝過(guò)程中AI-2作為副產(chǎn)物被合成，所以LuxS肩負(fù)著代謝和信號(hào)傳遞的雙重功能[11，12]。

AI-2/LuxS QS系統(tǒng)介導(dǎo)乳酸菌發(fā)揮益生特性已有一定研究。Moslehi-Jenabian等[13]發(fā)現(xiàn)luxS基因可能參與某些Lactobacillus的酸適應(yīng)過(guò)程，使細(xì)菌可以通過(guò)胃腸道而存活下來(lái)，并且在腸道微生態(tài)系統(tǒng)中可能在細(xì)菌與細(xì)菌之間的交流中具有一定作用。Buck等[11]得出AI-2/LuxS QS系統(tǒng)在Lb.acidophilus粘附腸表皮，定植腸道過(guò)程中具有重要作用；Lebeer等[14]研究推測(cè)AI-2/LuxS QS系統(tǒng)可能與Lactobacillus在動(dòng)物消化道中的適應(yīng)性密切相關(guān)。AI-2/LuxS QS系統(tǒng)與LAB抑菌的相關(guān)性研究很少。據(jù)報(bào)道，一些G+細(xì)菌能夠通過(guò)QS系統(tǒng)激活Lb. plantarum特異信號(hào)途徑，增加細(xì)菌素（一種具有抑菌作用的多肽）產(chǎn)量[15，16]。Man等[17，18]不僅發(fā)現(xiàn)4種LAB（稱為誘導(dǎo)LAB）與Lb. plan-tarum， KLDSl.0391共培養(yǎng)能使Lb.plantarumKLDSl.0391的細(xì)胞數(shù)增多，同樣能顯著提高Lb.plantarum KLDSl.0391產(chǎn)生細(xì)菌素的能力；以此為基礎(chǔ)，通過(guò)進(jìn)一步基因敲除和表達(dá)研究，他們建立了AI-2/LuxS QS系統(tǒng)介導(dǎo)Lb. plantarum KLDS-1.0391細(xì)菌素產(chǎn)生的模型：誘導(dǎo)LAB作為環(huán)境刺激被Lb. plantarum， KLDSl.0391識(shí)別，導(dǎo)致Lb.plantarum KLDSl.0391細(xì)胞數(shù)顯著增加，造成LuxS合成的信號(hào)分子AI-2的大量積累，當(dāng)該濃度達(dá)到一定閾值時(shí)，它能夠開啟下游調(diào)節(jié)元件的轉(zhuǎn)錄，調(diào)控細(xì)菌素編碼基因合成細(xì)菌素。

在前期的研究中，我們從云南石林路南鮮羊奶中，分離鑒定了一株益生效果較好的乳桿菌。16S rRNA基因測(cè)序鑒定其為L(zhǎng)b. plantarum，命名為AY01，并且利用焦磷酸測(cè)序策略測(cè)定了其全基因組序列[19]。本研究以Lb. plantarum AY01為實(shí)驗(yàn)材料，首先制作它的生長(zhǎng)曲線，然后選取跟細(xì)菌QS密切相關(guān)的指數(shù)早期（4.5h）、指數(shù)中期（12h）、指數(shù)晚期（18h）和穩(wěn)定中期（27h）4個(gè)點(diǎn)為研究對(duì)象，應(yīng)用半定量PCR方法和牛津杯抑菌法分別測(cè)定其在這4個(gè)點(diǎn)的luxS基因表達(dá)水平和對(duì)常見食源性病原菌EHEC 0157：H7、L monocytogenes、S.aureus的抑制情況，探討Lb.plantarum AY01luxS基因表達(dá)與抑菌的相關(guān)性，為AI-2/LuxS QS系統(tǒng)介導(dǎo)乳桿菌的抑菌關(guān)系提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1菌株與培養(yǎng)基

Lb.pLantarum AY01由本實(shí)驗(yàn)室從云南石林路南鮮羊奶中分離獲得。常見食源性病原菌E-HEC 0157：H7、L monocytogenes、S.aureus為本實(shí)驗(yàn)室保存菌株。Lb.plantarum培養(yǎng)用MRS培養(yǎng)基（Oxoid，英國(guó)），E.coli用營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（杭州天河微生物試劑有限公司，中國(guó)），L.monocytoge-nes、S.aureus用腦心浸液肉湯培養(yǎng)基（青島高科園海博生物技術(shù)有限公司，中國(guó)）培養(yǎng)。

1.2生長(zhǎng)曲線和產(chǎn)酸試驗(yàn)

首先從-80℃冰箱中取出Lb.plantarumAY01種子液，然后按4‰（V/V）接種于MRS液體培養(yǎng)基中，30℃活化24h后，同樣按4‰（V/V）接種到新鮮的MRS液體培養(yǎng)基中，30℃靜止培養(yǎng)。隔1.5h取樣（0～36h），利用分光光度計(jì)測(cè)定600nm波長(zhǎng)處的吸光值（OD6oo），同時(shí)利用pH計(jì)測(cè)定各樣品的pH值。以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，OD6oo和pH為縱坐標(biāo)，制作Lb.plantarum AY01生長(zhǎng)曲線和產(chǎn)酸趨勢(shì)圖。

1.3生長(zhǎng)階段luxS基因表達(dá)分析

1.3.1cDNA第一條鏈的合成

依據(jù)Lb.plantarum AY01生長(zhǎng)曲線，用RNAprep pure培養(yǎng)細(xì)胞/細(xì)菌總RNA提取試劑盒（TIANGEN，中國(guó)）提取其指數(shù)早期（a點(diǎn)，培養(yǎng)4.5h）、指數(shù)中期（b點(diǎn)，培養(yǎng)12h）、指數(shù)晚期（c點(diǎn)，培養(yǎng)18h）和穩(wěn)定中期（d點(diǎn)，培養(yǎng)27h）4點(diǎn)的菌體總RNA，利用瓊脂糖凝膠電泳和吸光值測(cè)定法分別分析總RNA的完整性、純度和濃度。最后，以總RNA為模板，利用mRNA selective PCR kit （TAKARA，日本）進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，生成第一條鏈cDNA。

1.3.2引物設(shè)計(jì)

選取看家基因16S rRNA基因作為相對(duì)半定量的內(nèi)參照基因。根據(jù)Lb.plantarum AY01全基因組序列[19]，利用引物設(shè)計(jì)軟件Primer Premier5.0（PREMIER Biosoft International，美國(guó)），設(shè)計(jì)擴(kuò)增16S rRNA和luxS基因的引物（表1）。引物由上海生工生物有限公司合成。

1.3.3相對(duì)半定量測(cè)定luxS基因表達(dá)

以逆轉(zhuǎn)錄得到的單鏈cDNA為模板，按照mlRNA selective PCR kit （TAKARA，日本）說(shuō)明書進(jìn)行相對(duì)半定量分析。首先調(diào)節(jié)內(nèi)參16S rRNA基因PCR時(shí)的cDNA加樣量，通過(guò)較少循環(huán)數(shù)PCR擴(kuò)增（85℃ 1 min；54.8℃ 1 min；72℃1min，25個(gè)循環(huán)），使PCR產(chǎn)物濃度在a、b、c、d 4點(diǎn)相同（利用GeneTools from SynGene軟件（Syngene，英國(guó)）測(cè)定瓊脂糖凝膠中PCR產(chǎn)物的濃度），記錄a、b、c、d 4點(diǎn)相應(yīng)的模板cDNA加樣量。然后，按照上一步相同的cDNA加樣數(shù)加量，同樣利用較少循環(huán)數(shù)PCR擴(kuò)增（90℃l min；52.5 ℃ 1 min；72℃lmin，25個(gè)循環(huán)）a、b、c、d 4點(diǎn)的luxS基因，最后通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳與GeneTools fromSynGene軟件測(cè)定和分析luxS基因在a、b、c、d 4點(diǎn)相對(duì)表達(dá)量。

1.4抑菌試驗(yàn)

Lb.plantarum AY01種子液經(jīng)活化培養(yǎng)后，按40‰ （V/V）接種到新鮮的MRS液體培養(yǎng)基中，30℃靜止培養(yǎng)至a、b、c、d 4點(diǎn)，9000r/min離心2min，收集上清液和菌體。菌體用1mL無(wú)菌水懸浮后用細(xì)胞破碎儀破碎（程序?yàn)椤霸?5℃下，按60%總功率，超聲開3.5s，關(guān)9s”處理5min）。上清液和菌體破碎液通過(guò)牛津杯法進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)：首先，將滅菌好的2%水瓊脂倒入直徑為90mm的平板中，凝固后，將4個(gè)無(wú)菌牛津杯垂直放置在同一個(gè)平板上；然后，將含有約l.Oxl06cfu/mL食源性病原菌的培養(yǎng)基小心倒人上述平板中，凝固后，用滅菌鑷子夾出牛津杯；最后，分別取250μL上清液和菌體破碎液加入到牛津杯孔中，30℃過(guò)夜培養(yǎng)后（約15h），用尺子按垂直測(cè)量的方法測(cè)定抑菌圈直徑，取兩次垂直測(cè)量值的平均數(shù)。每個(gè)樣品做3個(gè)平行平板，3個(gè)平板的平均值作為最終的抑菌值[20]。

2結(jié)果

2.1生長(zhǎng)曲線和pH相關(guān)曲線

以培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，以O(shè)D600和pH值為縱坐標(biāo)，制作Lb.plantarum AY01的生長(zhǎng)曲線和產(chǎn)酸曲線，結(jié)果顯示AY01具有典型微生物生長(zhǎng)曲線特征（圖1）。在O～3h，AY01的OD600≈0，說(shuō)明AY01在該時(shí)間段處于延滯期；隨后AY01進(jìn)入指數(shù)期，3～4.5h處于指數(shù)早期，4.5～12h處于指數(shù)中期，12～18h處于指數(shù)晚期；大約從18h開始，AY01生長(zhǎng)進(jìn)入穩(wěn)定期，持續(xù)時(shí)間約為22h（18～36h）；最后OD600有下降的趨勢(shì)，說(shuō)明AY01開始進(jìn)入衰亡期（圖1）。Lb.plantarum AY01培養(yǎng)液的pH值具有和生長(zhǎng)曲線完全相反的特征（圖1）。在0～3h，pH穩(wěn)定維持在6.5；在3～18h時(shí)間段，pH值處于迅速下降狀態(tài)，由6.29下降到3.86；18h后，AY01培養(yǎng)液pH處于一個(gè)穩(wěn)定的低pH值狀態(tài)，pH≈3.8。

2.2生長(zhǎng)階段luxS基因表達(dá)分析

2.2.1RNA提取與分析

2%瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示，a、b、c、d 4點(diǎn)沒有降解，且都具有清晰的兩條帶，根據(jù)Marker可判斷該兩條帶分別為23S、16S rRNA（圖2A）。此外，利用分光光度計(jì)測(cè)定a、b、c、d 4點(diǎn)的A260/A280比值分別為1.876、1.959、1.871、1.856，說(shuō)明有微量DNA污染。因?yàn)閙RNA selective PCR kit能去除少量DNA的干擾，所以對(duì)該RNA不需DNA酶處理，直接進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。

2.2.2 16S rRNA基因內(nèi)參設(shè)定

運(yùn)用半定量PCR方法擴(kuò)增內(nèi)參16S rRNA基因，確定a、b、c、d 4點(diǎn)內(nèi)參16S rRNA PCR擴(kuò)增量相同時(shí)模板cDNA的加樣量。通過(guò)結(jié)果分析得知，當(dāng)a、b、c、d 4點(diǎn)分別加1.26、1.52、1.05、0.94 μL模板后，其PCR擴(kuò)增條帶亮度基本一致（圖2B）。

2.2.3luxS基因表達(dá)分析

根據(jù)內(nèi)參設(shè)定結(jié)果，在luxS基因PCR擴(kuò)增過(guò)程中，a、b、c、d 4點(diǎn)分別加入1.26、1.52、1.05、0.94 μL的模板cDNA，經(jīng)25個(gè)循環(huán)后，發(fā)現(xiàn)Lb.plantarum， AY01 luxS基因的表達(dá)水平隨生長(zhǎng)時(shí)間的增加呈遞增趨勢(shì)，即指數(shù)早期沒有表達(dá)，指數(shù)中期出現(xiàn)表達(dá)，相對(duì)表達(dá)量約為10，指數(shù)晚期表達(dá)量明顯增加，相對(duì)表達(dá)量約為39.5，穩(wěn)定期表達(dá)達(dá)到最大值，相對(duì)表達(dá)量約為48.5 （圖2C、D）。

通過(guò)DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)一單因素試驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果顯示luxS基因a、b、c、d 4點(diǎn)表達(dá)量相互之間存在顯著性差異（n=3，P<0.0）（圖中*的多少表示它們之間具有顯著性差異）。

2.3抑菌結(jié)果

Lb.plantarum AY01上清液對(duì)EHEC 0157：H7、L.monocytogenes、S.aureus均有抑菌效果，且具有隨著生長(zhǎng)時(shí)間的增加呈增大變化的特征（表2）。另外，AY01菌體在a、b、c、d 4點(diǎn)對(duì)3種病原菌（EHEC 0157：H7、L.monocytogenes、S.aureus）都沒有抑菌效果（結(jié)果未顯示1，說(shuō)明AY01的抑菌物質(zhì)可能主要是分泌型代謝產(chǎn)物或酶。

注：a：AYOl指數(shù)早期（培養(yǎng)4.5 h），b：AYOl指數(shù)中期（培養(yǎng)12h）；c：AY01指數(shù)晚期（培養(yǎng)18h）；d：AYOl穩(wěn)定中期（培養(yǎng)27h）。

Notes：a：AYOl early exponential phase （cultured 4.5h）；b：AY01 middle exponential phase （cultured 12h）；c：AYOl lateexponential phase （cultured 18h）；d：AYOl middle stationaryphase （cultured 27h）.

3討論

早在2010年，我們實(shí)驗(yàn)室從云南石林路南鮮羊奶中分離得到了一種益生效果較好的乳酸菌，16S rRNA基因序列分析證明其是植物乳桿菌，我們將該菌株命名為L(zhǎng)b. plantarum AY01。目前，AY01的全基因組序列已經(jīng)測(cè)序完成[19]。本文研究發(fā)現(xiàn)，Lb.plantarum AY01 luxS基因表達(dá)在指數(shù)中期出現(xiàn)，隨著生長(zhǎng)的進(jìn)行，表達(dá)水平一直增加，至穩(wěn)定中期達(dá)到最大值。Moslehi-Jenabian等[13】在研究AI-2/LuxS QS系統(tǒng)與Lactobacillus酸適應(yīng)關(guān)系中發(fā)現(xiàn)了相似結(jié)果，即隨著Lactobacillus生長(zhǎng)的進(jìn)行，細(xì)胞數(shù)逐漸增多，造成的結(jié)果為luxS基因的表達(dá)水平和其合成產(chǎn)物-QS信號(hào)分子AI-2活性的逐漸增加，并于穩(wěn)定期達(dá)到最大值?；贚b.plantarum AY01的生長(zhǎng)曲線和luxS基因表達(dá)相一致的趨勢(shì)（當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)到一定數(shù)量時(shí)luxS基因才出現(xiàn)表達(dá)，并且隨著生長(zhǎng)的進(jìn)行，溶液中細(xì)胞濃度的增加，luxS基因表達(dá)也相應(yīng)增加）以及l(fā)uxS基因編碼產(chǎn)物能合成QS信號(hào)分子AI-2的背景知識(shí)[11]，說(shuō)明luxS基因與Lb.plantarum AY01QS密切相關(guān)。在AYOI的生長(zhǎng)過(guò)程中，luxS基因表達(dá)水平的增加是因?yàn)锳Y01細(xì)胞數(shù)量的增加引起的，還是隨著合成的AI-2分子數(shù)目越來(lái)越多，最終啟動(dòng)QS系統(tǒng)，而該QS系統(tǒng)又能促進(jìn)luxS基因的表達(dá)這樣一種模型，還需要更深一步的研究，這也是我們下一步研究的方向。

牛津杯抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Lb.plantarumAY01上清液的抑菌效果隨著生長(zhǎng)進(jìn)行也呈現(xiàn)增強(qiáng)變化。這與Lee[2l]的一本書中講到的類似，即乳酸菌與E.coli、L.monocytogenes、S.aureus等病原菌共培養(yǎng)時(shí)，隨著生長(zhǎng)進(jìn)行乳酸菌的數(shù)量明顯增加，而病原菌的數(shù)量明顯減少并最終消失。在本實(shí)驗(yàn)中，隨著Lb.plantarum AY01生長(zhǎng)的進(jìn)行，細(xì)胞的濃度越來(lái)越高，luxS基因的表達(dá)量也隨之增加；在該過(guò)程中，AY01上清液對(duì)3種常見食源性病原菌的抑菌效果（EHEC 0157：H7、L.monocyto-genes、S.aureus）也越來(lái)越明顯，說(shuō)明AYOl luxS基因表達(dá)可能與其抑菌相偶聯(lián)；此外，由產(chǎn)酸曲線得知，隨著AY01生長(zhǎng)的進(jìn)行，pH值呈現(xiàn)顯著下降，于18h后達(dá)到一個(gè)穩(wěn)定的低pH值狀態(tài)，說(shuō)明在該過(guò)程中，AY01的產(chǎn)酸量越來(lái)越多。由我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果以及Moslehi-Jenabian[3].Diep[l5，16]和Man等[17，18]的前期研究，我們可以做如下推測(cè)：Lb.pLantarum AY01 luxS基因不但與QS密切相關(guān)，而且可能與發(fā)揮抑菌效果也有很大的關(guān)系，并且這些抑菌物質(zhì)很可能是某些酸類或者細(xì)菌素等。Lb. plantarum AY01可能通過(guò)AI-2/LuxS QS系統(tǒng)調(diào)節(jié)著酸或者細(xì)菌素等物質(zhì)的合成和分泌，最終介導(dǎo)著其對(duì)常見食源性病原菌的抑制。

參考文獻(xiàn)（References）：

[1]劉振民，駱承庠，乳酸菌發(fā)酵劑生物工程技術(shù)[J]食品與發(fā)酵工業(yè)（LIU Zhen-min， LUO Cheng-xiang. Progress in biotech—nology of lactic acid bacteria starter culters[J].Food and Fer-mentation Industries）， 2000， 26（4）： 68-72.

[2]劉振民.乳酸菌益生特性及應(yīng)用[C].杭州：中國(guó)奶業(yè)協(xié)會(huì)（LIUZhen-min. Lactic acid bacteria probiotic properties and appli-cations[C]. Hangzhou： China Dairy Industry Association）， 2009199-201.

[3]MOSLEHI-JEIANENAB S，VOGENSEN F，JESPERSEN L.The quorum sensing luxS gene is induced in Lactobacillusacidophilus NCFM in response to Listeria mnnocytogenes[J].In-ternational Journal of Food Microbiology， 2011， 149（3）： 269-273.

[4]KIM Y，OH S，PARK S，et al.Lactobacillus acidophilus re-duces expression of enterohemorrhagic Escherichia coli O157：H7 virulence factors by inhibiting autoinducer-2-like activity[J].Food Control，2008， 19（11）： 1042-1050.

[5]熊濤，宋蘇華，黃濤，等，植物乳桿菌NCU116抑菌性能的研究[J].食品與發(fā)酵工業(yè)（XIONC Tao， SONC Su-hua，HUANGTao， et al.Antibacterial experimenb of Lactobacillus plan一tarum NCU116[J]. Food and Fermentation Industries）， 2012， 38（6）： 97-101.

[6] 熊駿.云南傳統(tǒng)發(fā)酵豆豉由來(lái)乳酸菌中主要有機(jī)酸的測(cè)定及其抑菌效果研究[D].昆明：昆明理工大學(xué)（XIONC Jun.Analy-sis of major organic acids from Laetic acid bacteria isolatedfrom Yunnan traditional fermented Douchi and study on bacteriostasis[D]. Kunming： Kunming Univcrsity of Science and Tech-nology）， 2011.

[7]DENG Y Y，WU J E，TAO F，et al Listening to a new lan-guage： DSF-based quorum sensing in gram-negative bacteria[J].Chemical Reviews， 2011，111（1）：160-173

[8]趙麗萍，金黃色葡萄球菌AI-2群體感應(yīng)系統(tǒng)的調(diào)控[D].合肥：中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué) （ZHANG Li-ping. AI-2 quorum sensing regulation in Staphylococcus aureus[D]. Hefei： University ofScience and Technology of China）， 2010.

[9]CHEN X. SCHAUDER S， POTIER N， et al. Structural identi-fication of a bacterial quorum sensing signal containing boron[J].Nature， 2002， 415（6871）：545-549.

[10]de KEERSMAECKER S C J， SONCK K， VANDERLEYDEN J.Let LuxS speak up in AI-2 signaling[J]. Trends in Microbiolo-gy， 2006，14（3）：114-119.

[11]BUCK B L. AZCARATE-PERIL M A， KLAENHAMMER T R.Role of autoinducer-2 0n the adhesion ability of Lactobacillusacidophilus[J]. Journal of Applied Microbiology， 2009， 107（1）：269-279.

[12]di CAGNO R， de ANGELIS M， CALASSO M， et al. Proteomicsof the bacterial cross-talk by quorum sensing[J]. Journal of Pro-teomics，2011，74（1）：19-34.

[13]MOSLEHI-JENABIAN S， GORI K， JESPERSEN L.AI-2 sig-naling is induced by acidic shock in probiotic strains of Lacto-bacillus spp[J]. International Journal of Food Microbiology， 2009，135（3）：295-302.

[14]LEBEER S. CSLAES I J J， VERHOEVEN T L A， et al. Im-pact of luxS and suppressor mutations on the gastrointestinaltransit of Lactobacillus thamnosus GG[J]. Applied and Environ-mental Microbiology， 2008， 74（15）：4711-4718.

[15]DIEP D B， MATHIESEN G， EIJSINK V G H， et al. Use ofLactobacilli and their pheromone-based regulatory mechanismin gene expression and drug delivery[J]. Current Pharmaceuti-cal Biotechnology， 2009， 10（1）：62-73.

[16]DIEP D B， STRAUME D， KIOS M， et al. An overview of themosaic， bacteriocin pln loci from Lactobacillus plantarum[J].Peptides， 2009， 30（8）：1562-1574.

[17]MAN L L， MENGX C， ZHAO R H. Induction of plantaricinMG under co-culture with certain lactic acid bacterial strainsand identification of LuxS mediated quorum sensing system inLactobacillus plantarum KLDSl. 0391[J]. Food Control， 2012，23（2）：462-469.

[18]MAN L L， MENG X C， ZHAO R H， et al. The role ofplNC8HK-plnD genes in bacteriocin production in Lacto-bacillus plantarum KLDSl. 0391[J]. International Dairy Journal，2014，34（2）：267-274.

[19]LI X R， GONG F M， ZHENG H J， et al. Draft genome se-quence of Lactobacillus plantarum strain AY01 from freshgoatso' milk[J]. Genome Announcements， 2013，1（5）：1.

[20]錢存柔，黃儀秀.微生物學(xué)試驗(yàn)教程[M].北京：北京大學(xué)出版社

（QIN Cun-rou， HUANG Yi-xiu. Microbiology Course[M]. Bei-jing： Peking University Press）， 1999.176-182.

[21]LEE C H. Fermebtation Technology in Korea[M]. Seoul： KoreaUniversity Press， 2001.