韓麗

【摘 要】 目的：分析順鉑對宮頸癌細(xì)胞系Hela的細(xì)胞毒性和輻射增敏作用，以及射線與順鉑聯(lián)合應(yīng)用時(shí)的效應(yīng)關(guān)系。方法：采用MTT法檢測Hela細(xì)胞在不同濃度和輻射劑量下的細(xì)胞抑制作用；當(dāng)輻射和順鉑聯(lián)合應(yīng)用時(shí)，檢測細(xì)胞抑制率，分析順鉑與輻射聯(lián)合應(yīng)用時(shí)協(xié)同效應(yīng)的條件。結(jié)果：細(xì)胞抑制率隨藥物濃度增加而增大；單純輻射組細(xì)胞抑制率隨著劑量增加而增加；單純順鉑組細(xì)胞抑制率隨著濃度增加而增加；輻射+順鉑組細(xì)胞抑制率隨著輻射劑量增加而升高；結(jié)論：順鉑和輻射聯(lián)合應(yīng)用對宮頸癌Hela細(xì)胞增殖有明顯的抑制效果，建議應(yīng)盡早的應(yīng)用順鉑增敏化療。

【中圖分類號】 R965.1 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】 A 【文章編號】 1671-8801（2014）03-0302-01

順鉑是臨床中最常用的化療增敏藥物之一，目前國內(nèi)外的眾多臨床治療之中普遍采用同步放化療的綜合治療模式，通過應(yīng)用小劑量的化療藥物，增加放射線對腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。但是，化療藥物和放射線都對細(xì)胞有著嚴(yán)重的毒副作用，使臨床中的多數(shù)患者難以接受。此次研究實(shí)驗(yàn)，只要針對輻射劑量與順鉑濃度之間的影響效應(yīng)。

1 資料與方法

1.1 Hela細(xì)胞對順鉑敏感性的測定

將Hela細(xì)胞懸液接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔100μL。參考研究報(bào)道[1]將順鉑確定從低到高8個(gè)濃度。培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，實(shí)驗(yàn)孔中加入適量藥物培養(yǎng)24h。終止培養(yǎng)后每孔加入20μLMTT試劑，混均后繼續(xù)培養(yǎng)4h。棄上清、加入150μL二甲基亞砜，震蕩儀震蕩20min，酶標(biāo)儀上490nm波長檢測各孔吸光度值，每組取5個(gè)復(fù)孔的平均值，通過公式計(jì)算細(xì)胞抑制率[2]。細(xì)胞移植率=1-（實(shí)驗(yàn)組吸光度值/對照組吸光度值）×100%，計(jì)算半數(shù)致死濃度（IC50）值。

1.2 照射方法

所有照射均勻室溫下照射，采用6MV-X線，劑量率4Gy/min，分別一次性給予各實(shí)驗(yàn)組6、8、10、12、14、15Gy和0、4、8、12Gy輻射劑量，源板距100cm。

1.3 MTT法測定順鉑的輻射增敏性

將細(xì)胞分為4組，空白對照組、單純輻射組、單純順鉑組、輻射+順鉑組?？瞻讓φ战M只加細(xì)胞與培養(yǎng)；單純輻射組按輻射劑量為6、8、10、12、14、15Gy共6個(gè)組；單純順鉑組藥物濃度根據(jù)順鉑IC50值，確定順鉑濃度分別為1、2、5、8、10μg/mL；輻射+順鉑組輻射劑量和藥物濃度分別如單純輻射組劑量和單純鉑組濃度，共30組，每組設(shè)5個(gè)平行樣本。測定各組吸光度值后通過公式計(jì)算細(xì)胞抑制率。

1.4 集落形成法觀察順鉑對Hela細(xì)胞的輻射增敏作用

按輻射劑量0、4、8、12Gy分為4個(gè)組，于25mL培養(yǎng)瓶中分別接種一定數(shù)量的細(xì)胞，每組分別設(shè)單純輻射組、輻射+2μg/mL順鉑（待細(xì)胞貼壁后加入順鉑，使其終濃度為20%IC50[3]），每組設(shè)3個(gè)平行樣本。存活分?jǐn)?shù)的計(jì)算方法為：實(shí)驗(yàn)組克隆形成率/對照組克隆形成率，采用“多靶單擊模型”擬合細(xì)胞存活曲線，計(jì)算輻射增敏比。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS17.0軟件處理，數(shù)據(jù)符合正態(tài)性和方差齊性，且是多組比較，故進(jìn)行方差分析，Graphad prism擬合細(xì)胞存活曲線，MATLAB繪制抑制率曲線圖，協(xié)同效應(yīng)分析時(shí)將實(shí)驗(yàn)所得值與理論值進(jìn)行t檢驗(yàn)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Hela細(xì)胞對藥物的敏感性

細(xì)胞抑制率隨藥物濃度增加而增大，通過Graph-ad prism軟件求得順鉑的IC50值為10μg/mL。

2.2 MTT法測定不同干預(yù)條件下的細(xì)胞抑制率

單純輻射組細(xì)胞抑制率隨著劑量增加而增加；單純順鉑組細(xì)胞抑制率隨著濃度增加而增加。輻射+順鉑組細(xì)胞抑制率隨著輻射劑量增加而升高；且在輻射后12、24、48h細(xì)胞抑制率隨著劑量增加而升高。根據(jù)此結(jié)果，選取輻射劑量為12Gy加藥物進(jìn)行分析，給予不同濃度的順鉑，顯示細(xì)胞抑制率隨著濃度增加而升高，當(dāng)濃度大于5μg/mL，曲線趨于平坦。組間總體比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2.3 藥物對Hela細(xì)胞曾敏作用的比較

將單純順鉑組與單純輻射組細(xì)胞抑制率相加的值與輻射+順鉑組試驗(yàn)所得值相比較，進(jìn)一步確定同步輻射與藥物是否有協(xié)同效應(yīng)。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析得當(dāng)輻射劑量小于10Gy時(shí)，輻射+順鉑實(shí)驗(yàn)所得值較理論差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

正常組織對于放射線的耐受力有限，輻射超過一定劑量，不僅難以提高腫瘤局部控制率，還會使正常組織發(fā)生放射性損傷的幾率增加。大量基礎(chǔ)研究和臨床實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，同步放化療能夠提高晚期宮頸癌患者的緩解率，延長無進(jìn)展生存期和總生存率，改善晚期宮頸癌患者預(yù)后，已成為晚期宮頸癌患者的常規(guī)治療方法。

研究認(rèn)為順鉑與放療起増敏作用的可能機(jī)制如下：順鉑是一種廣譜抗癌藥，具有直接破壞DNA復(fù)制的細(xì)胞毒作用，滅殺局部或全身部位可能存在的癌細(xì)胞，從而提高局部控制率和減少遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移；順鉑能抑制腫瘤細(xì)胞在放化療后產(chǎn)生的加速再增殖，可能使一些腫瘤細(xì)胞從放療不敏感的細(xì)胞周期進(jìn)入敏感期；含鉑類化療藥物可影響放射量-反應(yīng)曲線，抑制亞致死性損傷的修復(fù)具有明顯的放療増敏作用。但是，有關(guān)順鉑與輻射并用時(shí)所產(chǎn)生的生物學(xué)效應(yīng)有何不同及不同藥物劑量和不同輻射劑量之間存在怎樣的關(guān)系等很多相關(guān)問題目前少見文獻(xiàn)報(bào)道。

在本次研究中，輻射劑量小于10Gy時(shí)，隨著藥物濃度增加，輻射+順鉑組曲線與單純輻射組和單純藥物組相加曲線越來越靠近直到相交，且單純輻射組與單純順鉑組之和小于輻射+順鉑組的細(xì)胞抑制率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此，在宮頸癌治療中，輻射和化療藥物同步使用比單純輻射療效好，而且在保證同樣療效時(shí)降低了輻射劑量，可減小放射副作用。放療初期可同步實(shí)施増敏化療以保證協(xié)同效應(yīng)；但超過一定限度的輻射劑量和藥物濃度是不可取的。本研究結(jié)果是以體外培養(yǎng)Hela細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對象獲得的，但未考慮機(jī)體內(nèi)環(huán)境、藥物體內(nèi)代謝、藥物作用時(shí)間差等因素，與臨床尚有一定差異，所以相關(guān)的臨床最佳方案還有待進(jìn)一步探討。

參考文獻(xiàn)

[1]張文瓔，薛月珍，陶敏芳.順鉑和泰素對宮頸癌Hela細(xì)胞的抑制及放射增幅作用[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，30（2）：158-161.

[2]常萍，劉孜，王娟等.順鉑對Hela細(xì)胞輻射增敏的體外實(shí)驗(yàn)觀察[J].西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，32（4）：463-465.

[3]顏偉，丁國富，李斌等.CPG ODN 107增強(qiáng)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞放射敏感性的研究[J].中華腫瘤防治雜志，2007，14（7）；481-484.